金屬烤瓷修復(fù)齦溝白細(xì)胞動(dòng)態(tài)測(cè)定

1、金屬烤瓷修復(fù)齦溝白細(xì)胞動(dòng)態(tài)測(cè)定 金屬烤瓷冠（porcelain-fused-to-metal，PFM）兼有金屬的強(qiáng)度和瓷的美觀，在中國(guó)已被廣泛應(yīng)用于臨床，但很多患者在使用一段時(shí)間后出現(xiàn)牙齦紅腫、齦緣黑線等牙周損傷現(xiàn)象，嚴(yán)重影響了牙冠修復(fù)的長(zhǎng)期效果1。由于烤瓷鑄造合金在口腔內(nèi)可腐蝕釋放出離子沉積于牙體表面和牙齦2，對(duì)與其接觸的牙周組織造成一定的刺激，促進(jìn)牙齦炎癥發(fā)展3，這是引起修復(fù)后牙周損傷的重要因素。白細(xì)胞介素-8（inter-leukin-8，IL-8）是一種中性粒細(xì)胞功能調(diào)節(jié)因子，對(duì)牙周炎的發(fā)生、發(fā)展起到了重要影響。本研究通過觀察不同合金烤瓷冠修復(fù)前后齦溝液（gingivalcrevicu

2、larfluid，GCF）總量及GCF中IL-8水平的變化，初步探討不同合金烤瓷冠對(duì)牙周組織的影響程度，為臨床合理選擇金屬烤瓷冠提供參考。1材料和方法1.1病例選擇臨床隨機(jī)選取鎳鉻合金、鈷鉻合金、金合金烤瓷修復(fù)的患者共計(jì)45例，患牙45顆，每組各15例。研究均選取單冠修復(fù)的患者，年齡2545歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：1）牙齒修復(fù)前經(jīng)牙髓電活力檢測(cè)均為活髓牙，無根尖周、牙周炎癥狀及影像學(xué)改變；2）測(cè)試對(duì)象無全身急慢性系統(tǒng)病患，無口腔慢性疾患，有良好口腔衛(wèi)生習(xí)慣；3）3個(gè)月內(nèi)未服用抗菌素，未服用免疫抑制劑；4）婦女非妊娠期。由固定臨床醫(yī)師和口腔修復(fù)技術(shù)人員治療，制備牙體時(shí)不傷及牙齦組織，烤瓷冠邊緣與齦邊緣齊平

3、。1.2材料鎳鉻合金（Bego公司，德國(guó)）成分為Ni64.5%、Cr22%、Mo10%、Si2.1%、其他1.4%；鈷鉻合金（Bego公司，德國(guó)）成分為Co60.2%、Cr25%、Mo4.8%、W6.2%、Ga2.9%、其他0.9%；金合金（北京有研億金公司）成分為Au86.2%、Pt11.5%、Zn與Mn2.3%?？敬煞?、粘接劑（松風(fēng)株式會(huì)社，日本），臨時(shí)冠（DMG公司，德國(guó)），印模材料（賀利氏公司，德國(guó)），石膏粉（上海齒科材料廠），IL-8酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（en-zyme-linkedimmunosorbentassay，ELISA）試劑盒（上海森雄科技實(shí)業(yè)有限公司）。1.3方法分別在3組

4、金屬烤瓷冠修復(fù)前以及修復(fù)后1、3、6個(gè)月時(shí)，使用濾紙吸著法采集每組患牙的齦溝液。將2mm20mmWhatman（沃特曼）3號(hào)濾紙條置于干凈容器中待用。用無菌干棉球擦干牙面，以棉花卷隔濕，記錄菌斑指數(shù)（plaqueindex，PLI）。輕吹牙齦，將濾紙條插入烤瓷冠唇和舌（腭）側(cè)近、遠(yuǎn)中齦溝中，30s后取出，用游標(biāo)卡尺測(cè)量并記錄浸濕面積，剪去干燥部分，放入含200L0.1%BSA-PBS（pH=7.4）緩沖液的Eppendorf管中，每管放置同一樣本的3條濾紙，4下10000rmin-1離心10min，取上清液，-80冷藏待檢。1.4GCF的測(cè)定齦溝液成分與正常人血清相似，可根據(jù)正常人血清量與濾紙

5、浸濕面積的標(biāo)準(zhǔn)曲線來確定GCF的量。用進(jìn)樣器分別取正常人血清，以0.52.4L標(biāo)準(zhǔn)量滴于濾紙條一端，30s后用游標(biāo)卡尺測(cè)量濾紙浸濕長(zhǎng)度，換算為浸濕面積。計(jì)算正常人血清量與濾紙浸濕面積相關(guān)系數(shù)，并行直線相關(guān)t檢驗(yàn)，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線、樣本的濾紙面積計(jì)算GCF的量。1.5IL-8的測(cè)定將-80冷藏的Eppendorf管取出，室溫解凍，離心取上清液，采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定IL-8。反應(yīng)終止后用酶聯(lián)檢測(cè)儀測(cè)出光密度（opticaldensity，OD）值，IL-8量與OD值成正比，以標(biāo)準(zhǔn)品稀釋后作標(biāo)準(zhǔn)曲線，分別計(jì)算出3組金屬烤瓷冠在修復(fù)前以及修復(fù)后1、3、6個(gè)月時(shí)齦溝液樣本中IL-8的含量。IL-

6、8總量（pg）=IL-8檢測(cè)量洗提體積，IL-8含量（pgL-1）=IL-8總量/GCF量。2結(jié)果2.1GCF量標(biāo)準(zhǔn)曲線正常人血清量和濾紙浸濕面積呈直線性相關(guān)（圖1），r=0.987，P0.001。2.23組合金不同時(shí)期IL-8總量、GCF量、IL-8含量的比較按照IL-8標(biāo)準(zhǔn)品的OD值在半對(duì)數(shù)紙上作圖，畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖2）。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得出3組合金不同時(shí)期IL-8總量、GCF量、IL-8含量，并與修復(fù)前相比較，結(jié)果見表1。3組合金在修復(fù)后1個(gè)月的IL-8總量和GCF量與修復(fù)前相比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。鎳鉻合金在修復(fù)后3、6個(gè)月IL-8總量和GCF量與修復(fù)前相比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意

7、義（P0.05）。3組合金的IL-8含量在修復(fù)前后差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。3討論IL-8屬于內(nèi)源性趨化因子，也是誘導(dǎo)型細(xì)胞因子，中性白細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞、牙齦成纖維細(xì)胞、上皮細(xì)胞等均能產(chǎn)生IL-8。IL-8在免疫調(diào)節(jié)和炎癥過程中發(fā)揮雙重作用，可趨化并活化中性粒細(xì)胞，促進(jìn)溶酶體酶的活性和吞噬效應(yīng)，同時(shí)促進(jìn)中性粒細(xì)胞型和型補(bǔ)體受體的表達(dá)，參與免疫調(diào)節(jié)，促進(jìn)細(xì)胞黏附。有學(xué)者4用放射免疫技術(shù)發(fā)現(xiàn)：在有牙齦炎和牙周附著喪失的部位齦溝液中，IL-8的檢出率明顯高于在牙周健康部位齦溝液中IL-8的檢出率。另有學(xué)者5研究發(fā)現(xiàn)：牙周致病菌攜帶者齦溝液中IL-8的水平與齦炎指數(shù)、牙周袋

8、深度、出血指數(shù)顯著相關(guān)。齦溝液中IL-8水平變化能較好地早期顯示出牙周組織的炎癥反應(yīng)，可早于其他臨床指標(biāo)反映牙周組織健康程度。金屬基底冠腐蝕和金屬離子析出的臨床可表現(xiàn)為牙齦炎、牙齦出血、口腔異味、齦緣變黑等，若治療不及時(shí)將會(huì)導(dǎo)致不可逆的牙周破壞6。有學(xué)者7認(rèn)為：在嚴(yán)格保證修復(fù)體質(zhì)量的前提下，內(nèi)冠材料對(duì)牙周組織的影響可以忽略不計(jì)。也有學(xué)者2，8則發(fā)現(xiàn)不同的內(nèi)冠材料可引起不同的牙周損害。本研究結(jié)果顯示：3組合金在修復(fù)后1個(gè)月的IL-8總量和GCF量均較修復(fù)前差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05），說明3組合金內(nèi)冠材料在修復(fù)早期均存在對(duì)牙周組織的刺激；鎳鉻合金在修復(fù)后3、6個(gè)月IL-8總量和GCF量較修復(fù)前

9、差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.01），鈷鉻合金及金合金在修復(fù)后3、6個(gè)月IL-8總量和GCF量較修復(fù)前差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05），說明IL-8水平變化與不同合金烤瓷冠和戴入時(shí)間存在著相關(guān)性，3組合金在修復(fù)后不同時(shí)期可引發(fā)不同程度的牙周炎性反應(yīng)，該結(jié)果與以往學(xué)者9-10臨床試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)不同金屬基底烤瓷冠戴入后牙周組織會(huì)有不同程度的炎性反應(yīng)的結(jié)論相一致。不同合金析出的金屬離子種類和數(shù)量存在差異，PFM浸漬在口腔唾液中，烤瓷合金會(huì)發(fā)生電化學(xué)腐蝕，從而使金屬離子析出11。有研究表明金屬離子參與介導(dǎo)了牙周組織細(xì)胞免疫反應(yīng)，造成PFM修復(fù)體局部牙周微生態(tài)環(huán)境變化，引發(fā)牙周組織炎癥12。在口腔唾液中，合金的腐蝕是

10、選擇性溶解，鎳鉻合金中鎳、鉻等金屬離子析出，具有潛在毒性13，鎳離子可以使白細(xì)胞、巨噬細(xì)胞炎性因子分泌量增加，并改變中性粒細(xì)胞的趨化功能，引發(fā)組織炎癥反應(yīng)的炎癥介質(zhì)的持續(xù)分泌。鈷鉻合金可在鈍化膜表面形成Cr-O和Cr-OH結(jié)構(gòu)連續(xù)致密氧化膜，增加合金耐腐蝕性能，具有很好的生物相容性。貴金屬合金化學(xué)性能更穩(wěn)定，金屬離子的析出遠(yuǎn)低于非貴金屬析出，從而有更好的生物相容性，未發(fā)現(xiàn)其有明顯的細(xì)胞毒性14-15。在伴有咀嚼磨耗下的腐蝕與單純的腐蝕比較，鎳鉻合金較鈷鉻合金、金合金中的金屬離子更容易釋放。綜上分析，3組合金材料理化性質(zhì)的差異可能是造成鎳鉻合金烤瓷冠在修復(fù)后不同時(shí)期GCF量、IL-8總量持續(xù)高于修復(fù)前水平，而鈷鉻合金、金合金烤瓷冠在修復(fù)3個(gè)月后GCF量、IL-8總量回復(fù)到修復(fù)前水平的主要原因。本研究結(jié)果顯示，3組合金的IL-8含量在不同時(shí)期差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）?？赡芤蜓仔苑磻?yīng)中GCF量和IL-8量均有增加，GCF量的增加產(chǎn)生稀釋作用導(dǎo)致IL-8含量相對(duì)穩(wěn)定。由于稀釋也是GCF早期防御炎