家兔胸部火器傷后各組織中TNF┐α表達(dá)意義

1、家兔胸部火器傷后各組織中TNF表達(dá)意義作者：郭建軍劉維永盧春蓉劉慧 【關(guān)鍵詞】胸部 關(guān)鍵詞:胸部;火器傷;腫瘤壞死因子;免疫組化 摘要:目的用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)家兔胸部火器傷后各組織中TNF-的表達(dá)，探討其傷后表達(dá)變化規(guī)律.方法64只家兔隨機(jī)均分8組，除正常對(duì)照組外均用5.56mm小口徑步槍距離6m射擊兔右下胸第八肋間鎖骨中線外1cm處造成前后胸貫通傷，經(jīng)指袢排氣及消毒縫閉胸壁傷口等簡(jiǎn)單救治，致傷7組家兔分為傷后0.5，1，6，24和72h，7d，30d取材組，每只均取傷肺距傷道2mm處、1cm處、鄰葉中部、與傷道對(duì)應(yīng)的對(duì)側(cè)肺處、左室壁、肝、腎、腦、垂體、腎上腺取組織標(biāo)本，行免疫組織化學(xué)染色

2、檢測(cè)組織TNF-表達(dá).結(jié)果傷后0.5h各組織中TNF-表達(dá)即升高（P<0.01），6h已達(dá)高峰，持續(xù)數(shù)天，7d后降低，30d后與傷前無(wú)明顯差別.不同時(shí)間組同一組織TNF-表達(dá)定位基本相同，而表達(dá)強(qiáng)度有所不同.結(jié)論家兔胸部火器傷后各組織中TNF-表達(dá)明顯升高并與損傷時(shí)間密切相關(guān)，同一組織TNF-表達(dá)定位基本相同.TNF-在各組織中表達(dá)強(qiáng)度一定程度上反映了動(dòng)物傷情. Keywords:chest;firearminjury;TNF-;immunohistoche-mistry Abstract:AIMToinvestigatetheexpressionoftumornecrosisf

3、actor-insomerabbitstissuesafterbeingshotthroughthethoraciccavityby5.56mmcaliberrifle-gun.METHODS7of8groupsrabbitswerewoundedand1wasnormalgroup，2mm×2mm×2mmtissueswerecutfromsuchspotslike2mmand1cmfarfromthetrajectory，ad-joininglobeandopposinglobe，leftventricleofheart，liver，kidney，brain，pitui

4、tarygland，adrenalglandrespectivelyatthetimethat0.5h，1h，6h，24h，72h，7d，30dafterbe-ingshot，andinvestigatedthesetissuesexpressionofTNF-throughimmunohistochemistry.RESULTSTheexpressionofTNF-improvedfromthetimeof0.5hafterbeingshot，reachedpeakat6handkeptonfordaysandthenreducedfrom1wkafterbeingshot，recovere

5、dtonormal30dafterbeingshot.Forexample，TNF-mainlyliedintypeandalveolarcellsandcapillaryendotheliumandneutrophilic-granulocytesinlung，andintrajectoryofwoundedlobe>incontusionareaofwoundedlobe>inadjoininglobe>oppos-inglobe（P<0.01）;mainlyliedinhepatocytes，Kupffercellsandhepat

6、icsinusoidendotheliumandsoon.CONCLUSIONTherewasaregularimprovementandmostlysamespotsoftheexpressionofTNF-inkindsoftissuesanditcouldre-flecttheseriousnessofinjuriesinawayinfirearminjurytorabbitschest. 0引言 胸部火器傷在平戰(zhàn)時(shí)發(fā)生率均較高，傷情重，死亡率高1.由于動(dòng)物模型不好建立，就其發(fā)病機(jī)制方面的研究不多，且主要集中在投射物引起的瞬間壓力變化和傷后早期的改變，缺乏對(duì)其發(fā)病機(jī)制的深入了解.本實(shí)驗(yàn)在

7、成功建立了胸部火器傷動(dòng)物模型的基礎(chǔ)上2，3，進(jìn)一步觀察傷后各組織中TNF-變化，探討TNF-在火器傷發(fā)生發(fā)展中可能起到的作用. 1材料和方法 1.1材料家兔64只，本校實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，體質(zhì)量（2.5±0.25）kg，雌雄不限，隨機(jī)均分8組，分別為正常對(duì)照組、傷后0.5，1，6，24和72h，7和30d活殺取材組.5.56mm小口徑步槍?zhuān)瑥椡栀|(zhì)量m=2.57g，撞擊速度v=（340±25）m・s-1.TNF-一抗購(gòu)自軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院，二抗、ABC酶標(biāo)及DAB棕色顯色合采自Sigma公司. 1.2方法各組兔均用30g・L-1戊巴比妥鈉

8、30mg・kg-1經(jīng)耳緣靜脈麻醉，右胸壁脫毛后左側(cè)臥位固定于動(dòng)物臺(tái)上，距離6m射擊兔右下胸第八肋間鎖骨中線外1cm處，造成前后胸貫通傷，傷后立即行指袢排氣及消毒縫閉胸壁傷口等簡(jiǎn)單救治.致傷各組活殺后分別取傷肺距傷道2mm處、1cm處、鄰葉中部、與傷道對(duì)應(yīng)的對(duì)側(cè)肺處、左室壁、肝、腎、腦、垂體、腎上腺取組織標(biāo)本2mm×2mm×2mm，正常對(duì)照組組織取材部位與傷組相對(duì)應(yīng)，免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)TNF-的表達(dá).光學(xué)顯微鏡下觀察各組織免疫組化染色結(jié)果，leica圖像分析儀檢測(cè)TNF-的表達(dá)強(qiáng)度，特異信號(hào)強(qiáng)度I=A背景區(qū)/A測(cè)定區(qū)，A背景區(qū)為背景區(qū)平均光密度，A測(cè)定

9、區(qū)為測(cè)定區(qū)平均光密度，公式中A為光密度，從0255.若I值為1，說(shuō)明測(cè)定區(qū)信號(hào)強(qiáng)度與背景區(qū)相同，指示無(wú)特異性染色;I值越大說(shuō)明特異性染色越強(qiáng). 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:數(shù)據(jù)用x±s表示，用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件處理，行方差分析及組間比較. 2結(jié)果 免疫組化結(jié)果顯示與正常組比較，傷后0.5h各組織中已有TNF-的表達(dá)（P<0.01），肺組織以原發(fā)傷道2mm范圍內(nèi)最為顯著，主要集中在間質(zhì)內(nèi)中性粒細(xì)胞、枯否細(xì)胞及單核細(xì)胞中，肺泡型細(xì)胞及型細(xì)胞胞質(zhì)中有中量表達(dá)，肺泡腔內(nèi)有少量表達(dá)是漏出的血細(xì)胞所致，傷葉2mm1cm區(qū)域、鄰葉、對(duì)側(cè)葉內(nèi)TNF-表達(dá)依次減弱.1h各區(qū)域表達(dá)均明顯提高（P&l

10、t;0.01），但仍以1cm以內(nèi)區(qū)域最為顯著，鄰葉及對(duì)側(cè)葉表達(dá)仍稍弱但二者之間無(wú)明顯差異，6h各區(qū)域表達(dá)達(dá)峰值，24h與6h無(wú)明顯差別，72h時(shí)表達(dá)已較24h時(shí)有所減弱，7d時(shí)僅原發(fā)傷道周邊區(qū)域（r<5mm）有較弱表達(dá)，余區(qū)域未見(jiàn)陽(yáng)性結(jié)果，30d時(shí)各區(qū)域無(wú)陽(yáng)性表達(dá).心肌細(xì)胞胞質(zhì)及間質(zhì)內(nèi)血管內(nèi)皮細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)于傷后0.5h即有少量TNF-表達(dá)，出血局灶內(nèi)中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞及單核細(xì)胞內(nèi)已有少量表達(dá)，6h各區(qū)域表達(dá)達(dá)峰值，24h與6h相比程度及范圍無(wú)擴(kuò)大，72h時(shí)表達(dá)已較24h時(shí)有所減弱，3d時(shí)心肌細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)表達(dá)已較弱，血管內(nèi)皮細(xì)胞胞質(zhì)及出血局灶內(nèi)中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞及單核細(xì)胞內(nèi)仍有少量

11、表達(dá)，7d時(shí)僅出血局灶內(nèi)中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞及單核細(xì)胞內(nèi)已有少量表達(dá)，余區(qū)域未見(jiàn)陽(yáng)性結(jié)果，30d時(shí)各區(qū)域無(wú)陽(yáng)性表達(dá).肝細(xì)胞 于0.5h可見(jiàn)胞質(zhì)內(nèi)有少量表達(dá)，細(xì)胞間微血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)未見(jiàn)明顯表達(dá)，但肝細(xì)胞病變比較彌漫、程度均勻，尚未見(jiàn)局灶性病變區(qū)，肝小葉血竇內(nèi)枯否細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)表達(dá)強(qiáng)于其周?chē)渭?xì)胞（P<0.05），傷后6h肝細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)陽(yáng)性表達(dá)達(dá)峰值，并開(kāi)始出現(xiàn)局灶性出血壞死區(qū)，緊接壞死區(qū)周邊的肝細(xì)胞內(nèi)TNF-表達(dá)明顯強(qiáng)于其他區(qū)域（P<0.01），此時(shí)血竇內(nèi)血管內(nèi)皮細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)開(kāi)始出現(xiàn)TNF-陽(yáng)性表達(dá)，但程度較弱，24h病變無(wú)進(jìn)一步加深，3d后各部位表達(dá)開(kāi)始逐漸減弱，到7d時(shí)僅

12、少數(shù)局灶病變周邊肝細(xì)胞及血竇內(nèi)枯否細(xì)胞內(nèi)有少量表達(dá)，30d時(shí)各區(qū)域未見(jiàn)陽(yáng)性表達(dá).腎臟是傷后TNF-表達(dá)最強(qiáng)烈的器官，傷后0.5h及可見(jiàn)腎小球內(nèi)皮細(xì)胞和足細(xì)胞近曲小管細(xì)胞、遠(yuǎn)曲小管細(xì)胞、集合管細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)均可見(jiàn)陽(yáng)性表達(dá)，并隨時(shí)間逐步加強(qiáng)，傷后6h到72h各部位均呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)（P<0.01），72h時(shí)雖程度減弱但仍呈陽(yáng)性，7d時(shí)各部位有弱陽(yáng)性表達(dá)，30d時(shí)僅遠(yuǎn)曲小管細(xì)胞、集合管細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)可見(jiàn)弱陽(yáng)性表達(dá)，腎小球細(xì)胞、近曲小管細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)表達(dá)已不明顯.大腦皮質(zhì)六層陽(yáng)性表達(dá)不盡相同，主要集中在內(nèi)顆粒層的星型細(xì)胞和節(jié)細(xì)胞層的錐體細(xì)胞中，其他分層及穿行纖維中亦有表達(dá)，但程度較弱，丘腦陽(yáng)性表達(dá)主要集

13、中在視上核和室旁核中大細(xì)胞神經(jīng)元胞質(zhì)內(nèi)（0.5h7d），正中隆起和其他核團(tuán)內(nèi)有少量表達(dá).垂體中腺垂體內(nèi)陽(yáng)性表達(dá)主要集中在嗜堿性細(xì)胞和嗜酸性細(xì)胞及濾泡細(xì)胞胞質(zhì)中（0.5h7d），而嫌色細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)未見(jiàn)明顯陽(yáng)性表達(dá)，垂體中間部濾泡細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)有明顯陽(yáng)性表達(dá)，其周?chē)氖葔A性細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)亦有陽(yáng)性表達(dá)但強(qiáng)度較弱（0.5h7d）.神經(jīng)垂體內(nèi)可見(jiàn)陽(yáng)性表達(dá)呈線狀分布在無(wú)髓纖維的軸質(zhì)內(nèi)，膨體內(nèi)亦可見(jiàn)片狀及顆粒狀陽(yáng)性表達(dá)（0.5h3d）.腎上腺陽(yáng)性表達(dá)主要集中在皮質(zhì)束狀帶細(xì)胞胞質(zhì)中，球狀帶及網(wǎng)狀帶細(xì)胞胞質(zhì)陽(yáng)性表達(dá)較弱，髓質(zhì)嗜鉻細(xì)胞胞質(zhì)中亦有陽(yáng)性表達(dá)（0.5h7d）.傷后不同時(shí)間組各組織內(nèi)TNF-表達(dá)強(qiáng)度（I）比較有差異

14、（Tab1）. 3討論 TNF-是一種作用廣泛的細(xì)胞因子，其生物學(xué)作用可有使PMN自髓釋出、促發(fā)其移動(dòng)、穿越內(nèi)皮及活化，包括PMN粘附、脫顆粒及呼吸爆發(fā)、釋放蛋白酶和氧自由基;激活M分泌IL-1，刺激T細(xì)胞和VEC產(chǎn)生IL-6，IL-8;活化M和VEC內(nèi)花生四烯酸代謝，產(chǎn)生白三烯;直接作用于VEC，損傷VEC使血管功能紊亂和血栓形成、血管活性物質(zhì)釋放;使溶酶體酶外泄直接殺傷靶細(xì)胞;促進(jìn)T細(xì)胞和其他殺傷細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷4，5.目前人為T(mén)NF-是ALI和SIDS的啟動(dòng)因子，通過(guò)啟動(dòng)細(xì)胞因子群導(dǎo)致炎癥反應(yīng)的發(fā)生6，7.本實(shí)驗(yàn)中TNF-于傷后0.5h在各組織中表達(dá)既有明顯升高，病理解剖中除原發(fā)傷道

15、出血水腫嚴(yán)重外，其他組織也有不同程度的水腫及出血，TNF-傷后6h達(dá)峰值時(shí)各組織損傷表現(xiàn)也達(dá)高峰，傷后72h各組織中TNF-表達(dá)開(kāi)始降低，此時(shí)組織也進(jìn)入恢復(fù)階段，水腫減輕，滲出開(kāi)始吸收，出血范圍及程度也逐步減少減輕，傷后1wk，TNF-表達(dá)與傷前比差別不明顯，各組織結(jié)構(gòu)功能基本接近正常，傷后30d，TNF-除在個(gè)別繼發(fā)感染處有表達(dá)外，余處已無(wú)表達(dá)，說(shuō)明炎癥反應(yīng)已基本停止，各組織進(jìn)入恢復(fù)階段.可見(jiàn)在胸部火器傷中，TNF-不僅參與傷后炎癥反應(yīng)的啟動(dòng)，還參與整個(gè)炎癥反應(yīng)過(guò)程. 表1傷后不同時(shí)間組各組織內(nèi)TNF-表達(dá)強(qiáng)度（I）比較略 胸部火器傷中TNF-表達(dá)及作用特點(diǎn)有，范圍廣:實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示不僅原發(fā)傷

16、肺葉組織TNF-表達(dá)強(qiáng)烈，且臨近器官如鄰葉和對(duì)側(cè)葉，遠(yuǎn)隔臟器如肝、腎、腦甚至垂體及腎上腺均有不同程度表達(dá);出現(xiàn)早、峰值高、持續(xù)時(shí)間長(zhǎng):傷后0.5h各組織既有明顯表達(dá)，與傷前相比均有顯著差異（P<0.01），說(shuō)明在原發(fā)損傷刺激下TNF-的激活和釋放十分迅速;多個(gè)組織TNF-表達(dá)高峰期可達(dá)傷前35倍，如此明顯的變化說(shuō)明TNF-在局部炎癥反應(yīng)中扮演著重要角色;傷后1wk一些組織尚有TNF-表達(dá)表明它不是簡(jiǎn)單的啟動(dòng)因子，而是自始至終參與了整個(gè)過(guò)程.程度不一:定量分析表明各組織表達(dá)程度變化大小不一，傷葉中以原發(fā)傷道最為強(qiáng)烈，向外依次減輕，同一時(shí)間點(diǎn)，原發(fā)傷道TNF-表達(dá)可以是一些遠(yuǎn)隔組織表

17、達(dá)的23倍，表明子彈的切割牽扯造成的組織挫傷是最直接和有效的激發(fā)因素，而鄰葉和對(duì)側(cè)葉雖無(wú)直接損傷，但鄰葉表達(dá)明顯高于對(duì)側(cè)葉，說(shuō)明組織所受震蕩及擠壓在刺激TNF-表達(dá)上也能起到一定作用.富含血液器官如心臟、肝臟及腎臟和腦，不僅有TNF-廣泛表達(dá)，且均有肉眼下點(diǎn)狀或片狀出血點(diǎn)，光鏡下也顯示出血點(diǎn)區(qū)域及周邊TNF-表達(dá)強(qiáng)于同組織的其他部位，而出血區(qū)域相對(duì)規(guī)律地重復(fù)出現(xiàn)，提示它的發(fā)生應(yīng)與血液分布特點(diǎn)有某種關(guān)系，這方面正在進(jìn)一步研究之中. 參考文獻(xiàn): 1LiuWY，LiuYQ.Theprogressinexperimentalandclinicstud-iesinthoracicfirearminjur

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