SOP-QC-001樣本無菌檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程SOP

1、題目:產(chǎn)品無菌檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程編號(hào)：SOP-QC-001版本號(hào)：01頁(yè)數(shù)：6頒發(fā)部門：質(zhì)量管理機(jī)構(gòu)生效日期：分發(fā)部門：生產(chǎn)部門制定人：審核人：批準(zhǔn)人：制定日期：2016/6/15審核日期：批準(zhǔn)日期：目的：制定無菌檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，確保檢驗(yàn)操作正確。范圍：本標(biāo)準(zhǔn)適用于本公司靜脈注射產(chǎn)品無菌檢驗(yàn)操作。責(zé)任者：質(zhì)管部、化驗(yàn)室主任、QC檢驗(yàn)員內(nèi)容：1、標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)：中國(guó)藥典2010年版二部附錄XIH02、簡(jiǎn)述：無菌檢查方法系用于檢查藥品是否無菌的一種方法。檢查項(xiàng)目包括需氣菌、厭氣菌及真菌檢查。若供試品符合該項(xiàng)檢查方法的有關(guān)規(guī)定，僅表明了在該檢驗(yàn)條件下未發(fā)現(xiàn)微生物污染。3、環(huán)境要求：該項(xiàng)檢查應(yīng)在環(huán)境潔凈度萬

2、級(jí)（C級(jí)）背景下的局部百級(jí)（A級(jí)）的單向流區(qū)域內(nèi)或隔離系統(tǒng)中進(jìn)行。其全過程必須嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作。防止微生物污染，但所采取的措施不得影響供試品中微生物的檢出。操作前環(huán)境潔凈度應(yīng)經(jīng)驗(yàn)證。日常檢驗(yàn)需對(duì)試驗(yàn)環(huán)境進(jìn)行監(jiān)控。4、方法驗(yàn)證：進(jìn)行該項(xiàng)檢查前應(yīng)按照無菌檢查方法驗(yàn)證規(guī)程確認(rèn)該方法的適用性。5、人員要求：無菌檢查人員必須具備微生物專業(yè)知識(shí)，并經(jīng)過無菌技術(shù)培訓(xùn)。6、檢驗(yàn)數(shù)量及檢驗(yàn)量：6.1、每支供試品接入每種培養(yǎng)基的最少量:5ml（100ml-500ml）,1ml（20-100ml）,0.5ml（5-20ml）。7、細(xì)菌培養(yǎng)溫度為3035C,真菌培養(yǎng)溫度為2328C。8、儀器用具：垂直層流超凈工作臺(tái)、

3、生化培養(yǎng)箱、電熱恒溫水浴箱、顯微鏡、手提滅菌器、離心機(jī)、雙碟、試管、三角瓶、刻度離心管、注射器（針頭）、微量移液器、剪刀、鑲子、注射器盒、75%酒精棉球9、消毒劑配制:9.1、 75%乙醇溶液（配制酒精棉球用）。9.2、 0.2%新潔爾滅溶液（配制消毒棉球用）。9.3、 2%來蘇爾溶液（配制消毒棉球用）。題目:產(chǎn)品無菌檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程編號(hào)：SOP-QC-001版本號(hào)：01頁(yè)數(shù)：6頒發(fā)部門：質(zhì)量管理機(jī)構(gòu)生效日期：分發(fā)部門：生產(chǎn)部門制定人：審核人：批準(zhǔn)人：制定日期：2016/6/15審核日期：批準(zhǔn)日期：10、試劑及培養(yǎng)基的配制：10.1、 0.1%蛋白陳水溶液：取蛋白陳1.0g,加水1000ml,

4、微溫使溶解，濾清，調(diào)節(jié)PH值至7.1±0.2,分裝，滅菌。10.2、 pH7.0滅菌氯化鈉蛋白凍緩沖液：取磷酸二氫鉀3.56g、磷酸氫二鈉7.23g、氯化鈉4.30g、蛋白陳1.0g,加水1000ml微溫溶解，濾清，分裝，滅菌。10.3、 根據(jù)供試品特性，可選用其他經(jīng)驗(yàn)證的適宜溶液作為稀釋液、沖洗液。如需要，可在上述稀釋液或沖洗液的滅菌前或滅菌后加入表面活性劑或中和劑。10.4、 硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基：按商品說明稱取培養(yǎng)基，配制，搖勻，分裝，按培養(yǎng)基說明高壓滅菌，保存?zhèn)溆?。分裝的容器應(yīng)適當(dāng)，具裝量與容器高度比例應(yīng)符合培養(yǎng)結(jié)束后培養(yǎng)基氧化層（粉紅色）不超過培養(yǎng)基深度的1/2o供試品接種

5、前，培養(yǎng)基氧化層的高度不得超過培養(yǎng)基深度的1/5,否則須經(jīng)100c水浴加熱至粉紅色消失（不超過20分鐘），迅速冷卻只限加熱一次，并應(yīng)防止被污染。10.5、 改良馬丁培養(yǎng)基：取商品干燥培養(yǎng)基28.5g,加水1000ml,加熱溶解，分裝，121c高壓滅菌15分鐘（若干燥培養(yǎng)基結(jié)塊應(yīng)勿使用）。10.6、 選擇性培養(yǎng)基：按上述硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基或改良馬丁培養(yǎng)基的處方及制法，在培養(yǎng)基滅菌或使用前加入適量的中和劑、滅活劑或表面活性劑，其用量同方法驗(yàn)證試驗(yàn)（附表1常見干擾物的中和劑或滅活方法見微生物限度檢查法中）。10.7、 營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基：按商品說明稱取培養(yǎng)基，配制，加熱，溶解，分裝，按培養(yǎng)基說明高壓滅

6、菌，保存?zhèn)溆谩?0.8、 營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基：取商品干燥培養(yǎng)基3.4g,加蒸儲(chǔ)水1000ml,加熱溶解分裝，121c高壓滅菌15分鐘。10.9、 改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基：取商品干燥培養(yǎng)基制備或按改良馬丁培養(yǎng)基的處方及制法，加入14.0g瓊脂，調(diào)節(jié)PH值使滅菌后PH值為6.4±0.2,題目:產(chǎn)品無菌檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程編號(hào)：SOP-QC-001版本號(hào)：01頁(yè)數(shù)：6頒發(fā)部門：質(zhì)量管理機(jī)構(gòu)生效日期：分發(fā)部門：生產(chǎn)部門制定人：審核人：批準(zhǔn)人：制定日期：2016/6/15審核日期：批準(zhǔn)日期：分裝，121c高壓滅菌15分鐘。10.10、 制備好的培養(yǎng)基應(yīng)保存在225C,避光的環(huán)境中。培養(yǎng)基若保存于非密閉容器

7、中，一般在三周內(nèi)使用。若保存于密閉容器中，一般可在一年內(nèi)使用。10.11、 條件允許一般建議購(gòu)買質(zhì)量合格培養(yǎng)基成品。11、試驗(yàn)前的準(zhǔn)備工作11.1、 用具的洗刷11.1.1、 玻璃器皿：如試管、量筒、移液管、刻度吸管、離心管、三角瓶、雙碟等用清潔液浸泡，用流水洗滌，再用蒸儲(chǔ)水洗滌45次，倒置,晾干。試管、移液管、三角瓶等使用過后，應(yīng)先消毒倒出內(nèi)容物后，再清洗晾干。11.1.2、 注射器用水沖洗后，用洗滌劑沖洗，然后用水沖洗干凈，再用蒸儲(chǔ)水沖洗3次。11.1.3、 剪刀、銀子用水及去污粉洗滌，用水沖洗干凈，再用蒸儲(chǔ)水洗滌3次。11.1.4、 多用薄膜過濾器，玻璃管等用飲用水及蒸儲(chǔ)水洗凈、晾干。1

8、1.1.5、 潔凈服、褲、帽子、口罩等用水洗滌潔凈后，晾干。11.2、 用具的包扎及滅菌11.2.1、 移液管、刻度吸管在管口上端內(nèi)，松松塞入少許脫脂藥物，然后每支管用白紙嚴(yán)密卷好，再用兩層牛皮紙一起包扎。11.2.2、 洗滌潔凈的注射器及適配針頭各部件與剪刀、銀子一并入墊有紗布的鋁盒內(nèi)，一層層放好，蓋上紗布，將鋁盒蓋好，用牛皮紙包扎。11.2.3、 試管、三角瓶等在管（瓶）口塞上紗布棉紗用牛皮紙包裝嚴(yán)密。11.2.6、 將潔凈服、等用布口袋配套裝入，扎緊口袋，用牛皮紙包扎好。11.2.7、 將以上包扎好的用具在121c蒸汽滅菌20分鐘?；虿扇∵m宜的滅菌方法。（適宜高溫滅菌的器皿可采用160c

9、干熱滅菌）11.2.8、 物品滅菌完畢，勿立即置冷處，以免急速冷卻導(dǎo)致染菌，應(yīng)置恒溫培養(yǎng)箱中干燥。題目:產(chǎn)品無菌檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程編號(hào)：SOP-QC-001版本號(hào)：01頁(yè)數(shù)：6頒發(fā)部門：質(zhì)量管理機(jī)構(gòu)生效日期：分發(fā)部門：生產(chǎn)部門制定人：審核人：批準(zhǔn)人：制定日期：2016/6/15審核日期：批準(zhǔn)日期：11.3、 潔凈室的清潔與滅菌11.3.1、 潔凈室及超凈臺(tái)，每周用高鈕酸鉀加甲醛薰蒸滅菌。11.3.2、 在每次操作前，應(yīng)作好清潔工作，并用0.2%新潔爾滅溶液或2%來蘇爾或75%乙醇擦洗超凈臺(tái)工作臺(tái)面及可能污染的死角，然后開啟紫外線燈殺菌半小時(shí)，超凈臺(tái)空氣過濾器自凈半小時(shí)。操作完畢后，用上述消毒液，

10、再次處理工作臺(tái)面，開紫外光燈殺菌30分鐘以上。12、操作12.1、 開啟傳遞窗外側(cè)門，將物品表面消毒后置傳遞窗內(nèi)，關(guān)閉窗門。12.2、 操作人員按進(jìn)入潔凈室更衣程序洗手、更衣?lián)Q工作鞋，換無菌衣、褲、口罩。進(jìn)入潔凈室內(nèi)，開啟內(nèi)側(cè)門，取出物品，關(guān)閉內(nèi)側(cè)門，經(jīng)緩沖間帶入潔凈室內(nèi)，物品放置于實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，關(guān)閉潔凈室門，人員離開潔凈室，繼續(xù)用紫外燈照射半小時(shí)，關(guān)燈，再將用具放入超凈臺(tái)內(nèi)。12.3、 配制的培養(yǎng)基應(yīng)在涼暗處保存，一般不得超過2周。臨用前細(xì)菌和霉菌培養(yǎng)基分別經(jīng)3035c和2025c培養(yǎng)不少于48小時(shí)和72小時(shí),證明無菌生長(zhǎng)時(shí)方可使用。12.4、 陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)：12.4.1、 應(yīng)根據(jù)供試品特性選擇

11、陽(yáng)性對(duì)照菌，無抑菌作用及抗革蘭陽(yáng)性菌為主的供試品，以金黃色葡萄球菌為對(duì)照菌；抗革蘭陰性菌為主的供試品以大腸埃希菌為對(duì)照菌；抗厭氧菌的供試品以生抱梭菌為對(duì)照品；抗真菌的供試品以白色念珠菌為對(duì)照品。12.4.2、 陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)的菌液制備同方法驗(yàn)證試驗(yàn)。12.4.3、 取各陽(yáng)性對(duì)照菌懸液（含菌量小于100CFU）及供試品（用量同供試品無菌檢查每份培養(yǎng)基接種的樣品量），以無菌操作加入相應(yīng)培養(yǎng)基中，培養(yǎng)4872小時(shí)，檢查應(yīng)生長(zhǎng)良好。（陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)操作應(yīng)與微生物限度檢查操作隔離進(jìn)行，防止交叉污染）。12.6、 陰性對(duì)照試驗(yàn)：取供試品的相應(yīng)溶劑或稀釋劑沖洗液同法操作，培養(yǎng)7日應(yīng)無菌生長(zhǎng)。12.7、 供試品檢

12、查：題目:產(chǎn)品無菌檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程編號(hào)：SOP-QC-001版本號(hào)：01頁(yè)數(shù)：6頒發(fā)部門：質(zhì)量管理機(jī)構(gòu)生效日期：分發(fā)部門：生產(chǎn)部門制定人：審核人：批準(zhǔn)人：制定日期：2016/6/15審核日期：批準(zhǔn)日期：12.7.1、 供試品外部消毒：包裝瓶外壁用75%乙醇擦拭，待干。12.7.2、 供試品的制備：用滅菌銀子取出注射器，在火焰旁將針芯插入針管并安上針頭，注射器針頭應(yīng)迅速通過火焰數(shù)次，用注射器以無菌操作直接吸取供試液?；虺橹烈褱缇Ａ萜髦?，用稀釋劑稀釋為供試液，如為可溶于水的固體供試品，應(yīng)取規(guī)定量，加入適宜的滅菌稀釋液溶解做為供試液。12.7.3、 直接接種法：取供試品，按上述操作進(jìn)行外部消毒和

13、制備后，用滅菌注射器或微量移液器以無菌操作自每管中吸取供試品，在近火焰旁以左手持培養(yǎng)基，以拇指和食指拔開培養(yǎng)基平板上蓋，邊緣通過火焰，移至火焰下側(cè)，分別將各供試品20ul（或規(guī)定量，除另有規(guī)定外，每個(gè)容器中培養(yǎng)基的用量應(yīng)符合接種的供試品體積不得大于培養(yǎng)基體積的10%）沿培養(yǎng)基一端波浪形劃線，每個(gè)供試品均分別接種葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基及改良馬丁培養(yǎng)基各1個(gè)，另取硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基一支，同法操作，操作結(jié)束后，接種對(duì)照菌液20ul（小于100CFU）作為供試品陽(yáng)性對(duì)照。注入供試液后，應(yīng)用封口膜將硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基平板邊緣封住隔絕空氣。12.7.4、 硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基在3035c培養(yǎng)7天,

14、改良馬丁培養(yǎng)基在2328c培養(yǎng)7大。培養(yǎng)期間應(yīng)逐日檢查是否有菌生長(zhǎng)，并填寫無菌檢查記錄。如供試品管出現(xiàn)輕微渾濁或菌落，經(jīng)培養(yǎng)后不能從外觀判斷時(shí)，可取該培養(yǎng)基接種在另一支相同新鮮培養(yǎng)基中，細(xì)菌培養(yǎng)2大，真菌培養(yǎng)3天，觀察接種的同種新鮮培養(yǎng)基是否再出現(xiàn)菌落；或取培養(yǎng)液涂片，染色，鏡檢，判斷是否有菌。12.8、 果判斷：陽(yáng)性對(duì)照管應(yīng)生長(zhǎng)良好，陰性對(duì)照管不得有菌生長(zhǎng)。否則，試驗(yàn)無效。若供試品平板均正常經(jīng)確證無菌生長(zhǎng)，判供試品符合規(guī)定；若供試品管中菌落并確證有菌生長(zhǎng)，判供試品不符合規(guī)定，除非能充分證明實(shí)驗(yàn)結(jié)果無效，即生長(zhǎng)的微生物非供試品所含。當(dāng)符合下列至少一個(gè)條件時(shí)，方可判試驗(yàn)結(jié)果無效：題目:產(chǎn)品無菌檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程編號(hào)：SOP-QC-001版本號(hào)：01頁(yè)數(shù)：6頒發(fā)部門：質(zhì)量管理機(jī)構(gòu)生效日期：分發(fā)部門：生產(chǎn)部門制定人：審核人：批準(zhǔn)人：制定日期：2016/6/15審核日期：批準(zhǔn)日期：無菌檢查試驗(yàn)所用設(shè)備及環(huán)境的微生物監(jiān)控結(jié)果不符合無菌檢查要求；(2)回顧無菌試驗(yàn)過程，發(fā)現(xiàn)有可能引起微生物污染的因素；(3)供試品管中生長(zhǎng)的微生物經(jīng)鑒定后，確證是因無菌試驗(yàn)中所使用的物品和(或)無菌操作技術(shù)不當(dāng)引起的。試驗(yàn)若經(jīng)確認(rèn)無效，應(yīng)重試。重試時(shí)，重新取同量供試品，依法檢查，若無菌生長(zhǎng)，判供試品符合規(guī)定