實驗一巨噬細(xì)胞吞噬功能實驗

1、實驗一巨噬細(xì)胞吞噬功能實驗1 、【實驗原理】(1)巨噬細(xì)胞作為單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)的主要細(xì)胞，具有活躍的吞噬功能。能清除體內(nèi)抗原物質(zhì)及變性的細(xì)胞，在特異性及非特異性免疫中均起重要作用。M受抗原刺激后活化，可使其吞噬功能明顯增強(qiáng)。(2)此實驗采用體內(nèi)法，即：在小鼠體內(nèi)誘導(dǎo)腹腔巨噬細(xì)胞產(chǎn)生后，再給小鼠腹腔注射雞紅細(xì)胞30min后處死小鼠，取出腹腔液，以冷美藍(lán)染色，油鏡下計數(shù)吞噬雞紅細(xì)胞的百分 數(shù)，及觀察巨噬細(xì)胞中內(nèi)因被殺死而染為藍(lán)色的雞紅細(xì)胞的形態(tài)、數(shù)目，以判 斷巨噬細(xì)胞中的殺傷能力，由此間接地測定機(jī)體的非特異免疫水平。2、【實驗步驟】(1)試驗前3d,小白鼠腹腔注射6%無菌淀粉液1ml,誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞

2、滲出 至腹腔中。(2)實驗時，每只小鼠腹腔注射雞紅細(xì)胞液 1ml,輕揉腹部，使紅細(xì)胞在 腹腔中分布均勻，利于吞噬( 3) 30min 后，將小鼠拉頸處死，固定，打開腹腔暴露腸管，用吸管取出腹腔液，均勻涂布于載玻片上，然后再滴一小滴0.03%xx溶液，蓋上蓋玻片。（ 4)低倍鏡下找到觀察區(qū)域后，換高倍鏡下進(jìn)行觀察，計數(shù)3、【實驗結(jié)果】4、【結(jié)果分析】（ 1)如圖所示，在小鼠體內(nèi)誘導(dǎo)腹腔巨噬細(xì)胞產(chǎn)生后，再給小鼠注射雞紅細(xì)胞后鏡檢腹腔液，可觀察到巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的現(xiàn)象，并且可以看到部分雞紅細(xì)胞聚集到吞噬細(xì)胞附近。（ 2）鏡下可見吞噬細(xì)胞核呈藍(lán)色，被吞噬的雞紅細(xì)胞呈橢圓形，其胞漿呈紅色而核被染成藍(lán)

3、色。（3）由于未將腹腔液和冷美藍(lán)溶液充分混合均勻，使得視野中出現(xiàn)大片深染區(qū)域?？傮w實驗結(jié)果較好，視野中央可見清晰的吞噬了雞紅細(xì)胞的巨噬細(xì)胞。5、【注意事項】（ 1）涂片的薄厚要適當(dāng)，否則影響計數(shù)。（ 2）小鼠腹腔注射時不要刺傷內(nèi)臟。（ 3）如小鼠腹腔液過少，可注入適量生理鹽水。（ 4）剪開小鼠腹腔時應(yīng)避免出血，否則將影響試驗結(jié)果。（ 5）被吞噬的雞紅細(xì)胞時間過長可被消化，時間過短未被吞噬，必須掌握好吞噬作用時間。實驗二雙向瓊脂擴(kuò)散實驗1 、【實驗原理】（ 1）可溶性抗原與相應(yīng)抗體特異性結(jié)合，兩者比例適當(dāng)并有電解質(zhì)存在及一定的溫度條件下，經(jīng)一定的時間，可形成肉眼可見的沉淀線/ 環(huán)的現(xiàn)象，稱為沉淀

4、反應(yīng)。（ 2）瓊脂擴(kuò)散是指為可溶性抗原與抗體在瓊脂凝膠中所呈現(xiàn)的一種沉淀反應(yīng)。當(dāng)對應(yīng)的抗原、抗體在半固體瓊脂終相遇，且二者比例適當(dāng)時，便出現(xiàn)可見的白色沉淀線，這組沉淀線是一組抗原、抗體的特異性復(fù)合物。當(dāng)瓊脂中有多組不同的抗原、抗體存在時，便各自依其擴(kuò)散速度的差異，再適當(dāng)?shù)牟课恍纬瑟?dú)立的沉淀線。因此，瓊脂擴(kuò)散不僅用于疾病的診斷，更廣泛地用于抗原成分的分析。（ 3）雙向瓊脂擴(kuò)散試驗是定性實驗。將可溶性抗原與相應(yīng)抗體分別加人瓊脂板上的孔內(nèi)，兩者均可擴(kuò)散，在抗原抗體比例適宜處形成可見的沉淀線。如果不是相應(yīng)的抗原與抗體，就不出現(xiàn)沉淀線。本試驗常用于分析抗原抗體的純度及相互關(guān)系。2、【實驗步驟】（ 1）制

5、板：將熔化的1%瓊脂加在玻片上，3ml/ 板。（ 2）打孔：待 xx 凝固后，在板上打孔。（ 3）加樣：在空中加入相應(yīng)抗原、抗體。（ 4）結(jié)果觀察將瓊脂板放入濕盒內(nèi)置37c溫箱中24小時后取出觀察結(jié)果。3、【實驗結(jié)果】4、【結(jié)果分析】（ 1）如圖所示，在中央孔與添加抗原1 的孔之間出現(xiàn)沉淀線，有抗原抗體反應(yīng)，為陽性反應(yīng)，說明抗原1 與抗體相對應(yīng)。中央孔與添加抗原2 的孔之間沒有沉淀線，說明抗原2 與抗體之間不相對應(yīng)。（ 2）抗體與抗原發(fā)生擴(kuò)散時，隨擴(kuò)散距離的增大濃度降低，在抗原抗體比例適宜處形成可見的沉淀線。當(dāng)有沉淀線出現(xiàn)時，說明有抗原抗體反應(yīng)。5、【注意事項】（ 1）加樣時不要將瓊脂劃破，以免影響沉淀線的形成。（ 2）反應(yīng)時間要適宜