電穿孔SCIENTZ2C說明書

1、SCIENTZ-2C基因?qū)雰x使用說明書寧波新芝生物科技股份有限公司地址：寧波市科技園區(qū)木槿路65號315013電話：0574-8713480787133995傳真ttp/：SCIENTZ-2C基因?qū)雰x使用說明書一、概述高壓脈沖基因?qū)雰x，廣泛用于植物、動物和各種微生物的各類細胞電穿孔，可以進行細胞雜交、細胞融合，基因?qū)氲难芯?。本系統(tǒng)結(jié)構(gòu)緊湊，采用電腦(CPU) 控制, 使用方便,安全可靠。注意：1. 本儀器為高壓裝置，使用儀器前請仔細閱讀說明書，必須按說明書方法安裝和使用。 2 .在各項準備工作完成后再開機，使用完后須及時關機, 避免長時間空開；充完電后，應

2、及時進行導入操作或者放電，避免長時間處于充電狀態(tài)。 3 .防止液體溢出灑在儀器上。二、原理儀器的組成本儀器由SCIENTZ-2C基因?qū)雰x主機和基因?qū)氡皩Ｓ眠B接線等組成。電路構(gòu)成由控制電源、高壓電源、高壓整流、儲能電容（有高壓電容和低壓電容）、并接電阻、充放電回路、CPU控制、顯示電路以及導入杯（溶池）等部分組成。電子開關電子開關如圖： 高壓電源 高壓整流 電子開關 高壓儲能電容 儲能電路 放電回路 導入杯高壓儲能電容電源 分壓取樣 CPU控制電路 并接電阻選擇 控制電源 CPU控制電路顯示電路 工作原理導入杯（溶池）內(nèi)放置經(jīng)過適當處理的細胞溶液（含基因），接入儀器的高壓脈沖輸出端，選擇適

3、當?shù)碾娔芰浚ǎ河蓛δ茈娙莺蛢δ茈妷旱钠椒匠朔e確定），選擇適當?shù)姆烹娮杩梗ㄒ訰C放電時間常數(shù)作參考）以瞬間放電（指數(shù)式衰減）的形式可逆擊穿細胞壁，達到基因?qū)爰毎康摹?三、技術(shù)參數(shù)1、儲能電容A.高壓儲能電容：1F、5F、25F 以及它們的組合如6F、26F、30F和31F共七檔，自由設置；B.低壓儲能電容：25F、50F、100F、200F、400F、800F以及它們的組合如125F、150F、175F、200F -直至1575F共63檔自由設置. 最小25F, 以25F為步長遞進；2、儲能電壓A.使用高壓儲能電容時，儲能電壓可從401V2500V，自由設置,精度為1V；B.使

4、用低壓儲能電容時，儲能電壓可從10V400V，自由設置，精度為1V；3、放電并接電阻：50(固定)、50、100、200、400、800和以及它們的組合如50、100、150 直至1600共32檔，自由設置。最小50最大1600, 以50步進. 另有無窮大檔可供選擇.4、使用電源：單相220V，50HZ，100W。靜態(tài)RC放電時間常數(shù)（RC理論值，忽略細胞溶液阻抗）以下測試條件（低壓：300V，高壓：2000V）RC(ms)R()C(mf)1.05.025.010020040060080010001500 500.050.251.255102030405075 1000.100.502.510

5、20406080100150 2000.201.05.0204080120160200300 3000.301.57.53060120180240300450 4000.402.010.04080160240320400600 5000.502.512.5501002003004005007506000.603.015.0601202403604806009007000.703.517.57014028042056070010508000.804.020.080160320480640800120010001.005.025.01002004006008001000150015001.507.

6、537.5150300600900120015002250 （注：在高壓放電時，實際的RC常數(shù)要遠小于上表的參考值）四、儀器面板、后板結(jié)構(gòu)及功能1.前面板2.后面板電源插座五. 參數(shù)設置步驟（一）開機后液晶LCD顯示0，此時按“C”鍵進入設置界面（如下圖所示）圖5.1 按“C”后進入設置界面（二）參數(shù)設置、電壓參數(shù)設定（U） a.進入設置界面后，按電壓設置鍵“U”，進入電壓設置窗口（如下圖所示）， 可以輸入所需的電壓值。 b.按“PT”鍵確認（參數(shù)被確認后，電壓數(shù)組中會出現(xiàn)“.”）。如輸錯可按“0”按鈕清除數(shù)據(jù)后，重新輸入再次按“PT”鍵確認即可；或者多次按“0”鍵，直至顯示區(qū)域只顯示0；圖5

7、.2_1 設置電壓第二組參數(shù)200V，按“PT”調(diào)用 c.在電壓設置界面中，可按“U”鍵來切換預存參數(shù)（U1到U5共5組參數(shù)），按“PT”鍵即可調(diào)用（參數(shù)被調(diào)用后，電壓數(shù)組中會出現(xiàn)“.”）； d.被調(diào)用的該組參數(shù)，經(jīng)過導入動作后，會覆蓋原先改組的參數(shù)，下次只需調(diào)用該組參數(shù)，而無需再此輸入、電阻參數(shù)設置（R） 按“R”鍵進入電阻參數(shù)設置，設置基本設置方法，跟電壓設置方法一樣，設置范圍為501600歐姆（每50歐步進）電阻也R1R5五組參數(shù)，也可保存和調(diào)用預存參數(shù)；、電容參數(shù)設置（C） 按“C”鍵進入電容參數(shù)設置，設置方法同上，電容設置分為高壓儲能電容和低壓儲能電容兩種（具體設置方法再下文設定數(shù)據(jù)

8、的范圍介紹）（三）、設定數(shù)據(jù)的范圍電壓、電容和電阻三個參數(shù)的設定范圍各不相同，下面分別作說明。（四）導入操作、電壓（U）電阻（R）電容（C）設置完后，就可以按“RD”鍵進行儲能(過程如下圖所示) 圖5.2_2 存能過程（從1%到99,當?shù)竭_99%即表示儲能完成）5、儲能完成（界面顯示“L 99”），按“RD”即進行導入動作6、導入動作后，界面會顯示本次導入時間（時間常數(shù)），如下圖所示圖5.2_3 時間常數(shù)顯示5、導入動作后，需按“U”鍵返回到設置狀態(tài)中，來進行新的設置；如無需根改參數(shù)，直按“RD”鍵，儀器按前一次設置進行儲能注意事項：1、每一個數(shù)字鍵按下都有“嘀”的聲音提示，如沒有聲音則表示按

9、鈕并未完全按下，輸入無效。2、如聽到“嘀”、“嘀”兩聲提示音則表示輸入數(shù)據(jù)超出范圍需重新輸入（在設定電容、電阻參數(shù)時）。六、使用注意事項1、儀器若長期未使用在重新使用時，應先低壓充電、放電，逐步升高電壓，直至額定值。在儀器使用時,應先通電予熱10-15min,設置數(shù)據(jù),進行幾次充電放電空操作后,才可正式進行導入操作。2、儀器的輸出連接線、接線座等處在放電時有高電壓、大電流存在。故在使用時，應避免與人體、導體（如液體）或易受干擾的電器等接觸、靠近。3、 儀器內(nèi)有高電壓（2500V）存在，非專業(yè)人員，不得打開檢修。如有故障請與我單位有關技術(shù)人員聯(lián)系。4、 實驗中如果出現(xiàn)溶池發(fā)生弧光,溶液爆濺出來說

10、明電壓設置太高或電容太大,應相應降低電壓、電容的設置值。七 新芝基因?qū)雰x實驗參考技術(shù)參數(shù)品種電壓電容電阻導入盒轉(zhuǎn)化率反饋用戶名酵母1200-1500V25µF200-4002mm2.2-3.2*102cfu/ug DNA上海肺科醫(yī)院大腸桿菌1250V5µF400-10001mm107-108cfu/ug DNA清華大學大腸桿菌1100V10µF5001mm2500cfu/ug DNA清華大學大腸桿菌1500V25µF4002mm2500cfu/ug DNA左右解放軍總醫(yī)院羊細胞250V500µF5004mm102cfu/ug DNA中科院發(fā)育

11、所畢赤酵母1500V25µF4002mm1.8x103cfu/ug DNA華東師范大學枯草芽孢桿菌1250V25µF4002mm102cfu/ug DNA華東師范大學（因各單位實驗條件不盡相同，以上實驗參數(shù)僅供參考）八 操作過程1、按上圖所示，連接好儀器電源、導入盒（接輸出插孔）等。 2、將配有相應細胞液的導入杯裝入導入盒內(nèi)（細胞液一般用雙重去離子水價甘露醇或葡萄糖等，濃度為10%20%，電阻在3千歐左右）。3、 打開電源開關，儀器通電，顯示器有顯示。按“參數(shù)設置步驟”的方法。設置實驗所需的技術(shù)參數(shù)時然后按RD鍵按一下即可，當屏幕中充電進度顯示“99”時，按RD鍵進行導入，

12、聽到鋒鳴器響聲后，此時顯示屏顯示的是時間常數(shù)。電腦便進行儲能電壓, 儲能電容, 放電電阻的選取及對所選定的儲能電容充電,當充電電壓穩(wěn)定到所設置的電壓值后, 按RD鍵進行導入，立即向輸出端(包括導入盒和所選定的放電電阻的并聯(lián)電路)釋放高壓脈沖，進行有一定時間常數(shù)的放電過程，即電擊穿、融合、導入過程。（選擇儲能電壓值、電容值和放電電阻值，是為了選取恰當?shù)碾娔芰亢头烹姡≧C）時間常數(shù)，以期獲得剛好使細胞壁可逆擊穿，基因?qū)肴诤系淖罴研Ч?。這是十分重要的。因為影響因素很多，要想獲得高的轉(zhuǎn)換率，必須依靠自己長期實踐經(jīng)驗的積累。）4、 若需二次放電，只要按U，然后再次按RD鍵即可。若要修改參數(shù)，則重復上述

13、（3）的操作過程，可獲得多次放電效果。5、 若停止使用，可關電源開關，切斷輸入電源，取出導入杯。為安全起見，應在關斷電源后，再取出為妥。九、大導入（參考資料） 用基因?qū)雰x進行基因轉(zhuǎn)化很有效。用生長旺盛的細胞，可使1ug質(zhì)粒DNA材料E coli單菌落LB培養(yǎng)基10%冰冷的甘油(丙三醇)Scientz-2C基因?qū)雰x含抗菌素的LB平板冰水SOC培養(yǎng)基(0.5%酵母提取物,2%蛋白胨,10mmol/L Nacl,20mmol/L MgSO4,25mmol/L KCl,20mmol/L葡萄糖,10mmol/L MgCl2)（2） 方法將培養(yǎng)物在冰水中放置30分鐘使細胞停止生長，然后倒入預冷的離心管

14、中，在4下5000g離心10分鐘，棄去上清液。（3） 用100ml預冷10甘油重懸細胞，4 5000g離心10分鐘，棄去上清液。（4） 重復步驟（3）。（5） 用5-10ml預冷10甘油重懸細胞，100-200µl/管分裝于無菌的1.5ml eppendorf管中，保存于-80。注意（1）該法的關鍵是用適當?shù)碾妷?、電容值和適當時間常數(shù)的電脈沖。用對數(shù)生長的細胞進行的轉(zhuǎn)化效率比穩(wěn)定生長期的細胞高。（2） 該法的優(yōu)點是：轉(zhuǎn)化效率高。尤其對一些較大的質(zhì)粒，采用該法可獲得較好的結(jié)果。實踐已經(jīng)證明，當質(zhì)粒達14kb時，轉(zhuǎn)化效率不會產(chǎn)生明顯下降。（3） 釋放電脈沖，取出導入杯立即加入1mlSOC

15、培養(yǎng)基，并用吸管將菌液轉(zhuǎn)至無菌的小管中。在37下，緩慢振蕩培養(yǎng)30-60分鐘。（4） 將上述轉(zhuǎn)化細胞的培養(yǎng)液涂于抗菌素的LB平板上。實驗結(jié)果（使用Scientz-2C基因?qū)雰x） 材料: PUC18質(zhì)粒1UL 0.1UGDNA 轉(zhuǎn)化率 BL 21 2-3×10 JM 109 2-3×10 DH 5a 1×10 HB 101 2-3×10 應用舉例條件：導入杯2mm (一次性使用) 電壓 2.5kv 電容 25uf 電阻 400-1000PUC 18質(zhì)粒轉(zhuǎn)化率（BL 21菌株） 電 阻 400 800 1000 轉(zhuǎn)化率 1×10 1.5×10 2-3×10 十、裝 箱 清 單1、SCIENTZ-2C基因?qū)雰x主機 1臺2、保險管3A 2只3、質(zhì)量保證書（保修卡） 1份4、合格證 1份5、使用說明書 1份6、2mm基因?qū)牒校ㄟM口） 1只7、電源線及連接線 各1副Scientz-2C基因?qū)雰x簡易實驗步驟1、收集細胞：用胰酶消化細胞，將細胞培養(yǎng)液吸入到15ml離心管中，分為6管，900rpm 5min，棄其上清。