超聲輔助提取忽地笑中加蘭他敏的工藝研究(一)

1、超聲輔助提取忽地笑中加蘭他敏的工藝研究(一)    作者：張明霞，單宇，馮煦，彭峰，江玉梅，王鳴，夏冰【摘要】 目的采用正交實驗設計探討超聲輔助提取忽地笑中加蘭他敏的最佳工藝。方法忽地笑鱗莖樣品堿化后用醋酸乙酯超聲輔助提取，用HPLC法測定加蘭他敏含量。結果最優(yōu)提取條件為：加入0.7 ml 10NaOH溶液堿化樣品，在65，210W下提取3次，10 min/次，共30 min。結論超聲輔助提取忽地笑中加蘭他敏是一種簡單、快捷、高效的提取方法。 【關鍵詞】 忽地笑； 加蘭他敏； 正交實驗； 超聲波輔助提??； 高效液相色譜Abstract：Objective

2、To study the ultrasound-associated extraction of galanthamine in Lycoris aurea by orthogonal design. MethodsGalanthamine was extracted with ethyl acetate and determined by HPLC. ResultsThe optimal ultrasound-associated extraction conditions was 0.7 ml 10NaOH, extraction temperature 65, ultrasonic po

3、wer 210W and extracting 3 times, 10 minutes each time. ConclusionThe ultrasound-associated extraction method of galanthamine in Lycoris aurea is simple and efficient.Key words：Lycoris aurea; Galanthamine; Orthogonal array design; Ultrasound-associated extraction; HPLC加蘭他敏(Galanthamine，簡稱GAL)是一個叔胺生物堿

4、，最早是在1952年由Proskurnina和Yakovleva 從石蒜科植物沃氏雪花蓮Galanthus woronowii Losink中分離得到,廣泛分布于石蒜科植物中1。有研究表明加蘭他敏對小兒麻痹后遺癥、重癥肌無力和外傷性截癱等病癥有效，且毒性較小2，3。20世紀90年代以后，加蘭他敏的氫溴酸鹽又被用于治療阿爾茨海默病(Alzheimer's Disease，AD)，并因其無心、肝毒副作用而有望成為治療該病的首選藥物4，5。在我國加蘭他敏的來源植物中，忽地笑Lycoris aurea Herb.鱗莖為石蒜屬中提取加蘭他敏的良好原料6。此外，忽地笑分布廣泛，蘊藏量大，在長江中下

5、游一帶的低山丘陵區(qū)常成大片分布7，8。鑒于加蘭他敏在醫(yī)學上的重要應用，因此對其進行開發(fā)利用研究具有十分重要的現(xiàn)實意義。本文利用溶劑浸提，并借助超聲波輔助提?。║ltrasound-associated extraction，UAE）這種新的工藝方法，詳細研究了忽地笑鱗莖中加蘭他敏的最佳提取工藝條件，并采用HPLC方法測定其中加蘭他敏的含量，為以后加蘭他敏提取分離新工藝研究提供理論基礎。1 材料與方法1.1 材料、試劑與儀器忽地笑為200606采于南京中山植物園藥物園內(nèi)，原產(chǎn)地為安徽，引種至南京中山植物園兩年，由江蘇省中國科學院植物研究所藥用植物研究中心袁昌齊研究員鑒定。除去根須，將鱗莖切成薄片

6、，60烘干24 h，冷至室溫后粉碎過80目篩待用。KQ-300DE型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；美國Agilient1100高效液相色譜儀；RE-52c旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（鞏義市英峪予華儀器廠）；德國Sartorius BP221S電子天平。乙腈及其他高效液相色譜儀所用試劑均為色譜純；加蘭他敏對照品為江蘇省中國科學院植物研究所藥用植物研究中心自制，HPLC檢測純度大于98。其他試劑為分析純。1.2 方法提取次數(shù)的選擇：稱取0.5 g忽地笑干燥鱗莖粉末,加入0.5ml 10NaOH溶液堿化樣品15 min后，加入7 ml醋酸乙酯, 在65 ，120W下提取30 min, 然后將提取過的鱗

7、莖分別在相同條件下進行第24 次提取, 結果各次加蘭他敏的提取含量分別為0.036 83%，0.009 50%，0.001 72%，0.000 35%。 表明經(jīng)過3次提取加蘭他敏基本提取完全。2 結果用HPLC測得加蘭他敏含量的結果見表2。運用SPSS13.0對表2進行統(tǒng)計處理，其方差分析結果見表3。表2 L9(34)正交實驗設計表及結果（略）表3 方差分析（略）由表2可知，影響超聲輔助提取忽地笑中加蘭他敏的4個因素由大到小的順序為：D，C，A，B,即超聲提取溫度對超聲輔助提取加蘭他敏的影響最大，然后依次是堿量、超聲功率、超聲提取時間。最佳提取工藝條件為A2B3C3D3，即加入0.7 ml 1

8、0NaOH溶液堿化樣品，在65，210W下提取3次，30 min/次，提取總時間90 min。進一步對結果進行方差分析（表3）表明，超聲提取溫度、堿量、超聲功率對忽地笑中加蘭他敏提取的影響均達到極顯著水平，超聲提取時間的影響達到顯著水平。按照正交實驗表明的最佳提取工藝條件進行驗證實驗，HPLC測定加蘭他敏含量為0.089 0%，在此工藝條件下提取樣品中的加蘭他敏含量最高。3 討論超聲輔助提取忽地笑中加蘭他敏主要是利用超聲波的空化作用，即一定頻率的超聲波對細胞的破化有助于有效成分的溶出，另外超聲波的次級效應，如機械振動、乳化、擴散、擊碎、化學效應等也能加速欲提取成分的擴散釋放并充分與溶劑混合，有

9、利于提取9，10。實驗結果表明，用醋酸乙酯為溶劑超聲輔助提取忽地笑中加蘭他敏，超聲提取溫度對加蘭他敏提取率的影響最大，然后依次是堿量、超聲功率、超聲提取時間。最佳提取工藝條件為A2B3C3D3，即加入0.7 ml 10NaOH溶液堿化樣品，在65，210W下提取3次，30 min/次，提取總時間90 min。HPLC測定加蘭他敏含量為0.089 0%，優(yōu)于正交實驗中的各提取條件。雖然超聲時間越長，提取率越高，但考慮到時間效益，超聲時間可進一步縮短。所以，選擇A2B1C3D3條件進行進一步實驗，即加入0.7 ml 10NaOH溶液堿化樣品，在65，210W下提取3次，10 min/次，共30 m

10、in，HPLC測定加蘭他敏含量為0.084 8%。雖然提取率和最佳提取工藝條件下相比有所降低，但提取時間節(jié)省2/3，相對而言，提取效率更高。與傳統(tǒng)的溶劑回流法相比較，超聲輔助提取法提取忽地笑中加蘭他敏的提取時間短，加蘭他敏提取率更高，試劑用量降低，且設備簡單，操作方便，所需材料量少，尤其適用于實驗室進行微量提取，是提取忽地笑中加蘭他敏的一種有效方法?！緟⒖嘉墨I】1楊郁. 黃花石蒜、鬼針草的化學成分和生理活性研究D.北京：中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院, 2005：64.2阮龍喜. 石蒜科植物生物堿的一些研究進展J. 藥學通報, 1988, 23(8): 453.3賈獻慧, 周銅水, 鄭穎, 等. 石蒜科植物生物堿成分的藥理學研究J.中醫(yī)藥學刊, 2001, 19(6): 573.4王曉燕, 黃敏仁, 韓正敏. 石蒜屬植物中加蘭他敏的分離提取及其應用J.南京林業(yè)大學學報(自然科學版), 2004, 28(4): 79.5馬廣恩. 加蘭他敏治療老年癡呆癥的研究概況J.藥學進展, 1998, 22(3): 153.6中國科學院植物志編委. 中國植物志，第16卷，第2冊M.北京：科學出版社, 1985：20.7吳征鎰. 新華本草綱，第1冊M.上海：上海科學技術出版社, 1988: 499.8余本祺, 周守標