食品微生物課件資料整理

1、緒言微生物概念 特點(diǎn) 種類 發(fā)展史（人物）第一章 細(xì)菌的形態(tài)與結(jié)構(gòu) 細(xì)菌(Bacteria) 是一種單細(xì)胞，具備細(xì)胞壁，呈二分裂繁殖的原核微生物。 第一節(jié) 細(xì)菌的形態(tài)一、 細(xì)菌的大小2、 細(xì)菌的基本形態(tài) 細(xì)菌的基本形態(tài)；球狀 、桿狀、螺旋狀 分別稱為球菌、桿菌和螺旋菌.(一)球菌(cocci) 細(xì)胞呈球形或近似球形(二)桿菌(bacillus)細(xì)胞呈桿狀或圓筒狀，是細(xì)菌中種類最多的 一般分為兩類。單桿菌 大腸桿菌 鏈桿菌 炭疽芽孢桿菌(三)螺旋菌(spirillarbacteria)細(xì)胞呈彎曲狀，根據(jù)其彎曲情況不同可分為弧菌和螺旋菌二類?；【?逗號弧菌 螺菌 鼠咬熱螺菌 三、細(xì)菌染色方法 細(xì)菌

2、的染色方法一般可分為單染色法、復(fù)染色法和特殊染色法3種。(一)單染色法 如美藍(lán)或石炭酸復(fù)紅等染色(二)復(fù)染色法 常用的有革蘭氏染色法和抗酸性染色法等。 革蘭氏染色法 （Gram strain) 草酸銨結(jié)晶紫染色 革蘭氏氏碘液媒染 95酒精脫色 沙黃或稀釋石炭酸復(fù)紅復(fù)染 革蘭氏染色結(jié)果 細(xì)菌染色后顯示出2種不同顏色，細(xì)菌呈紫色的稱革蘭氏陽性細(xì)菌(G+)，呈紅色的稱革蘭氏陰性細(xì)菌(G-)。 意義 細(xì)菌分類，臨床選藥。(三)特殊染色法 此法主要用來觀察細(xì)菌細(xì)胞的各種結(jié)構(gòu)，常用的特殊染色法有莢膜染色法、鞭毛染色法，芽孢染色法等。 第二節(jié) 細(xì)菌的結(jié)構(gòu) 細(xì)菌的結(jié)構(gòu)可分為基本結(jié)構(gòu)和特殊結(jié)構(gòu)。 基本結(jié)構(gòu) 細(xì)胞

3、壁 細(xì)胞膜 包括細(xì)胞質(zhì)核物質(zhì)細(xì)胞內(nèi)含物(一) 細(xì)胞壁（cell wall）是包裹在細(xì)胞膜外面較為堅(jiān)韌而又略具彈性的一層膜。約10-25nm厚。1、 G+細(xì)胞壁 ( Gram passive bacteria cell wall) 主要由二部分組成肽聚糖為G+細(xì)胞壁主要成分，占 6090其他化學(xué)成分磷壁酸為革蘭氏陽性細(xì)菌特成分，蛋白質(zhì)、多糖和少量類脂。2、G-細(xì)胞壁(Gram negative bacteria cell wall) 其細(xì)胞壁分為內(nèi)壁層和外壁層內(nèi)壁層 肽聚糖內(nèi)、內(nèi)層為脂蛋白層外壁層中、中間為磷脂層 外、最外層脂多糖外膜蛋白(OMP)外膜中多種蛋白質(zhì)的統(tǒng)稱。包括 微孔蛋白 起分子篩

4、的作用 脂蛋白 與細(xì)菌黏附及某些物質(zhì)的吸收有關(guān)。新用途 細(xì)菌分型、鑒定及流行病學(xué)調(diào)查；用作抗原生產(chǎn)疫苗。3細(xì)胞壁的功能 保護(hù)細(xì)胞及維持細(xì)胞外形的功能排斥較大外物的進(jìn)入和阻留菌體內(nèi)某些物資逸出，具選擇分子篩作用 細(xì)菌的抗原性有關(guān) 致病性有關(guān) 抗生素藥物敏感性有關(guān) 染色有關(guān) 噬菌體的敏感性有關(guān) 原生質(zhì)體（Protoplast） G+細(xì)菌經(jīng)溶菌酶或青霉素完全除去細(xì)胞壁， 形 成的僅由細(xì)胞膜包裹細(xì)胞質(zhì)的菌體。 原生質(zhì)球 G-細(xì)菌經(jīng)溶菌酶僅除去肽聚糖，形成仍有外膜層包裹的菌體。 L型細(xì)菌 指細(xì)菌自發(fā)、或經(jīng)誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)形成的遺傳穩(wěn)定的細(xì)胞壁缺陷株。 細(xì)菌的特殊結(jié)構(gòu) 細(xì)菌的特殊結(jié)構(gòu)包括 莢膜 鞭毛 菌毛 芽胞

5、（一）莢膜(capsule）某些細(xì)菌細(xì)胞壁外圍包繞一層界限分明、 且不易被洗脫的粘液性物質(zhì)，其厚度02 µm，稱為 莢膜。厚度02 µm者，稱為微莢膜。 化學(xué)組成 主要是 水 、多糖 功能 是細(xì)菌毒力的組成部分，與細(xì)菌的致病性有關(guān)。 （二）鞭毛(flagellum)所有的弧菌、螺菌，大多數(shù)的桿菌，以及極少數(shù)球菌，在菌體上附著有細(xì)長呈波狀彎曲的絲狀物稱為鞭毛。是細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)器官 化學(xué)成分 蛋白質(zhì) 鞭毛纖細(xì)，長度 320m，直徑僅1020nm，不能直接在光學(xué)顯微鏡下觀察到。(三)菌毛(pilus，fimbriae)許多革蘭氏陰性細(xì)菌菌體上比鞭毛更細(xì)、短而 直硬的絲狀附屬物，稱作菌

6、毛。菌毛量數(shù)較多(100500根)，遍布菌體表面?；瘜W(xué)成分 蛋白質(zhì) 普通菌毛 具粘附作用，幫助細(xì)菌粘附細(xì)胞上，構(gòu)成細(xì)菌的侵襲力。 性菌毛 與細(xì)菌的性接合有關(guān)。(四)芽胞 (Spore)某些細(xì)菌在一定的條件下細(xì)胞質(zhì)脫水濃縮，在菌體內(nèi)形成有多層膜包裹的圓形或卵圓形小體，稱作芽胞。芽胞折光性強(qiáng)，壁厚，不易著色。一個(gè)細(xì)菌形成一個(gè)芽孢，一個(gè)芽孢又形成一個(gè)細(xì)菌。 功能 芽孢對外界理化因素有強(qiáng)大的抵抗力。思考題1.細(xì)菌的大小、基本形態(tài)2.細(xì)菌的基本結(jié)構(gòu)和特殊結(jié)構(gòu)（試?yán)L制細(xì)菌結(jié)構(gòu)模式圖）3.比較革蘭氏陽性和陰性細(xì)菌細(xì)胞壁的異同4.細(xì)菌脂多糖的組成和功能5.細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)概念及主要功能 第二章 真菌 (fungi

7、) 真菌為不含葉綠素，以腐生或寄生方式生長，進(jìn)行有性或無性繁殖真核細(xì)胞型微生物。 細(xì)胞質(zhì)內(nèi)含有各種細(xì)胞器，如線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等，無高爾基體。 真菌種類繁多，約5000多個(gè)屬、10萬個(gè)以上的種，對人類、動(dòng)物致病的約有500個(gè)種，按其致病部位分為淺部真菌和深部真菌。真核微生物真菌 酵母菌 霉菌 蕈類 顯微藻類 原生動(dòng)物 第一節(jié) 酵母菌 酵母菌是一類單細(xì)胞真菌的俗稱，分類學(xué)上分屬于 ： 子囊菌綱和半知菌類。特征:1.   個(gè)體一般以單細(xì)胞狀態(tài)存在；2.   多數(shù)營出芽生殖，有的裂殖；3.   能發(fā)酵糖類產(chǎn)能；4. 

8、;  細(xì)胞壁常含有甘露聚糖；5.   喜在含糖量較高、酸度較大的水生環(huán)境中生長。分布： 偏酸性的含糖環(huán)境。水果、蔬菜、蜜 餞的表面，果園 土壤中與環(huán)境有關(guān)。 種類： 據(jù)1982年的資料，已知的酵母有56屬，500多種。酵母菌與人類的關(guān)系極其密切。（一） 酵母菌的形態(tài)和大小 細(xì)胞直徑比細(xì)菌粗10倍左右，因此在光學(xué)顯微鏡下可以模糊地看到它們細(xì)胞內(nèi)的各種結(jié)構(gòu)分化。酵母菌細(xì)胞的形態(tài)通常有球狀、卵圓狀、橢圓狀、柱狀或香腸狀等多種。（二） 繁殖方式 1、 無性繁殖1、 裂殖 借細(xì)胞橫分裂法繁殖,與細(xì)菌類似.如八孢裂殖酵母。進(jìn)行裂殖的酵母菌種類較少。2、 芽殖 出芽痕

9、和誕生痕： 在母細(xì)胞的細(xì)胞壁上出芽并與子細(xì)胞分開的位點(diǎn)稱出芽痕，子細(xì)胞細(xì)胞壁上的位點(diǎn)稱誕生痕。由于多重出芽，致使酵母細(xì)胞表面有多個(gè)小突起。假菌絲 有的酵母菌進(jìn)行芽殖后，長大的子細(xì)胞不與母細(xì)胞立即分離，并繼續(xù)除芽，細(xì)胞成串排列，這種菌絲狀的細(xì)胞串就稱為假菌絲。熱帶假絲酵母；產(chǎn)朊假絲酵母3、 有性生殖 適宜的條件下，二倍體細(xì)胞減數(shù)分裂形成子囊孢子。 1、有性繁殖的過程：一般通過鄰近的兩個(gè)性不同的細(xì)胞各自伸出一根管狀的原生質(zhì)突起，隨即相互接觸、局部融合并形成一個(gè)通道，再經(jīng)過質(zhì)配、核配形成雙倍體細(xì)胞接合子。接合子進(jìn)行減數(shù)分裂，形成4個(gè)或8個(gè)子核，每一個(gè)子核和周圍的細(xì)胞質(zhì)一起，在其表面形成孢子壁后就形成

10、子囊孢子。一般一個(gè)子囊可產(chǎn)生4-8個(gè)子囊孢子。 酵母菌培養(yǎng)的特征1. 菌落形態(tài)特征：大而厚，圓形，光滑濕潤，粘性，顏色單調(diào)。常見白色、土黃色、紅色。 2.馬鈴薯培養(yǎng)基 第二節(jié) 霉菌(molds) 霉菌的形態(tài)結(jié)構(gòu) 霉菌的菌落特征 霉菌的繁殖及生活史 霉菌的代表屬 概念 分類位置 分布 應(yīng)用 危害一、 霉菌的形態(tài)結(jié)構(gòu) 霉菌的菌體由分枝或不分枝的菌絲（hyphae)構(gòu)成。菌絲是真菌營養(yǎng)體的基本單位。菌絲是中空管狀結(jié)構(gòu)，直徑一般310m，有分枝。 按功能分有隔菌絲和無隔菌絲。 按功能分 1、 有隔菌絲 2、 無隔菌絲按分化程度分： 依形態(tài)分：1、營養(yǎng)菌絲(Vegetatile hypha): 在固體培

11、養(yǎng)基上伸入基內(nèi)的菌絲. 行吸收養(yǎng)料之功能.2、氣生菌絲(Aerial hypha): 向空中生長的菌絲. 發(fā)育到一定階段可分化成 孕育（繁殖）菌絲（Reproductive hypha）.二、霉菌的培養(yǎng)特征三、霉菌的繁殖 有性繁殖 無性繁殖一、 無性繁殖1. 子囊孢子形成特征：形成于菌絲的特化結(jié)構(gòu)孢子囊內(nèi)。 孢子形態(tài)：近圓形。 舉例：根霉、毛霉。2. 分生孢子(Canidinm):形成特征：由分生孢子梗頂端細(xì)胞特化而成的單個(gè)或簇生的孢子。 孢子形態(tài)：極多樣。舉例：曲霉、青霉。3. 節(jié)孢子形成特征：由菌絲斷裂而成。孢子形態(tài)：常呈成串短柱狀。舉例：白地霉。4. 厚垣孢子形成特征：部分菌絲細(xì)胞質(zhì)濃縮

12、、變圓，周圍生出厚壁而成。孢子形態(tài)：圓形、柱形等。 舉例：總狀毛霉。二、有性繁殖1. 卵孢子有性結(jié)構(gòu)及其形態(tài)特征：由大小不同的配子囊結(jié)合后發(fā)育而成。 小配子囊稱雄器；大配子囊稱藏卵器。 所屬分類地位：卵菌綱。2. 接合孢子 有性結(jié)構(gòu)及其形態(tài)特征： 是由菌絲生出的結(jié)構(gòu)大小相似、形態(tài)相同或略有不同兩個(gè)配子囊接合后發(fā)育而成。所屬分類地位：接合菌綱3.子囊孢子有性結(jié)構(gòu)及其形態(tài)特征：在子囊中形成。 子囊：兩性細(xì)胞接觸以后形成的囊狀結(jié)構(gòu)。子囊的形成有兩種方式： 兩個(gè)營養(yǎng)細(xì)胞直接交配而成，其外面無菌絲包裹； 從一個(gè)特殊的、來自產(chǎn)囊體菌絲（稱為產(chǎn)囊絲）的結(jié)構(gòu)上產(chǎn)生子囊，多個(gè)子囊外面被菌絲包圍形成子實(shí)體，稱為子

13、囊果。 所屬分類地位：子囊菌綱子囊果的形狀:子囊果(Ascocarp)： 子實(shí)體（一種有性結(jié)構(gòu)) ,多個(gè)子囊外部由菌絲體組成共同的保護(hù)組織結(jié)構(gòu), 稱為子囊果。子囊包在其中。子囊果有三種類型：閉囊殼 子囊殼 子囊盤5. 擔(dān)孢子有性結(jié)構(gòu)及其形態(tài)特征： 擔(dān)子菌所特有，經(jīng)兩性細(xì)胞核配合后產(chǎn)生的外生孢子。因著生在擔(dān)子上而得名。 所屬分類地位：擔(dān)子菌綱四、常用與常見霉菌的代表屬（一）根霉分類地位 分布 形態(tài)特征 繁殖方式 代表種 應(yīng)用(二)毛霉代表種總狀毛霉、高大毛霉、魯氏毛霉、梨形（三） 曲霉（四） 青霉酵母菌細(xì)胞結(jié)構(gòu)酵母菌的細(xì)胞 結(jié)構(gòu)與其他真核生物基本相同， 右圖是電子顯微鏡下的釀酒酵母 細(xì)胞結(jié)構(gòu)示意

14、圖。霉菌的繁殖方式 第三章 病毒 病毒的概念：含有一種類型的核酸，只能在活的、敏感細(xì)胞內(nèi)以復(fù)制方式增殖的非細(xì)胞型微生物。二、病毒的特性 1、 病毒個(gè)體極小。用普通光學(xué)顯微鏡不能查見，必須用電子顯微鏡觀察才能見到。 2、 沒有細(xì)胞結(jié)構(gòu)。每種病毒只含有一種核酸；DNA或RNA。 3、 嚴(yán)格寄生在活的宿主細(xì)胞上。4、 對抗生素不敏感，對干擾素敏感 。 第一節(jié) 病毒的形態(tài)與結(jié)構(gòu) 一、病毒的大小與形態(tài)(一) 病毒的大小 病毒大小的測量單位是 納米(nm)。(二) 病毒的形態(tài) 形態(tài)有球形、桿形、磚形、絲狀、蝌蚪狀等。二、病毒的化學(xué)組成與結(jié)構(gòu)病毒子（virion): 形態(tài)、結(jié)構(gòu)完整，有感染性的病毒顆粒。（一

15、）核酸 決定病毒的遺傳和變異。1.特點(diǎn)： （1）病毒只含一種核酸，構(gòu)成病毒體的芯髓。 （2）核酸結(jié)構(gòu)類型多化樣 核酸可分單股或雙股、線狀或 環(huán)狀、分節(jié)段或 不分節(jié)段 。 mRNA的堿基序列作為標(biāo)準(zhǔn)，凡與此相同 的核酸稱為正股，與其互 補(bǔ)的則為負(fù)股。 每個(gè)病毒粒子的核酸含量因種而異,從1%一2%至35%一45%。 核酸長度是一定的，一般由1000nt-200kb核苷酸組成。 所含基因數(shù)目差異也很大，小病毒只含4-8個(gè)基因，大病毒如痘病毒則含有多于200個(gè)基因。 有些病毒去除囊膜和衣殼，裸露的DNA或RNA也能感染細(xì)胞，這樣的核酸稱為傳染性核酸。 病毒核酸能作為mRNA或者能利用宿主細(xì)胞的RNA聚

16、合酶轉(zhuǎn)錄病毒的mRNA病毒核酸不分節(jié)段。（二）蛋白質(zhì)1.非結(jié)構(gòu)蛋白：指由病毒基因組編碼的，在病毒復(fù)制或基因表達(dá)調(diào)控過程中具有一定功能， 但與病毒結(jié)構(gòu)無關(guān)的蛋白質(zhì)。 2. 結(jié)構(gòu)蛋白：系指構(gòu)成一個(gè)形態(tài)成熟的有感染性 的病毒顆粒所必需的蛋白質(zhì)。是構(gòu)成病毒衣殼的成分和囊膜的主要成分。衣殼衣殼是圍繞核酸的蛋白質(zhì)外殼（1）對基因組起到保護(hù)作用，免其受到外界環(huán)境的影響。（2）對無包膜的病毒而言，在病毒吸附到宿主細(xì)胞上時(shí)，蛋白質(zhì)衣殼的吸附蛋白與宿主細(xì)胞上的受體結(jié)合。 （3）抗原性：誘導(dǎo)特異性抗體、致敏淋巴細(xì)胞。1、二十面體衣殼(icosahedral capsids) 二十面體有20個(gè)等邊三角形的平面，12

17、個(gè)頂角，30條邊。2、螺旋衣殼(helical capsids) 螺旋衣殼類似于一個(gè)圓筒，RNA在中心部分，盤旋呈螺旋狀，核酸的外面包圍著 蛋白質(zhì)衣殼，它是由結(jié)構(gòu)亞單位一個(gè)緊挨著 一個(gè)地呈螺旋狀排列而成。3、復(fù)合衣殼(complexform capsids) 復(fù)合對稱型一個(gè)代表是痘病毒。噬菌體的衣殼也屬復(fù)合型。（三）脂類、糖類 主要存在于囊膜中，脂溶劑可去除囊膜，使病毒喪失活性。來自宿主細(xì)胞，與囊膜病毒的吸附和穿入宿主細(xì)胞的作用有關(guān)。1、囊膜(envelope) 許多病毒粒子的外面包圍著一層彈性膜。囊膜是在病毒復(fù)制時(shí)因出芽穿過宿主細(xì)胞膜時(shí)獲得的。囊膜由蛋白質(zhì)和類脂構(gòu)成，其中糖蛋 白系病毒基因組

18、所編碼，脂質(zhì)來源于宿主細(xì)胞。2、刺突(spike) 一些病毒的囊膜上具有功能性的突起物。刺突有兩種 神經(jīng)氨酸酶 病毒吸附到宿主細(xì)胞時(shí)，該酶與細(xì)胞膜發(fā)生作用。流感病毒，新城疫病毒。 血凝素 可促進(jìn)病毒凝集紅血球細(xì)胞的能力。流感病毒、腺病毒。 第二節(jié) 病毒的復(fù)制(replication) 病毒利用它自身的遺傳物質(zhì)作為模板，以宿主細(xì)胞的酶系統(tǒng)、原材料、能量來合成病毒自身的核酸和蛋白質(zhì)，再組裝成完整的病毒顆粒。 上述過程也就是病毒感染宿主，引致疾病的過程 。 病毒的復(fù)制時(shí)間因種而異 如脊髓灰質(zhì)炎病毒在神經(jīng)細(xì)胞中增殖需6-8h，單純皰疹病毒在上皮細(xì)胞中需1230h，腺病毒在呼吸道細(xì)胞中的復(fù)制周期則需48

19、h 。病毒的一步生長曲線：以感染時(shí)間為橫坐標(biāo)，病毒效價(jià)為 縱坐標(biāo)，繪制出的病毒特征曲線。 病毒復(fù)制周期基本上可劃分5個(gè)連續(xù)的階段：吸附，穿入和脫殼，生物合成、裝配及釋放。 研究病毒的復(fù)制周期有助于了解病毒的致病機(jī)理，從而采取有效措施阻斷其正常復(fù)制，達(dá)到防治病毒性疾病的目的。一、病毒的增殖過程 (一)吸附(adsorption) 病毒吸附開始其增殖的第一步。（1） 無囊膜病毒 細(xì)胞種類、遺傳特性均影響病毒的寄生。與宿主靶細(xì)胞上的受體結(jié)合。（2） 有囊膜病毒 囊膜上特異的分子與宿主靶細(xì)胞上精確的受體結(jié)合。（3） 痘病毒例外 能吸附在任何細(xì)胞和任何適宜的帶電荷的細(xì)胞表面，并不需要特殊的受體。(二)穿

20、人(penetration)和脫殼(uncoating) 病毒進(jìn)入細(xì)胞的過程叫做穿入。宿主細(xì)胞內(nèi)的酶類消化衣殼，使之溶解的過程稱之脫殼。大約有3種方式(1)直接穿入： 病毒吸附到宿主細(xì)胞膜上，與受體位點(diǎn)相配，細(xì)胞膜打開缺口，病毒核酸進(jìn)入細(xì)胞漿。(2)內(nèi)吞作用： 完整的病毒被吞入(類似吞噬作用)，胞內(nèi)酶消化衣殼，釋放出病毒核酸。(3)融合： 病毒的囊膜與細(xì)胞膜融合，核衣殼進(jìn)入細(xì)胞。胞內(nèi)酶消化衣殼，釋放出病毒核酸。這種方式有利于病毒的侵入和散播，可直接從一個(gè)細(xì)胞直接進(jìn)入另一個(gè)細(xì)胞，保護(hù)病毒免受外界環(huán)境的干擾。（三)生物合成(biosynthesis)病毒生物合成的重要內(nèi)容包括基因組的復(fù)制，mRNA

21、的轉(zhuǎn)錄、病毒蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)譯。各種病毒有不同的生物合成場所，如腺病毒的核酸在宿主細(xì)胞核中進(jìn)行，而脊髓灰質(zhì)炎病毒在核酸細(xì)胞漿中進(jìn)行。病毒生物合成的重要步驟是mRNA的合成，根據(jù)核酸類型和mRNA合成方法不同可將病毒分成6組。(四)裝配(assmbly) 由合成的蛋白質(zhì)衣殼和核酸組裝配成完整的子代病毒粒子的過程稱為裝配。病毒核酸和蛋白質(zhì)的生物合成是分別進(jìn)行的。大多數(shù)DNA病毒 核酸在細(xì)胞核內(nèi)復(fù)制，蛋白質(zhì)在細(xì)胞質(zhì)合成，最后在細(xì)胞核內(nèi)裝配。 大多數(shù)RNA病毒 核酸復(fù)制和蛋白質(zhì)的合成均在細(xì)胞質(zhì)中進(jìn)行。(五) 釋放(release)成熟的病毒粒子從感染細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)移到細(xì)胞外的過程稱為釋放。 （1）無囊膜的二十面體

22、對稱型病毒 以細(xì)胞破裂釋放，如腺病毒。 （2）有囊膜的病毒 以出芽方式帶上核膜進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)中，再由胞質(zhì)釋放出來，在釋放過程中獲得囊膜。痘病毒。 （3）一些病毒留在細(xì)胞內(nèi)，通過細(xì)胞之間的接觸而擴(kuò)散 。流感病毒。 第三節(jié) 病毒的培養(yǎng)一、樣品處理 病理組織磨碎制成1：10懸液，經(jīng)3000r/min離心15min取上清液。加青霉素、鏈霉素 1000-10000單位 /ml，37 1小時(shí) 4 處理24小時(shí)備用 。 二、 病毒的培養(yǎng) （一）動(dòng)物接種 1、本動(dòng)物 2、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 小白鼠、豚鼠、大鼠、兔或猴等。每種病毒都有自己的易感宿主范圍。 （二）雞胚培養(yǎng) 受精雞胚作為病毒生長培養(yǎng)基具有價(jià)廉、無 菌，易于操作等

23、優(yōu)點(diǎn)。 1、 選用孵育711天的受精卵。 2、 將病毒材料用注入雞胚的定部位(如絨毛尿囊腔、卵黃囊、羊膜腔、尿囊膜）。 3、 接種后，受精卵在37 培養(yǎng)，使病毒增殖。（三）細(xì)胞培養(yǎng) 細(xì)胞(組織)培養(yǎng)是常用方法，幾乎所有的動(dòng)物病毒均可進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。致細(xì)胞病變效應(yīng)(cytopathogenic effect，CPE) 和病毒細(xì)胞反應(yīng)的結(jié)果可以判斷病毒是否在細(xì)胞中增殖。 1、培養(yǎng)細(xì)胞的類型： (1)原代細(xì)胞 動(dòng)物組織經(jīng)胰蛋白酶消化處理，使細(xì)胞分散培養(yǎng)而得到的細(xì)胞。常用腎和睪丸等，胚胎和幼畜的細(xì)胞比較容易生長。 優(yōu)點(diǎn) 是病毒對天然宿主的細(xì)胞最為敏感。 缺點(diǎn) 是往往含有潛伏的病毒，如牛組織中常帶有牛病毒

24、性腹瀉病毒；猴組織中常攜sv40病毒。（2）繼代細(xì)胞 原代細(xì)胞用胰蛋白酶處理， 繼續(xù)培養(yǎng)的細(xì)胞。仍為二倍體，因此稱為二倍體細(xì)胞。 優(yōu)點(diǎn)是細(xì)胞碎瑣較少，細(xì)胞均勻，對病毒的敏感性與原代細(xì)胞差別不大，而且容易得到。這種細(xì)胞可在體外連續(xù)傳代40-60次而性狀保持正常。(3) 傳代細(xì)胞系(cell lines) 來源腫瘤組織或正常組織細(xì)胞在培養(yǎng)過 程中腫瘤化了。屬于異倍體細(xì)胞。 如 HeLa、PKl5、BHK21等細(xì)胞系。 優(yōu)點(diǎn)是容易培養(yǎng)，生長迅速，隨時(shí)可以獲得。缺點(diǎn) 是對病毒的分離不夠敏感，也不能用此制備疫苗，因?yàn)閷⑺鼈兘臃N到動(dòng)物體內(nèi)有引起腫瘤的潛在危險(xiǎn)。4、細(xì)胞培養(yǎng)的方法 (1) 靜置培養(yǎng)。 將細(xì)胞

25、懸液分裝在適宜的玻瓶，放置恒溫箱內(nèi)靜置培養(yǎng)。細(xì)胞沉降并貼附在玻面上后生長分裂，最后長成細(xì)胞單層。(2) 轉(zhuǎn)管培養(yǎng) 細(xì)胞在玻瓶內(nèi)培養(yǎng)時(shí)，玻瓶不斷緩慢旋轉(zhuǎn)(810rh)，細(xì)胞貼附于玻瓶四周，并長成單層。此法培養(yǎng)面積大，細(xì)胞接觸空氣多，生長良好。大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)疫苗的生產(chǎn)均用此法。5、細(xì)胞培養(yǎng)的過程 雞胚 剪碎 洗滌 胰酶消化 加入營養(yǎng)液 37 培養(yǎng)。(3) 懸浮培養(yǎng) 細(xì)胞在懸浮條件下培養(yǎng)，并不斷通人過濾滅菌的空氣。此法主要用于大量生產(chǎn)細(xì)胞。 也用于疫苗的生產(chǎn)。(4) 組織塊培養(yǎng) 這是最原始的方法。將組織剪碎后令其粘附在玻面上，加入營養(yǎng)液后培養(yǎng)。此法手續(xù)麻煩，不能大量制備，目前極少應(yīng)用。5、細(xì)胞病變效

26、應(yīng)(Cytopathic effect，CPE)： 病毒在感染的細(xì)胞中可以引起幾種不同表現(xiàn)的細(xì)胞病變效應(yīng)。由于CPE甚為穩(wěn)定，因此能夠作為病毒鑒定標(biāo)志之一。CPE相似不一定就是屬于同類或相近的病毒；另外還有一些病毒在細(xì)胞中生長時(shí)不導(dǎo)致CPE的表現(xiàn)。CPE大致可以分為4類： (1) 細(xì)胞的折光力增強(qiáng)，形態(tài)逐漸變圓，細(xì)胞死亡。 如腸道病毒。 (2) 細(xì)胞聚集成叢 如大多數(shù)腺病毒。 (3) 細(xì)胞融合形成多核的巨細(xì)胞，稱為合胞體，如副粘病毒、牛白血病病毒等。 (4) 胞漿中有空泡形成， 如猴病毒SV40、呼腸孤病毒等。 第四節(jié) 病毒的檢測一、電子顯微鏡和光學(xué)顯微鏡檢查 1、電子顯微鏡檢查是病毒研究與病

27、毒性疾病診斷的重要方法之一。1) 正染法：超薄切片法 超薄切片法的優(yōu)缺點(diǎn)： 優(yōu)點(diǎn)：可觀察病毒形態(tài)和形態(tài)發(fā)生過程 缺點(diǎn)：操作復(fù)雜，費(fèi)時(shí)，但標(biāo)本可長時(shí)間保存2)負(fù)染技術(shù)負(fù)染是指通過重金屬鹽在樣品四周的堆積而加強(qiáng)樣品外周的電子密度，使樣品顯示負(fù)的反差，襯托出樣品的形態(tài)和大小。 負(fù)染法的優(yōu)缺點(diǎn)： 優(yōu)點(diǎn)：快速簡易（10-20min）；分辨率高；圖象清晰地病毒結(jié)構(gòu)缺點(diǎn)：敏感性低，要求病毒量在107以上；所有樣品應(yīng)處于懸浮狀態(tài) 2、光學(xué)顯微鏡檢查 包涵體檢查病毒感染細(xì)胞后在光學(xué)光學(xué)顯微鏡所見到的形態(tài)。病毒的的成分 狂犬病毒的Negri氏體病毒合成的工廠 痘病毒量病毒晶格狀排列的顆粒 呼腸孤病毒、腺病毒等。

28、二、血清學(xué)方法 1、紅細(xì)胞凝集（HA）紅細(xì)胞凝集抑制試驗(yàn)（HI）一些病毒具有血凝性 流感病毒、雞新城疫病毒、兔出血綜和癥病毒等。對應(yīng)的抗血清 (抗體）使其血凝抑制。 2、中和反應(yīng) 3、免疫擴(kuò)散試驗(yàn) 4、熒光抗體技術(shù) 5、酶免疫檢測技術(shù) 三、現(xiàn)代分子檢測技術(shù)常用于病毒核酸檢測。靈敏、快速。PCR技術(shù)、核酸雜交、酶切圖譜分析、DNA芯片技術(shù)等。四、病毒的理化特性鑒定 1、病毒的核酸類型 培養(yǎng)物添加抑制劑 DNA或RNA酶酶切 2、對理化因素的抵抗力 脂溶性試驗(yàn) 耐酸性試驗(yàn) 溫度敏感試驗(yàn) 消毒劑敏感試驗(yàn) 第四章 細(xì)菌的生理 營養(yǎng)要求 細(xì)菌代謝 細(xì)菌培養(yǎng)條件 生長繁殖規(guī)律及特點(diǎn) 理論上分析細(xì)菌生命活動(dòng)

29、的基本規(guī)律。生產(chǎn)實(shí)踐上人工培養(yǎng) 細(xì)菌鑒定 疫苗的制造 了解細(xì)菌的致病性和免疫機(jī)制抗藥性 一、細(xì)菌的物理性狀1、 光學(xué)性質(zhì) 細(xì)菌為半透明體。當(dāng)光線照射至細(xì)菌，部分被吸收，部分被折射，故細(xì)菌懸液呈混濁狀態(tài)。 2、表面積 細(xì)菌體積微小，表面積大，有利于同外界進(jìn)行物質(zhì)交換。葡萄球菌直徑 1m。 1cm3體積表面積=60000cm2； 直徑為1cm的生物體。 cm3體積的表面積= 6cm2，兩者相差1萬倍。 3、帶電現(xiàn)象 細(xì)菌固體成分的50%80%是白質(zhì)，蛋白質(zhì)由兼性離子氨基酸組成。革蘭陽性菌pI為2-3，革蘭陰性菌pI為4-5，故在近中性或弱堿性環(huán)境中，細(xì)菌均帶負(fù)電荷，尤 以前者所帶負(fù)電荷更多。 4、

30、半透性 細(xì)菌的細(xì)胞壁和細(xì)胞膜都有半透性，允許水及部分小分子物質(zhì)通過，有利于吸收營養(yǎng)和排出代謝產(chǎn)物。5、滲透壓 細(xì)菌體內(nèi)含有高濃度的營養(yǎng)物質(zhì)和無機(jī)鹽，一般革蘭陽性菌的滲透壓高達(dá) 2025個(gè)大氣壓，革蘭陰性菌為56個(gè)大氣壓。細(xì)菌所處一般環(huán)境相對低滲，但有堅(jiān)韌細(xì)胞壁的保護(hù)不致崩裂。 二、細(xì)菌需要的營養(yǎng)物質(zhì)(nutrients) 細(xì)菌在生長過程中，需要從外界吸收營養(yǎng)物質(zhì)。 營養(yǎng)物質(zhì) 是供給細(xì)菌分解和合成代謝所用的物質(zhì)。以維持它們完成各種生理活動(dòng)，繁殖后代，保持其生命的延續(xù)性。 細(xì)菌的營養(yǎng)物質(zhì)可以分成兩類：1、必需的營養(yǎng)物質(zhì)，沒有它細(xì)胞不能生長。2、非必需的營養(yǎng)物質(zhì)，有了它可以被細(xì)胞利用，沒有它不影響細(xì)

31、胞生長。這些物質(zhì)大部分以有機(jī)物或無機(jī)物形式提供，小部分可以由氣體物質(zhì)提供，包括水分、碳源、氮 源、無機(jī)和生長因子。1、水分(water) 在細(xì)菌細(xì)胞中，水是主要組成成分，約占細(xì)胞干重的70一90。水也是最好的溶劑和介質(zhì)，保證細(xì)胞中生理生化反應(yīng)的正常進(jìn)行、營養(yǎng)物的吸收和代謝產(chǎn)物的分泌。維持細(xì)胞的滲透壓和控制胞內(nèi)溫度。因此，水是細(xì)菌生長不可缺少的物質(zhì)。2、碳源 (carbon source) 構(gòu)成細(xì)菌固有成分和代謝產(chǎn)物的碳素來源；細(xì)菌的能量來源。細(xì)菌可利用的碳源種類很多，從簡單的無機(jī)碳到復(fù)雜的有機(jī)碳化合物都能被利用。最好碳源是單糖(葡萄糖、果糖)和雙糖 (麥芽糖、乳糖)和多糖(淀粉、糊精) 。3、

32、氮源 (nitrogen source) 構(gòu)成細(xì)菌 細(xì)胞 物質(zhì)的蛋白質(zhì)、氨基酸、核酸和含氮代謝產(chǎn)物，一般不能提供能量。氮源可分為無機(jī)氮源和有機(jī)氮源。 1)無機(jī)氮源 包括碳酸銨、硫酸銨、硝酸鹽、尿素、 NH、N等。細(xì)菌一般都能利用銨鹽或硝酸鹽作為氮源。 2）有機(jī)氮源包括 牛肉膏、蛋白胨、酵母膏。4、無機(jī)鹽(mineral salts) 是細(xì)菌生長的必需物質(zhì)。它們?yōu)榧?xì)胞生長提供必需的金屬或非金屬元素。 構(gòu)成細(xì)菌細(xì)胞的各種組分； 調(diào)節(jié)細(xì)胞的滲透壓、pH值和氧化還原電位； 有些元素如硫、鐵等可以供作自養(yǎng)微生物的能源。 細(xì)菌通常需要 Mg 、k 、Ca 、 Fe5、生長因子(growth factor)

33、 生長因子是細(xì)菌生長不可缺少的微量有機(jī)物質(zhì) 維生素 硫胺素、 核黃素。氨基酸 是細(xì)菌生長所必需的。某些細(xì)菌因缺乏某種酶類而不能自行合成特殊的氨基酸，必須由外界供給游離氨基酸或小分子肽。嘌呤和嘧啶 也是某些細(xì)菌的生長因子。它們的功能一般是構(gòu)成酶的輔基、輔酶或核酸的組成成分。三、細(xì)菌的營養(yǎng)類型 根據(jù)細(xì)菌生長所需要的碳源物質(zhì)分為 異養(yǎng)型 必須以復(fù)雜的有 機(jī)物作為碳源。自養(yǎng)型 能以簡單的無機(jī)物如CO2 作為 重要碳源和唯一碳源。根據(jù)細(xì)菌生長所需的能源分為 化能營養(yǎng)型 ；光能營養(yǎng)型。細(xì)菌可以劃分為光能自養(yǎng)型、光能異養(yǎng)型、化能自養(yǎng)型與化能異養(yǎng)型。1、光能自養(yǎng)型(photoautotroph)具有光合色素（

34、葉綠素），以光作為能源，并以CO2作為唯一碳源或主要碳源。藍(lán)細(xì)菌、紅硫細(xì)菌、綠硫細(xì)菌。2、光能異養(yǎng)型(photoheterotroph) 細(xì)菌具有光合色素，以光作為能源，它們也能利用CO2，但不能作為唯一碳源。必須在有機(jī)物存在情況下才能生長。 紅螺菌，這類細(xì)菌能利用低分子有機(jī)物迅速增殖，故而有可能用來凈化有機(jī)廢水，消除污染。3、化能自養(yǎng)型(chemoautotroph) 細(xì)菌生長所需的能量來自無機(jī)物氧化放出來的化學(xué)能，以無機(jī)的CO2或碳酸鹽作為碳源。 硫化細(xì)菌、硝化細(xì)菌、氫細(xì)菌和鐵細(xì)菌等，它們廣泛分布于自然界，對物質(zhì)轉(zhuǎn)換起重要作用4、化能異養(yǎng)型(chemoheterotroph) 以有機(jī)化合物

35、代謝作為碳源和能源。根據(jù)所利用的有機(jī)物的特性分為腐生菌、寄生菌 兼性腐生菌 一些病原菌常常是 兼性寄生菌，如結(jié)核桿菌和巴氏桿菌等。四、細(xì)菌的呼吸(respiration) 細(xì)菌從物質(zhì)氧化獲得能量的過程稱為呼吸。 有氧呼吸， 無氧呼吸 以有機(jī)物為基質(zhì)的生物氧化過程中，氧作為最終電子受氫體的，稱為有氧呼吸； 以無機(jī)物作為最終電子受體，稱為無氧呼吸； 以有機(jī)物作為最終電子受體的，稱為發(fā)酵。不同呼吸類型的細(xì)菌1、需氧菌(aerobic bacteria) 必須在有氧的環(huán)境中才能生長，它們通過有氧呼吸的方式獲得能量。許多常見細(xì)菌屬此類 結(jié)核桿菌、枯草桿菌、放線菌、真菌。這類微生物在瓊脂平板表面和液體培養(yǎng)

36、基的淺層中生長良好。2、厭氧菌(anaerobic bacteria) 厭氧菌的生長不需要分子氧。它們依靠無氧 呼吸或發(fā)酵而生活。 這些細(xì)菌又分為2種類型： 專性厭氧菌 這類細(xì)菌必須在嚴(yán)格無氧條件下才能生長，氧對它們有毒，如破傷風(fēng)桿菌等。 微氧厭菌 這類細(xì)菌暴露在氧中并不被殺死，如大多數(shù)乳酸菌，它們的產(chǎn)能實(shí)際上不需要氧，但氧分子對它們無害。3、兼性厭氧菌(facultative anaerobic bacteria)在有氧或無氧環(huán)境中都能生長，可以不同氧化方式獲得能量。 許多細(xì)菌屬此類。大腸桿菌，在缺氧時(shí)進(jìn)行無氧呼吸；有氧時(shí)則進(jìn)行有氧呼吸，將有機(jī)物徹底氧化成CO2和H20。 最近從大腸桿菌分離

37、出缺乏超氧化物歧化酶的突變株，這些突變株都為專性厭氧菌，短期暴露空氣既被殺死，所以認(rèn)為超氧化物歧化酶是一切與空氣接觸的微生物不可缺少的酶。五、 細(xì)菌的分解代謝(catabolism)（一）糖的利用 不同細(xì)菌利用糖的能力不同，即便是都能利用某一種糖，但代謝途徑可能不同，產(chǎn)物也不相同。 根據(jù)這一原則可選擇某種細(xì)菌生長最佳碳源及鑒定菌種。 最容易利用的是葡萄糖。此外，果糖、半乳糖等單糖；也可以利用糖醇，如甘露醇進(jìn)行生長。 （一) 碳源利用試驗(yàn) (carbohydrate utilization test） (二) 單糖發(fā)酵試驗(yàn) (carbohydrate fermentation test) (三)

38、 枸櫞酸鹽利用試驗(yàn) (citrate utilization test) (四) VP試驗(yàn) (Voges-Proskauer test，VP test) (五) 甲基紅試驗(yàn) (methyl red test，MR test)(二)、蛋白質(zhì)與氨基酸的分解 大多數(shù)細(xì)菌不分解天然蛋白質(zhì)，如大腸桿菌與其它腸細(xì)菌不利用蛋白質(zhì)，但芽孢桿菌，變形桿菌等分解蛋白質(zhì)能力強(qiáng)。所以，微生物利用蛋白質(zhì)的能力可以作為菌種分類依據(jù)之一。 1、明膠液化試驗(yàn)(gelatin liquefaction test) 2、吲哚試驗(yàn)(靛基質(zhì)試驗(yàn)，Indole test) 3、硫化氫試驗(yàn)(hydrogen sulfide test)細(xì)

39、菌的生化反應(yīng)是鑒別細(xì)菌的重要手段。其中吲哚試驗(yàn)、甲基紅試驗(yàn)、VP試 驗(yàn)和枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)，簡稱為IMViC試驗(yàn)，常用于大腸桿菌和產(chǎn)氣桿菌的鑒別。 典型的大腸桿菌的IMViC試驗(yàn)結(jié)果是“一 一”，而產(chǎn)氣桿菌是“一一”。六、細(xì)菌合成代謝(anabolism) 細(xì)菌除了合成菌體必需成分外，還合成一些比較復(fù)雜的特殊產(chǎn)物。這些產(chǎn)物可積累在細(xì)胞內(nèi)，或排出細(xì)胞外積累在它們生活的環(huán)境中。 1、熱原質(zhì)(pyrogen)許多革蘭氏陰性菌在生長中能產(chǎn)生一種耐熱物質(zhì)，將它注入人體或動(dòng)物體內(nèi)，可以引起發(fā)熱反應(yīng)，這種物質(zhì)被稱為熱原質(zhì)。熱原質(zhì)是革蘭氏陰性菌的脂多糖。2、毒素（toxin） 細(xì)菌的一些代謝產(chǎn)物對動(dòng)植物細(xì)胞有毒

40、殺作用的稱毒素。毒素大多具有蛋白質(zhì)的性質(zhì)，其毒性很強(qiáng)，包括外毒素和內(nèi)毒素。 肉毒桿菌產(chǎn)生的內(nèi)毒毒素、破傷風(fēng)桿菌產(chǎn)生的破傷風(fēng)毒素的毒性強(qiáng)，這些毒素是菌體生長過程產(chǎn)生并分泌到細(xì)胞外的，因此稱為外毒素。3、細(xì)菌素大多數(shù)細(xì)菌會產(chǎn)生抑制或殺死近緣細(xì)菌的物 質(zhì)，把這些物質(zhì)稱為細(xì)菌素。細(xì)菌素與抗生素不同，不具抗生素那樣的較廣泛的抗菌譜，只有具有特異性細(xì)菌素受體的近緣細(xì)菌才對細(xì)菌素敏感，吸附細(xì)菌素而被殺死。由于細(xì)菌之間產(chǎn)生的細(xì)菌素是不同的，因此有可能利用細(xì)菌素鑒定細(xì)菌。4、色素許多細(xì)菌在培養(yǎng)過程中合成的一些帶有不同顏色的代謝產(chǎn)物。常見的色素有紅、黃、綠、褐黑等色?？煞譃樗苄陨睾椭苄陨?。水溶性色素 可使

41、培養(yǎng)基帶上顏色，如綠膿桿菌產(chǎn)生綠膿菌素可使培養(yǎng)基呈黃綠色。脂溶性色素 局限在菌落上面，不擴(kuò)散到培養(yǎng)基內(nèi)，如金黃色葡萄球菌的色素等。七、 細(xì)菌的培養(yǎng)(culture)（一）細(xì)菌的培養(yǎng)條件 細(xì)菌在適宜的環(huán)境條件下才能生長繁殖。影響生長的環(huán)境因素很多諸如營養(yǎng)、溫度、pH、氧及其他氣體等等。 1、營養(yǎng)物質(zhì) 根據(jù)各種細(xì)菌不同的營養(yǎng)要求，選用不同的培養(yǎng)基，以滿足其生長的需要。2、溫度 原核生物對溫度的適應(yīng)表現(xiàn)為多樣性，范圍7.5 75之間。最適生長溫度意味著維持最大速率生長的溫度。大體上分為三類 嗜熱菌 4590條件下生長， 嗜冷菌 一7520范圍內(nèi)生長。嗜溫菌 2045 3、pH 多數(shù)細(xì)菌最適生長的pH

42、范圍很窄，約為6.08.0。多數(shù)病原性細(xì)細(xì)菌(pH7.2-7.6)在中性或微堿環(huán)境中生長良好。 4、氣體 微生物對氣體的需求根據(jù)細(xì)菌對氧的需求可分為需氧菌、厭氧菌和兼性厭氧菌。5、滲透壓（二）培養(yǎng)基（culture medium）是人工配制的適合某些微生物生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)。 培養(yǎng)基的種類 1、按物理性狀 液體培養(yǎng)基 增菌 試管斜面 保存菌種 固體培養(yǎng)基 瓊脂平板 分離純化細(xì)菌 半固體培養(yǎng)基 保存菌種 2、按用途 1）基礎(chǔ)培養(yǎng)基 含有一般細(xì)菌生長所需的最基本 成分培養(yǎng)基。 如普通瓊脂培養(yǎng)基。 2）營養(yǎng)培養(yǎng)基 于基礎(chǔ)培養(yǎng)基加入血液、血清、糖等營養(yǎng)豐富成分，可使?fàn)I養(yǎng)要求高的細(xì)菌生長的培養(yǎng)基。 如鮮

43、血瓊脂培養(yǎng)基。3) 鑒別培養(yǎng)基 在培養(yǎng)基中加有能與目的菌的代謝產(chǎn)物發(fā)生顯色反應(yīng)的指示劑，從而達(dá)到鑒別某種細(xì)菌目的培養(yǎng)基。 如 糖發(fā)酵培養(yǎng)基。 4) 選擇培養(yǎng)基 根據(jù)某些細(xì)菌的特殊營養(yǎng)或?qū)δ承┗瘜W(xué)物質(zhì)的抗性而設(shè)計(jì)的培養(yǎng)基要求的培養(yǎng)基。 如麥康凱培養(yǎng)基。 5） 厭氧培養(yǎng)基 （三）細(xì)菌的培養(yǎng)特性 1、液體培養(yǎng)基 生長表現(xiàn)為 渾濁、菌膜、沉淀 2、固體培養(yǎng)基 菌落 指細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上經(jīng)一定時(shí)間生長繁殖形成肉眼所見的單個(gè)細(xì)菌集團(tuán)。八、 細(xì)菌的群體生長規(guī)律（一）代時(shí) (g) 是指完成一次細(xì)胞分裂所需要的間隔時(shí)間。代時(shí)又稱世代時(shí)間或增代時(shí)間。不同的細(xì)菌有不同的代時(shí)，多數(shù)為20分鐘左右，如大腸桿菌代時(shí)為17

44、分鐘，有的細(xì)菌生長緩慢，代時(shí)長達(dá)33小時(shí)。 二）細(xì)菌群體生長曲線 細(xì)菌在一個(gè)有限體系中的生長稱為群體生長。 任何細(xì)菌的群體生長均服從同一規(guī)律。 以培養(yǎng)時(shí)間為橫坐標(biāo)，細(xì)菌數(shù)的對數(shù)為縱坐標(biāo)作圖可以得到生長曲線。 各種細(xì)菌的生長曲線不同，但大致都分為遲緩期、對數(shù)生長期、穩(wěn)定期和衰亡期4個(gè)階段。九、微生物生長量的測定方法1、直接法 （1） 測體積 取一定量培養(yǎng)液離心，量體積。 （2）稱干重 取一定量培養(yǎng)液離心，100-105 或40 ，80 低溫真空干燥，稱重。乳酸桿菌2 × 108/ml, 100ml為10-70mg 干重細(xì)胞。2、間接法1）生理指標(biāo)法 測細(xì)胞總氮含量粗蛋白總量氮含量%&#

45、215;6.25細(xì)菌12.5%，霉菌6.0%，酵母菌7.5%。碳含量其他2）比濁法 比濁管 Baso4 測定光密度值( OD) 采用波長范圍450-650 nm。3、計(jì)數(shù)法 平板菌落計(jì)數(shù)法 10倍梯度稀釋，至某一稀釋度，如各取0.2ml，加入平板培養(yǎng)基，計(jì)算菌落。 細(xì)菌總數(shù)(cfu/ml)稀釋度×5 ×某稀釋度平板菌落數(shù) 細(xì)菌的生長曲線？不同時(shí)期各有何特點(diǎn)？1、遲緩期(lag phage) 少量細(xì)菌接種新鮮培養(yǎng)基后，一般不立即進(jìn)行繁殖，生長速度幾近于零。細(xì)菌數(shù)幾乎不增加，這段時(shí)期稱為延遲期或遲緩期。 特點(diǎn) 細(xì)胞體積增；新陳代謝活躍， RNA含量增高；對不良條件較敏感；細(xì)胞分

46、裂延遲。2、對數(shù)生長期(1og phase) 細(xì)菌以最大的分裂率 或倍增率生長，細(xì)胞數(shù)以幾何級數(shù)增加。細(xì)胞數(shù)對數(shù)的增加與時(shí)間呈直線關(guān)系。 該期的病原菌致病力最強(qiáng)，其形態(tài)、染色特性及生理活性均較典型，對抗菌藥物等的作用較為敏感。3、穩(wěn)定期(stationary phage)穩(wěn)定期又稱平衡期。細(xì)胞生長速度下降，逐漸趨向零，活細(xì)胞數(shù)與死細(xì)胞數(shù)幾乎相等，此時(shí)就開始了穩(wěn)定期。平衡期細(xì)胞內(nèi)的貯藏物(如肝糖、脂肪粒、淀粉等)和代謝產(chǎn)物的積累達(dá)到高峰，因此生產(chǎn)中應(yīng)考慮發(fā)酵液在此期放罐。對芽胞菌而言，此期形成大量的芽胞，適用于該菌的菌種保藏，或芽胞的收集。工業(yè)生產(chǎn)上常通過補(bǔ)料、調(diào)節(jié)pH等方法延長穩(wěn)定期，以便積累

47、更多的抗生素，提高產(chǎn)量。4、衰亡期(decline phase)經(jīng)過穩(wěn)定期的一段時(shí)間，微生物繼續(xù)培養(yǎng)，細(xì)胞數(shù)按幾何級數(shù)急劇減少，呈現(xiàn)對數(shù)死亡現(xiàn)象，此期稱為衰亡期。 衰亡期的細(xì)胞形態(tài)無典型，呈現(xiàn)多形性，甚至畸形，大小不一，革蘭氏染色性改變，有的細(xì)胞自溶，釋放出氨基酸，抗生素或酶類等。第四節(jié) 病原微生物實(shí)驗(yàn)室安全21世紀(jì)在我國接連出現(xiàn)幾次人及動(dòng)物重大疫病、環(huán)境污染以及生物恐怖的擔(dān)心，生物安全越來越重視。生物安全的概念和一般要求防止病原微生物及其他有害生物或物質(zhì)傳入實(shí)驗(yàn)室“biosecurity”防止病原微生物及其他有害生物或物質(zhì)傳出實(shí)驗(yàn)室“biosafety”實(shí)驗(yàn)室人員自身安全“biosecuri

48、ty” ，“biosafety”病原微生物實(shí)驗(yàn)室的生物安全分類 生物安全分類（BSL）分為14級BSL-1 從事對健康成人造成危害，但對實(shí)驗(yàn)室作人員和環(huán)境可能有微弱危害的。BSL-2 實(shí)驗(yàn)室工作人員和環(huán)境可能有中度危害的。BSL-3 從事危險(xiǎn)病原微生物工作。禽流感病毒、口蹄疫病毒BSL-4 有造成氣溶膠感染和危及生命的病原微生物。埃博拉病毒、尼帕病毒。動(dòng)物病原微生物的分類 2005年我國農(nóng)業(yè)部頒布動(dòng)物病原菌分類名錄，將動(dòng)物病原微生物也分為四類。 一類 動(dòng)物病原微生物 口蹄疫病毒、高致病 性禽流感病毒、豬水泡病病毒等。 二類 動(dòng)物病原微生物 豬瘟病毒、雞新城疫病毒、狂犬病病毒、藍(lán)舌病病毒、兔出血

49、癥病毒、炭疽桿菌、布氏桿菌。三類 動(dòng)物病原微生物 偽狂犬病病毒、鴨瘟、鵝瘟病毒 、破傷風(fēng)梭菌、結(jié)核桿菌。四類 動(dòng)物病原微生物 危險(xiǎn)性小，低致病力、制備疫苗的弱毒菌（毒）種。 思考題1. 滅菌、消毒、防腐、無菌的概念。 2. 物理消毒滅菌方法主要有哪些？如何合理選 用這些消毒方法？3. 生物安全概念，bsl分為幾類？第五章 消毒與滅菌 微生物的生長繁殖影響外界環(huán)境，對人類及動(dòng)物而言，微生物有其有益的方面也同時(shí)存在危害人類的方面，特別是病原微生物。因此人類必須對環(huán)境中的有害微生物施加影響，控制其生長繁殖。一般來說，通過消毒、滅菌等手段可能達(dá)到消滅有害微生物的目的。微生物控制的重要性體現(xiàn)在下列3個(gè)方

50、面：(一)防止疾病的發(fā)生和傳播有助于阻止微生物進(jìn)入動(dòng)物，或阻斷可能導(dǎo)致疾病發(fā)生的環(huán)節(jié)，也有一些方法如化療藥物可直接殺死或抑制機(jī)體內(nèi)的微生物，用以治療疾病。(二)防止微生物污染 人及動(dòng)物生活的環(huán)境存在微生物，控制微生物能夠保證公共衛(wèi)生和人及動(dòng)物健康。例如飲水污染。(三)防止微生物引起的原材料變質(zhì)和腐敗 微生物可以使藥物變質(zhì)腐敗，輕者使藥物失效，重者危及人類及動(dòng)物健康，因此必須采取有效的控制方法?；靖拍?滅菌(sterilization) 用理化方法殺滅所有微生物的方式，包括芽胞與繁殖體，病原菌與非病原菌。物品滅菌或除菌后達(dá)到無菌狀態(tài)。 消毒(disinfection) 用理化方法殺滅病原菌和微

51、生物的繁殖體的過程，以達(dá)到防傳染病傳播的目的。 無菌(asepsis ) 是指沒有活的微生物。 無菌法(asepticism) 采取防止或杜絕任何微生物進(jìn)入動(dòng)物機(jī)體或其他物體的方法。 防腐 指采用物理或理化方法破壞抑制微生物生長繁殖的方法。 消毒劑(disinfectant) 指一種能殺滅病原菌和微生物繁殖體的化學(xué)藥物，通常用于無生命物體的表面，但毒性大，不能直接用于機(jī)體組織。 防腐劑(antiseptic) 指一種能抑制微生物生長繁殖 的化學(xué)藥物。通常直接用于生命體，與所應(yīng)用的物質(zhì)結(jié)合在一起，如在飲料、生物制品中加入防腐劑，可防止微生物生長。 第一節(jié) 物理因素對微生物的影響 物理的消毒滅菌方法包括：溫度、輻射、干燥、聲波等。 一、溫度（一）低溫 保存微生物。細(xì)菌 4 病毒 20 以下（二）高溫 微生物必須在適宜的溫度范圍內(nèi)才能生長良 好。超過最高生長溫度時(shí)，微生物細(xì)胞內(nèi)的有機(jī)分子發(fā)生生物化學(xué)變化，導(dǎo)致細(xì)胞死亡。包括蛋白質(zhì)變性，組分的化學(xué)變化或結(jié)構(gòu)分子的破壞等。 熱