生物化學和分子生物學課程試驗教學大綱

1、?生物化學?和?分子生物學?課程實驗教學大綱課程名稱：生物化學與分子生物學實驗技術英文名稱: Experiment Technology of Biochemistry andMolecularBiology課程編號：實驗課性質：必修課程負責人：崔行開放實驗工程數(shù)：3一、學時、學分課程總學時：70課程總學分：2.0二、適用專業(yè)及年級本大綱適用于醫(yī)療、公共衛(wèi)生、口腔、護理 、預防醫(yī)學七年制學生。三、實驗教學目的與根本要求掌握人體生命的物質根底，生物大分子的結構和功能。掌握各種生物物質能 量的正常代謝過程，代謝調節(jié)，代謝障礙和臨床疾病的關系。通過實驗掌握根本 的生物化學實驗技術及驗證局部課堂理論知

2、識。在實驗教學中，要求學生掌握電泳技術、層析技術、分光光度法、離心技術、 蛋白質及分子生物學等技術。掌握蛋白質、核酸、酶類的提取、測定，學習血液 成分生化測定，以及局部生物化學理論知識的驗證。掌握紫外一可見分光光度計、 高速離心機、PCR儀、層析系統(tǒng)、電泳儀系統(tǒng)、電熱恒溫水浴箱、凝膠掃描儀、 電動勻漿器等儀器的使用，了解其性能、適用范圍及考前須知。四、主要儀器設備紫外一可見分光光度計、高速離心機、PCR儀、層析系統(tǒng)、電熱恒溫水浴箱、 凝膠掃描儀、電泳儀、電動勻漿器等。五、實驗課程內容和學時分配序 號實驗工程 名稱實驗內容學時分配實驗 屬性實驗類型每組人數(shù)實驗 要求指導教師已開 侏 開11 可見

3、分光 光度技術2 蛋白質含 量測定1 掌握朗伯-比爾 定律。2.掌握比 色疋量分析標準 曲線的制備。3熟 悉可見分光光度 計的使用。5設計根底2必做已開2紫外分光光 度法測定蛋 白質含量掌握紫外分光光度計的使用方法2綜合根底2必做已開3層析技術， 蛋白質的分 離純化與鑒疋1.熟悉層析技術 的原理、分類及應 用范圍。2.掌握凝 膠層析的根本原 理、特點和應用。用 SephadexG25 脫鹽法和用離子 交換劑進行蛋白 質的純化。3.學習 鹽析的方法，用醋 酸纖維素薄膜電 泳法進行蛋白質 的鑒定。7設計根底2必做已開4離心技術， 核酸的別離 純化及含量 測定1 .熟悉離心技術 的根本原理。掌握 離

4、心力及其作用。 掌握常用離心機 使用方法和注意 事項。2.學習核酸 的別離及生物學 特性，了解RNA DNA勺提取和含量 測定方法。7綜合根底2必做已開5酶的提取及 比活性測定1 掌握酶提取純 化的方法和技術 以及應注意的問 題。2.了解測定堿 性磷酸酶活性的 原理和方法。3.掌 握紫外分光光度 計的使用方法。4. 了解蛋白質測定 在醫(yī)學中的應用。7綜合根底2必做已開6底物濃度對 酶促反響速 度的影響本實驗以堿性磷 酸酶為例，測定不 同濃度底物時的 酶活性，再根據(jù)Li neweaver-Burk 法作圖，計算其Km直。2驗證根底2必做已開7pH對酶促 反響速度的 影響本實驗以磷酸苯 二鈉為底物

5、，在不 同pH值的甘氨酸 緩沖液條件下，測 定堿性磷酸酶的 活性，從而確定其 最適pH值。2驗證根底2必做已開8溫度對酶促 反響速度的 影響本實驗以堿性磷 酸酶為例，在不同 溫度卜保溫 疋 時間，觀察酶活性 的差異。2驗證根底2必做已開9聚丙烯酰胺 凝膠電泳分 離血LDH 同工酶掌握電泳別離同 工酶的方法并了 解其原理，了解顯 色原理，了解血清 乳酸脫氫酶同工 酶電泳別離的臨 床意義。5綜合根底2必做已開10胰島素對血 糖含量的影 響及測定1 .熟悉激素對血 糖含量的影響因 素。2學習鄰甲苯 法測定血糖的原 理，了解測定血糖 的方法。1.5綜合根底2必做已開11糖酵解中間 產物的鑒定1 .復習

6、糖酵解的 主要中間步驟及 其產物，2. 了解一 碘醋酸對 3-磷酸 甘油醛脫氫酶的 抑制作用。1.5驗證根底2必做已開12氨基轉換作用GPT測疋掌握血清谷丙轉 氨酶活性測定的 方法及臨床意義1驗證根底2必做已開13血清尿素氮 測定學習尿素測疋的 方法。1驗證根底2必做已開14血清脂類薄 層層析1 .學習脂類薄層 層析法的具體操 作。2 了解薄層 層析在脂類成份 分析及脂代謝研 究中的用途。1綜合根底2必做已開15電泳技術， 血漿脂蛋白 瓊脂糖凝膠 電泳1.熟悉電泳技術 的根本原理。2掌 握影響電泳的因 素介質、緩沖溶 液、電場強度、電 滲等。3掌握電泳 技術的應用，了解 電泳的分類。4. 掌握

7、正常人血漿 脂蛋白的分類。1.5綜合根底2必做已開161.分子生物 學技術。2. 感受態(tài)的轉 化和鑒定1.掌握DNA提 取、轉染、PCR、 核酸雜交、DNA重組等生物學技 術和方法。2.掌握 感受態(tài)的轉化和 鑒定。7綜合根底2必做開部分17質粒的提取 及鑒定掌握質粒的提取 及電泳鑒定的方 法7綜合根底2必做開部分18酶切及酶切鑒定掌握限制性內切 酶的特點及應用。7綜合根底2必做開19DNA 的回 收及重組鑒疋學習DNA的回收 方法及重組子的 連接技術.7綜合根底2必做開部分20SDS-PAGE 測定蛋白質 分子量在聚丙烯酰胺凝 膠中參加陰離子 去污劑SDS測定 蛋白質的相對分 子量。7綜合根底2必做已開21等電聚焦測 測定蛋白質 等電點根據(jù)蛋白質在不 同pH環(huán)境中所帶 凈電荷等于零時， 將蛋白質別離。7綜合根底2必做未開22脂蛋白的分 離和提純用不同沉淀劑或 不同濃度的沉淀 劑將脂蛋白分開， 分別測定各類脂 蛋白。5綜合根底2選做未開23PCR擴增技 術對提取的基因組 DNA進行隨機引 物PCR擴增，再 觀察擴增的結果。6研究根底2選做未開24Western 印跡應用Western印跡 技術，分析經(jīng) SDS-PAGE 電泳 別離并轉移到硝 酸纖維素薄膜上 的特