綠豆芽淀粉酶的活性及應用

1、綠豆芽淀粉酶的活性及應用綠豆芽淀粉酶的活性及應用生物工程生物工程1302-171302-17號號盧丹盧丹摘要摘要目的：測定綠豆芽生長不同時期酶的活性。方法：采用正交試驗設計方法, 對影響綠豆芽淀粉酶活性測試的“最適條件”進行研究。結果：綠豆芽在生發(fā) 84h 左右, 溫度 60, p H5. 0, 底物體積質量 20g /L , 酶體積質量0. 5g /L , 底物與酶作用時間 60m i n 時, 淀粉酶活性最高。結論：通過對綠豆芽生長的不同時期酶活性的研究, 為進一步實現(xiàn)綠豆芽淀粉酶應用提供理論依據。關鍵詞：綠豆芽; 淀粉酶; 酶活性1 1、材料與方法材料與方法1. 1 實驗材料綠豆、 甜玉

2、米為市購。1. 2 主要試劑C u S O 4 5H 2 O 、 酒石酸鉀鈉 、 氫氧化鈉、亞鐵氰化鉀、可溶性淀粉均為分析純試劑; 次甲基藍、麥芽糖為生化試劑。1. 3 實驗方法1. 3. 1 綠豆芽的制備方法選擇發(fā)芽率高、發(fā)芽好的綠豆, 最好選擇新綠豆. 洗凈,挑去混在豆子里的雜質、蟲蛀豆、 半粒豆等,以免影響豆芽質量 . 將選好的綠豆加清水浸泡4 h 后,放入器皿中. 并上下翻動,使之均勻. 種殼破裂后 ,將余水淋盡, 后裝器皿發(fā)芽 ,保持室溫 25 30 . 當芽長 1 c m時, 溫度要保持在 28 40 之間,相對濕度 90% 為宜. 3 4 h 淋 1次水, 水溫要低于氣溫. 氣溫

3、較低時 ,要淋溫水, 每隔 5 6 h 淋水1次。2 2、結果與討論、結果與討論 2. 1 結果 2. 1. 1綠豆芽萌發(fā)不同時期酶活性的情況 在試驗中采用對比的方法 ,對萌發(fā)不同時期的豆芽進行測定, 比較不同時期酶提取液在 40 時水解 1%淀粉溶液 1 h 后產生的還原糖量 , 從而計算出淀粉酶的活性 . 通過對比實驗, 得出綠豆芽在生發(fā) 84 h 時淀粉酶活性最強 ,其活力值為 43U/g .見表 1 2. 1. 2 不同因素對綠豆芽酶活性的影響 正交試驗設計可通過較少的試驗次數(shù) ,較快地找到達到最佳試驗結果的試驗組合, 采用 L8 ( 27）正交表 ,安排酶濃度 ( E ) 、底物濃度

4、 ( S ) 、p H 、溫度( T ) 和酶反應時間 ( t ) 5個實驗因素,每個因素 2個水平 ,共進行 8次試驗組合 . 為確定影響酶活性的最適條件, 第 1次試驗取 T= 30, 60 ; p H= 3. 0,7. 0; t = 60, 90m i n ; S = 30, 5 g /L , E= 0. 5, 5 g /L ,完成各組酶活性測試. 結果見表 2. 由表 2可知 ,第 6組酶活性最高 ,即 T = 60 ,p H= 3. 0, S =30 g /L , E= 0. 5 g /L , t = 60 m i n , 并發(fā)現(xiàn)各組之間酶活性差異很大.為縮小指標水平間差異 ,在第

5、6組試驗條件附近安排第二次試驗 ,仍采用 L8 ( 27) 正交表進行篩選,確定試驗條件: T=50, 60 ; p H=4. 0, 5. 0;t = 60, 70 m i n ; S= 10, 20 g /L , E=2. 5, 0. 5 g /L , 完成各組酶活性測試. 結果見表 3. 由表 3可知,第 3, 6組酶活性較高,其余組較低. 在第 3, 6組試驗條件附近再安排第三次正交試驗設計, 注意縮小實驗因素水平間差距 ,將 E 固定為 1 g /L ,采用 L 9 ( 34) 正交表, 即取 T= 50, 55, 60; p H=4. 0, 5. 0, 6. 0; t =60, 70

6、, 80 m i n ; S= 10,15, 20g /L , E= 2. 5, 0. 5g /L ,測得酶活性 ,并進行數(shù)據處理,完成各組酶活性測試 . 結果見表 4 由表 4可知, 酶活性最高的試驗組合是第 7 組,即 T=60 ; p H=5. 0; t =60 m i n ; S=20 g /L ,E= 0. 5 g /L .2. 22. 2 討討 論論2. 2. 1 發(fā)芽時間對綠豆芽中淀粉酶活性的影響本試驗從綠豆開始萌發(fā)出芽時測定還原糖含量的變化,從而推算淀粉酶活性的變化，在綠豆芽生長周期中，淀粉酶的活性先是由低變高 ,再由高變低. 經過實驗得到: 綠豆芽在生發(fā)84h時淀粉酶活性最高

7、.2. 2. 2 達到最高酶活性的最適條件利用正交試驗設計,可以通過較少的試驗次數(shù)較快地找到綠豆芽淀粉酶活性測試的最適條件 ,由表 6可知 , 當 T=60 , p H=5. 0, S=10 g /L ,E= 0. 5 g /L , t = 60m i n 時酶活性最高, 可以認為這是測試綠豆芽淀粉酶活性的最適條件 ,在綠豆芽淀粉酶活性測試中 , 應圍繞此條件安排試驗 , 以期得到較好的試驗效果3 3 結結 論論1) 淀粉酶活性 . 通過在綠豆芽萌發(fā)周期的不同階段對豆芽中淀粉酶活性的測定, 得出豆芽在生發(fā) 84 h 時 ,淀粉酶活性最強 , 活力值為 43 U/g . 由對比試驗得出, 綠豆芽在生發(fā) 84 h 時淀粉酶活性最強.2) 淀粉酶活性的最適條件 . 由正交試驗得出,淀粉酶在溫度為 60, p H為 5. 0,底物濃度為 20 g /L ,酶濃度為 0. 5g /L ,酶與底物作用時間為 60 m i n 時 ,酶活性最大.3) 綠豆芽汁淀粉酶在處理玉米原料中的應用 . 利用