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1、222 動物細(xì)胞融合與單克隆抗體導(dǎo)學(xué)案編寫人:謝建 審核人: 審批人:【學(xué)習(xí)目標(biāo)】(1) 掌握動物細(xì)胞融合與植物體細(xì)胞雜交的區(qū)別與聯(lián)系。(2) 簡述動物細(xì)胞融合與單克隆抗體制備的過程。(3) 了解單克隆抗體在醫(yī)學(xué)實(shí)踐中的應(yīng)用,并說出應(yīng)用的實(shí)例?!局攸c(diǎn)難點(diǎn)】1. 教學(xué)重點(diǎn)(1) 動物細(xì)胞融合的原理和過程。(2)單克隆抗體制備的原理和過程。2. 教學(xué)難點(diǎn)單克隆抗體制備的原理和過程?!咀灾鲗W(xué)習(xí)】、動物細(xì)胞融合1、概念:_或_動物細(xì)胞結(jié)合形一個細(xì)胞的過程,也稱細(xì)胞雜交。2、結(jié)果:形成_。3、過程:兩個或多個細(xì)胞_。4、意義:克服了_的不親和性,成為研究_、_、腫瘤和 _培育的重要手段。、單克隆抗體1、
2、抗體產(chǎn)生細(xì)胞:_。 成分:_。特點(diǎn):從_中分離出的抗體產(chǎn)量低、純度低、特異性差。2、單克隆抗體的制備(1)過程給小鼠注射特定的抗原蛋白培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞從_中分離B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞未融合細(xì)胞_小鼠體內(nèi)培養(yǎng)體外培養(yǎng)_抗體雜交瘤細(xì)胞的特點(diǎn):_、_。單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn):_、_、_。、單克隆抗體的應(yīng)用1、作為診斷試劑,具有_、_、_、_的優(yōu)點(diǎn)。2、用于治療疾病和運(yùn)載藥物:主要用于治療_、可制成_?!菊n內(nèi)探究】探究一:動物細(xì)胞的融合1、植物體細(xì)胞雜交和動物細(xì)胞融合的區(qū)別植物體細(xì)胞雜交動物細(xì)胞融合細(xì)胞融合原理細(xì)胞膜的流動性融合過程先使細(xì)胞分散開誘導(dǎo)方法電激、振動、離心、聚乙二醇結(jié)果應(yīng)用培育植物新品種意義相同點(diǎn)
3、原生質(zhì)體融合原理相同;原生質(zhì)體融合的方法相似2植物體細(xì)胞雜交和動物細(xì)胞融合的主要區(qū)別是什么?3、為什么可以使用滅活的病毒促進(jìn)動物細(xì)胞融合?4、不滅活的病毒能作為誘導(dǎo)劑嗎? 知識閱讀:閱讀課本P52中的小字,了解一下動物細(xì)胞融合技術(shù)的發(fā)展簡史。(二)單克隆抗體探究二:單克隆抗體制備的原理1、傳統(tǒng)的抗體生產(chǎn)方法及缺陷是什么?抗體是從何來的?2、B淋巴細(xì)胞有什么特點(diǎn)?3、若要想獲得大量的單一抗體,如何做呢?4、在體外培養(yǎng)的條件下,一個B淋巴細(xì)胞是不可能無限增殖的,那么,怎樣解決這一問題的呢?5、小結(jié)以下內(nèi)容: 利用_產(chǎn)生特異性抗體的功能。 利用_無限增殖的特性。 利用_技術(shù)將兩
4、種細(xì)胞融合獲得雜交瘤細(xì)胞。 利用_技術(shù)大量培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞。探究三:單克隆抗體制備的過程1、如何獲得B淋巴細(xì)胞?2、如果把B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞放在一起時,會有幾種融合方式(類型)?3、 選擇雜交瘤細(xì)胞的兩步篩選的目的各是什么?4、如何進(jìn)行雜交瘤細(xì)胞的抗體檢測及克隆化培養(yǎng)? 融合后的細(xì)胞經(jīng)選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng)后,能存活的細(xì)胞就是雜交瘤細(xì)胞,但這些雜交瘤細(xì)胞并非都是能分泌所需抗體的細(xì)胞,通常用“有限稀釋法”來選擇。將雜交瘤細(xì)胞稀釋,用多孔細(xì)胞培養(yǎng)板培養(yǎng),使每孔不超過一個細(xì)胞,通過培養(yǎng)讓其增殖。然后檢測各孔上清液中細(xì)胞分泌的抗體,那么上清液可與特定抗原結(jié)合的培養(yǎng)孔為陽性孔。陽性孔中的細(xì)胞還不能保證是來自
5、單個細(xì)胞,挑選陽性孔的細(xì)胞繼續(xù)進(jìn)行有限稀釋,一般需進(jìn)行34次,直至確信每個孔中增殖的細(xì)胞為單克隆細(xì)胞。該過程即為雜交瘤細(xì)胞的克隆化培養(yǎng)。探究四:單克隆抗體的應(yīng)用1、單克隆抗體的應(yīng)用有哪些?2、生物導(dǎo)彈的組成及優(yōu)點(diǎn) 【當(dāng)堂檢測】1、基因型為Aa與基因型為Bb的動物體細(xì)胞混合,用滅活的仙臺病毒處理后,不可能獲得下列哪種基因型的細(xì)胞 ( )AAAaa BAaBb CAabb DBBbb2、動物細(xì)胞融合和植物體細(xì)胞雜交的比較中,正確的是 ( )誘導(dǎo)融合的方法完全相同 所用的技術(shù)手段不相同 所采用的原理完全相同 都能形成雜種細(xì)胞A.B. C.D.3、關(guān)于單克隆抗體,下列敘述不正確的是( )A、可以制成診
6、斷盒用于疾病的珍斷 B、可以與藥物結(jié)合,用于病變細(xì)胞的定向治療 C、可以利用基因工程技術(shù)生產(chǎn) D、可以在生物體內(nèi)生產(chǎn),不能體外生產(chǎn)4、“生物導(dǎo)彈”是指( )A、單克隆抗體 B、帶有特定藥物的單克隆抗體C、雜交細(xì)胞 D、B淋巴細(xì)胞【課后練習(xí)與提高】1、動物細(xì)胞融合和植物原生質(zhì)體融合比較,在動物細(xì)胞融合中有特殊性的是( )A、融合的原理 B、融合的優(yōu)點(diǎn) C、融合的誘導(dǎo)手段 D、融合的過程2、下圖是單克隆抗體制備過程示意圖,其中1過程注射的物質(zhì)和A細(xì)胞的名稱為( )A、抗體、T淋巴細(xì)胞 B、抗原、T淋巴細(xì)胞C、抗體、B淋巴細(xì)胞 D、抗原、效應(yīng)B淋巴細(xì)胞3、單克隆抗體和血清抗體相比,其優(yōu)越性在 于(
7、)A、單克隆抗體能夠制成“生物導(dǎo)彈” B、單克隆抗體能夠在體外制備C、單克隆抗體比血清抗體的特異性強(qiáng)、免疫活性高D、單克隆抗體制備過程簡單4、單克隆抗體技術(shù)在疾病診斷和治療以及生命科學(xué)研究中具有廣泛的應(yīng)用。下列關(guān)于單克隆抗體的敘述,錯誤的是( ) A特異性強(qiáng)、靈敏度高 B與抗癌藥物結(jié)合可制成“生物導(dǎo)彈” C體外培養(yǎng)B淋巴細(xì)胞可大量分泌單克隆抗體 D由效應(yīng)B細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合而成的雜交瘤細(xì)胞分泌5、試管嬰兒、試管苗、克隆羊三者均屬于生物工程技術(shù)的杰出成果,下面對其生物學(xué)原理及技術(shù)的敘述正確的是 ( ) A都屬于無性生殖,能保持母本性狀 B都是細(xì)胞工程的技術(shù)范圍C都充分體現(xiàn)了體細(xì)胞的全能性 D都不會發(fā)生基因重組和變異6、右圖為細(xì)胞融合的簡略過程,請據(jù)圖回答:(1)若A、B是植物細(xì)胞,在細(xì)胞融合之前已用_ _處理,除去了_;由A、B到細(xì)胞C的過程中,常用的物理方法是_。融合完成的標(biāo)志是_。(2)若A、B是植物細(xì)胞,則形成的D細(xì)胞還要應(yīng)用_技術(shù)把D培養(yǎng)成植株。(3)若A、B是動物細(xì)胞,一般取自_,然后用_使其分散開來;由A、B到C的過程中,常用的不同于植物細(xì)胞融合的手段是_,所形成的D稱為_ ,A、B融合為C的過程說明了細(xì)胞膜具有_。(4)若該過程是制備單克隆抗體,A為小鼠效應(yīng)B細(xì)胞,那么,在獲得此細(xì)胞之前,小
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