正交設計法優(yōu)選戒毒膠囊的提取工藝

1、正交設計法優(yōu)選戒毒膠囊的提取工藝                           作者：靳怡然，杜英峰，袁志芳，張?zhí)m桐【摘要】  目的優(yōu)選戒毒膠囊中揮發(fā)油、醇及水提取工藝。方法采用正交設計法，以揮發(fā)油得率為指標，篩選制劑中揮發(fā)油的提取工藝；以黃芩苷的含量為考察指標篩選醇提取工藝；以芍藥苷的含量為考察指標優(yōu)選金銀花、白芍、黃芪

2、等藥味的水提工藝。結果揮發(fā)油的最佳提取工藝為當歸、川芎加水10倍量，浸泡1 h，提取8 h；醇提最佳工藝為丹參、黃芩、梔子采用70%乙醇，溶媒6倍量，回流時間為1.5h，提取次數(shù)為2次；水提取的最佳工藝為將白芍、黃芪、龜甲和熟地、黃連同上述藥渣，加10倍量水，煎煮2次，1.5 h/次，金銀花于第2次煎煮時加入。結論通過正交實驗優(yōu)選出戒毒膠囊最佳制備工藝穩(wěn)定可行。 【關鍵詞】  正交設計； 戒毒膠囊； 提取工藝Abstract：ObjectiveTo optimize the extraction process of Jiedu Capsules.MethodsThe series

3、of tests were carried out with orthogonal design. The conditions were evaluated with the yield of volatile oil as the index. With the yield rate of baicalin as the index, and the concentration of alcohol, solvent volume, extracting time and times as factors, the optimal extracting process for the ex

4、tracting with alcohol was studied. With the yield rate of paeoniflorin as the index, and the volume of water, extracting time and times were optimized for the water extraction. ResultsThe optimal extracting process of volatile oil was as follows: 10 volumes of water were added and immersed for 1h, a

5、nd then extracted for 8h. The results of alcohol extraction was defined as 85% of alcohol, 1.5 hours of refluxing time with 10 times volume of solvent and twice extraction. The best extracting process by water was defined as 1.5 hours of each extraction with 10 times volume of water and twice extrac

6、tion. Flos Lonicerae was extracted at the second extraction.ConclusionThe optimum preparation technology of Jiedu Capsule is suitable and reproducible.Key words：Chinese traditional medicine;  Orthogonal design;   Extracting process    戒毒膠囊的處方為吸食阿片類成癮者的臨床經(jīng)驗方，由金銀花、黃芩、梔子、丹

7、參、黃芪等13味藥制成。本實驗根據(jù)戒毒膠囊處方組成和各藥味之間的關系，在各藥物所含成分的理化性質和藥理作用的研究基礎上1，2，根據(jù)與治療作用相關的有效成分或有效部位的理化性質，結合制劑制備上的要求等實際情況，采用正交設計法對工藝路線的設計，篩選了工藝方法和條件，制定出方法簡便、條件確定的穩(wěn)定工藝。1  儀器與試藥1.1  儀器揮發(fā)油提取器（上海求精玻璃儀器廠）；美國Waters高效液相色譜儀，510泵，2487紫外檢測器；色譜工作站（Empower色譜工作站）；TCQ-250超聲波清洗器（北京醫(yī)療設備二廠）。1.2  試藥黃芩苷、綠原酸、芍藥苷對照品均購自藥品生物

8、制品檢定所；藥材均購自石家莊市藥材站，經(jīng)河北醫(yī)科大學生藥學教研室鑒定。乙腈為色譜純，水為重蒸水，其余試劑均為分析純。2  方法與結果2.1  揮發(fā)油的提取工藝3表1  揮發(fā)油得取工藝正交因素水平（略）表2  戒毒膠囊揮發(fā)油提取正交實驗結果（略）表3  揮發(fā)油提取方差結果分析（略）方差分析結果表明，以揮發(fā)油得率為考察指標，在提取揮發(fā)油的工藝中，提取時間（C）對揮發(fā)油量有極為顯著的影響（P<0.01），故提取揮發(fā)油以8 h最佳，加水量（A）和浸泡時間（B）在選擇的水平上無顯著影響（P>0.05）。最后確定的提取工藝為A3B1C3，即將藥

9、材加10倍量水浸泡1 h，提取8 h較為合適。表4  揮發(fā)油提取驗證性實驗（略）可見，按最佳工藝進行驗證實驗，揮發(fā)油得率較高，所選的工藝技術條件A3B1C3是可行的。2.2  醇提取工藝表5  醇提工藝的正交因素水平（略）表6  醇提工藝正交實驗結果（略）從正交實驗結果可見，以黃芩苷含量為考察指標，對黃芩苷提取率影響大小為醇濃度A和提取次數(shù)D對黃芩苷含量的影響較大。表7  醇提工藝的方差結果分析（略）可見，在3個因素中，醇濃度A影響極為顯著，故選擇醇濃度為70%。提取次數(shù)以提取兩次對黃芩苷的提取率較高，提取時間以1.5h時對黃芩苷的提取率最高。

10、提取倍數(shù)B對黃芩苷含量的影響不大，故加醇倍數(shù)為6倍量即可。按已經(jīng)確定的最佳工藝進行驗證實驗。結果見表8。表8  醇提工藝的驗證性實驗（略）2.3  水提取工藝因金銀花中所含有效成分綠原酸受熱不穩(wěn)定，故金銀花在所有確定進行水提的藥味中，應該后下?？疾焯崛」に嚂r應以綠原酸含量單獨考察金銀花的正交，另取當歸、川芎提取揮發(fā)油后的藥渣及丹參、梔子和黃芩醇提后的藥渣，與黃芪、白芍、龜版、熟地進行水提，以芍藥苷含量作為考察指標進行正交實驗，確定以上幾味藥的水提工藝。1         表9  金銀花

11、水提工藝正交因素水平（略）實驗方法：稱取金銀花12.5 g，按正交設計表加水煎煮。    綠原酸的測定：供試品溶液制備：取提取液1 ml，置50 ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得。對照品溶液制備：取綠原酸對照品適量，精密稱定，加稀乙醇溶解并稀釋制成每1毫升中約含0.02 mg的溶液。精密量取1 ml，置5 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。測定方法：采用十八烷基鍵合硅膠為固定相；甲醇-水-冰乙酸-三乙胺（188210.1）為流動相；柱溫35；檢測波長327 nm。吸取供試品溶液和對照品溶液各20 l，分別用HPLC色譜儀于波長327 nm處測定峰面積

12、，按外標法綠原酸含量。實驗結果見表10。表10  金銀花水提工藝的正交實驗結果（略）從正交實驗結果可見，以綠原酸為考察指標，對綠原酸含量的影響大小依次為：加水量>提取時間>提取次數(shù)，最佳工藝為A3B3C1，即加入10倍量水，煎煮2 h，提取1次。      結果分析：表10中綠原酸含量經(jīng)方差分析，對各因素影響的顯著性進行了檢驗。結果見表11。表11  金銀花水提工藝的方差結果分析（略）對正交實驗結果進行方差分析，對各因素的影響大小的顯著性進行了檢驗，在3個因素中，加水量（A）對綠原酸的提取率影響最大，以加入10倍量時得到的

13、綠原酸含量較高。提取時間（B）對綠原酸含量影響不大，為節(jié)能及提高工效，故選擇1.5 h。提取次數(shù)（C）對綠原酸含量影響也不大，選擇提取1次。    驗證性實驗：經(jīng)過優(yōu)選后確定的提取工藝為A3B2C1，即加入10倍量水，煎煮1.5 h，提取1次。對優(yōu)選工藝和最佳工藝進行驗證性實驗結果發(fā)現(xiàn)，選取工藝A3B2C1和最佳工藝A3B3C1無顯著性差別。驗證實驗結果見表12。表12  金銀花水提工藝的驗證性試驗（略）表13  水提工藝正交因素水平（略）實驗方法：取白芍7.5 g，黃芪9.0 g，龜版5 g，熟地5 g，當歸27 g，川芎15 g提取揮發(fā)油后

14、的藥渣與醇提工藝后的藥渣，分別加水煎煮提取。    芍藥苷的測定：供試品溶液的制備：精密量取上述各藥材提取液1 ml至50 ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。對照品溶液的制備：取芍藥苷對照品適量，精密稱定，加甲醇溶解并稀釋制成每毫升中約含0.1 mg的溶液，即得。測定方法：選用十八烷基鍵合硅膠為固定相；乙腈-水（1783）為流動相；柱溫30；檢測波長230 nm。吸取供試品溶液和對照品溶液各20 l，分別用HPLC色譜儀于波長230 nm處測定峰面積，按外標法計算芍藥苷含量。實驗結果見表14。方差分析見表15。表14  水提工藝的正交實驗結果（略

15、）表15  水提工藝的方差結果分析（略）從正交實驗結果可見，以芍藥苷為考察指標，對芍藥苷含量的影響大小依次為：提取次數(shù)加水量提取時間。對實驗結果進行了方差分析，對各因素的影響大小的顯著性進行了檢驗，在3個因素中，加水量（A）對芍藥苷含量影響較顯著，以加水10倍量使芍藥苷的提取率最高，提取時間（B）影響不顯著，但以提取1.5 h得到的芍藥苷含量較高。提取次數(shù)（C）對芍藥苷含量影響最大，提取2次芍藥苷的提取率最高。則最佳工藝為加水10倍量，煎煮2次，1.5 h/次。3  討論    按照國家食品藥品監(jiān)督局發(fā)布的關于中藥、天然藥物提取純化工藝研究技術

16、指導的原則，鑒于中藥、天然藥物所含成分的復雜性，中藥、天然藥物的提取、分離與純化、濃縮與干燥等工藝的研究，是在分析處方組成和復方中各藥味之間的關系，各藥味所含成分的理化性質和藥理作用的研究基礎上1，2，根據(jù)與作用相關的有效成分或有效部位的理化性質，結合制劑制備上的要求、大生產(chǎn)的實際情況、環(huán)境保護的要求，進行工藝路線的設計，工藝方法等條件的篩選，制定出方法簡便，條件確定的穩(wěn)定工藝。因此經(jīng)過篩選確定的處方是可行的。    當歸和川芎為處方中的富含揮發(fā)油的藥味，藥理研究表明，其揮發(fā)油為發(fā)揮藥效的主要成分，故在進行制劑工藝研究時，對以上兩味藥材提取揮發(fā)油。    利用正交設計將戒毒膠囊各因素、各水平之間的組合均勻搭配，合理安排，