正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)選護(hù)肝康片中水飛薊素純化工藝

1、正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)選護(hù)肝康片中水飛薊素純化工藝【摘要】 目的優(yōu)選護(hù)肝康片中水飛薊總黃酮最佳純化工藝。方法在考察純化方法的前提下,采用正交實(shí)驗(yàn)法，以提取物中總黃酮量和水飛薊賓的量為考察指標(biāo),考察影響水飛薊素純化因素。結(jié)果水飛薊總黃酮最佳純化工藝為采用8%濃縮液，3倍量體積醋酸乙酯萃取2次，10 min /次。結(jié)論優(yōu)選的水飛薊總黃酮純化工藝穩(wěn)定可行。 【關(guān)鍵詞】 正交實(shí)驗(yàn) 水飛薊素 純化工藝Abstract:ObjectiveTo optimize the purification process of total flavonoids from Silybum marianum.Methods On

2、the premise of the best purification method, orthogonal test was used for studying the effect of silymarin purification with the contents of total flavonoids and silybin as index.ResultsThe optical conditions were as follows：3 times amount of ethyl acetate, 8% concentrated solution, extracting 2 tim

3、es,10 minuters each time. ConclusionThe optimum purification technology of total flavonoids from Silybum marianum is stable and feasible.Key words:Orthogonal test; Silybum; Purification technology護(hù)肝康片由單方藥材水飛薊組成, 具有護(hù)肝保肝改善肝功能、降低血脂的功效, 可用于各型肝炎的治療。水飛薊為菊科植物水飛薊Silybum marianum (L. ) Gaertn的果實(shí)。水飛薊素( silyma

4、rin ) 是天然黃酮木脂素類化合物, 為水飛薊的果實(shí)經(jīng)提取精制而得的混合物。其主要成分為水飛薊賓、異水飛薊賓等。水飛薊素作為抗肝損傷藥物具有穩(wěn)定細(xì)胞膜、改善肝功能的作用1，2。本實(shí)驗(yàn)對水飛薊中黃酮類物質(zhì)的純化方法進(jìn)行了研究，優(yōu)化水飛薊純化工藝，為水飛薊中總黃酮提取純化提供科學(xué)依據(jù)。1 儀器與試藥1.1 儀器UV1101型紫外分光光度儀（上海天美科學(xué)儀器有限公司），安捷倫1100高效液相色譜儀，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠），超聲清洗器（天津賽恩斯科學(xué)儀器有限公司）。1. 2 藥材與試劑水飛薊賓對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號：0856-200203) ,水飛薊藥材購自武漢紅十字藥業(yè)有限

5、公司。分析純甲醇、石油醚、醋酸乙酯，色譜甲醇。2 方法與結(jié)果3,42.1 對照品溶液的制備精密稱取水飛薊賓對照品11.1 mg，置50 ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度, 搖勻，即得。2.2 水飛薊總黃酮的測定2.3 水飛薊賓的測定2.4 提取樣品的制備稱取水飛薊藥材300 g，粉碎，脫脂干燥，用10倍量90%的乙醇提取3次，1 h/次，分次過濾，合并濾液，濾液減壓濃縮至無醇味，加水定容至1 000 ml，搖勻。2.5 純化方法比較分別采用萃取法和大孔樹脂法純化得提取物。萃取法：取100 ml濃縮液，用100 ml醋酸乙酯萃取兩次，合并萃取液濃縮至干，得提取物。大孔樹脂法：取100 ml濃縮液，

6、上D101-1樹脂柱，水洗除雜，然后用70%乙醇洗脫2倍柱體積，合并洗脫液濃縮至干，得提取物。紫外測定總黃酮含量和高效液相色譜法測定水飛薊賓含量。結(jié)果見表1。由以上結(jié)果可知，采用萃取純化方法得到的提取物總黃酮量和水飛薊賓的量均比大孔樹脂純化高，因此采用萃取法對水飛薊素進(jìn)行純化。表1 純化方法比較結(jié)果（略）2.6 萃取條件優(yōu)選根據(jù)影響萃取的主要因素，選擇藥液濃度（A）、萃取體積比（B）、萃取時間（C）、萃取次數(shù)（D）作為考察因素，每個因素取3個水平（見表2）。取水飛薊濃縮液50 ml，設(shè)計L9(34)正交實(shí)驗(yàn)，以總黃酮的量和水飛薊賓的量為考察指標(biāo)，正交實(shí)驗(yàn)表設(shè)計見表3。對結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理，方差

7、處理結(jié)果見表45。表2 工藝優(yōu)化的因素水平（略）表3 L9(34)正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略）表4 總黃酮測量結(jié)果方差分析（略）由表4總黃酮測量結(jié)果和方差分析可知，各因素對純化效果的影響程度依次為D（萃取次數(shù)） B(體積比)A（溶液濃度） C（萃取時間），D（萃取次數(shù)）因素影響差異有顯著性，水總黃酮測量結(jié)果直觀分析表明優(yōu)化工藝應(yīng)為A3B2C1D2。表5 水飛薊賓測量結(jié)果方差分析（略）由表5水飛薊賓測量結(jié)果方差分析可知，各因素對純化效果的影響程度依次為D（萃取次數(shù)） B(體積比)C（萃取時間） A（溶液濃度），D（萃取次數(shù)）因素影響差異有顯著性，飛薊賓測量結(jié)果直觀分析表明優(yōu)化工藝應(yīng)為A2B2C3D2。綜合

8、總黃酮和水飛薊賓測量結(jié)果方差分析結(jié)果，萃取次數(shù)和萃取容積用量對純化效果有較大的影響，結(jié)合工業(yè)實(shí)際最終確定純化工藝為：A3B2C1D2，即采用8%濃縮液，3倍量體積的醋酸乙酯萃取2次，10 min/次。2.7 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)為了考查所選擇最佳工藝的穩(wěn)定性,故對其實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行驗(yàn)證, 并對其進(jìn)行放大實(shí)驗(yàn)，取水飛薊藥材300 g粉碎，脫脂干燥，用10倍量90%的乙醇提取3次, 1 h/次，分次過濾，合并濾液，濾液減壓濃縮至無醇味，加水定容至1 000 ml，搖勻。取濃縮液250 ml 3份，按照最佳工藝條件A3B2C1D2平行3次實(shí)驗(yàn)。結(jié)果見表6。表6 純化驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)（略）由以上結(jié)果可知水飛薊總黃酮的量和水飛

9、薊賓的量穩(wěn)定且含量均較高，優(yōu)選的工藝條件穩(wěn)定可行。3 討論實(shí)驗(yàn)曾采用固-液萃取和液-液萃取兩種方法對水飛薊提取物和提取液純化，液-液萃取法操作更為簡便而且萃取效果更好，相對固-液萃取更為減少工序節(jié)約能源，同時液-液萃取法生產(chǎn)能力大、便于連續(xù)和安全操作、易于實(shí)現(xiàn)自動控制等特點(diǎn)，使之更符合工業(yè)生產(chǎn)。采用液-液萃取純化后，萃取液濃縮至干，由于水飛薊含有大量油脂性成分，干燥的干膏中仍有部分油脂存在，因此采用石油醚對干燥提取物進(jìn)行脫脂，采用3倍量石油醚浸漬提取物靜置過夜，過濾，干燥得提取物。經(jīng)石油醚處理的提取物測量總黃酮含量更為準(zhǔn)確。根據(jù)最佳的提取工藝進(jìn)行驗(yàn)證放大實(shí)驗(yàn)，驗(yàn)證工藝的穩(wěn)定性和可行性，結(jié)果表明該工藝純化水飛薊總黃酮,含量較高，易于控制，穩(wěn)定性好，適于工業(yè)化生產(chǎn)?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】 1 閆玉峰，于 健.水飛薊的化學(xué)成分及藥理研究進(jìn)展J.中國藥事，