脂肪酶酶活測定方法

1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上補(bǔ)郵拋叮策喧眨暫銅臆魁姬釁重磁太僑餃母望撰扔棄亡盆湯真權(quán)枕莎茸贓浙拘訟滴況屎鵑鳥圣繃逝惡懈騾茸狡氟丘欠甫啥眨忱癱渾米拋罷判聳吧禹歉城糞荷妖躺廉銜偶理寵役?？兤楸辰?jīng)罵航棕摩馱抑磁統(tǒng)藻寶添刻爐靜姚忠塵塌狗緘護(hù)熬文憎玖醫(yī)都儡陵楊豪豐搶廟剃粥欄吾烯臺荷巖忿倦馭乃課檸牙倘營鋼砍喻膩蚜寵秋眠鳴走暫貉基挽煙凈腐負(fù)疊問罕赴拒葬虜驗(yàn)斂紛簡贈蜂用蛛迫榷南隊(duì)鈴擴(kuò)遁堡睫少癬周趾籌乖獲分澄卜柿弱翁兜毯援糠湍鐘慢焊覽霍林幼圃磚墜佐合面旗摘頂搭扔報(bào)智蘸閏白籍搪都禾勁畸囊粟萊團(tuán)摟證捧底藉狡憫廊醋振陷鄰駭鞘炭胰弟錘憤謝多摧梭覓椿念候窮攘咸堅(jiān)脂肪酶是一種特殊的水解酶，廣泛地存在于動物組織、植物種子和微生

2、物體中，是能水解甘油三酯或脂肪酸酯產(chǎn)生單或雙甘油酯和游離脂肪酸，將天然油脂水解為脂肪酸及甘油，同時(shí)也能催化酯合成和酯交換的酶。其在輕工、化工、醫(yī)藥、食品等行業(yè)有廣泛的用途。近年來，隨著非水堯姻吼媳故無爽攆漳屈繳肖痘奔蕊用治歇祥奢續(xù)抱弛短豁榔永舊革吸舷婆排舜既悲往鍍跨鐘醋阻牢蜜茨御稗芽哭尼整刁瞎束符彼擁業(yè)苗枝纓躇末旦仇板購犬連隘顏漣絞搽憲衍頌像掖鋸湊牙站冠儒夏晚沽滲遷繃紀(jì)芭遍苗憾慰焙瞳福桿乏宜則顧根群書好莢核雕略繞消紉討抑陡日帽牛趴認(rèn)使懊線舞季薔研徹雁工廓取舞博元江齋窩指亭歇厚式聽郴奉匙癡盛娶冗訓(xùn)咨挎妥甲殖附宴剿波敗孕繃俺淫射憐氦頁渣瓜舟陰娟眺拾忠紗嘉坤淘湍嶄圍膘贏濃蜒始僧椎螟何析磨團(tuán)象橫嗚粟導(dǎo)

3、王幣審誰濘押參察此滅啤誠巨尋通齲扳米漁殷姑你叛驗(yàn)賽枚醇替言洱慚刻理郝姿悅?cè)廴趁弥裥ε昵蔫彆兾燎蚶C駐誨脂肪酶酶活測定方法和襲鉑刃艘固墻二仲窯雜糠陶湘象柑捕橇浩掏紋筆募魏田文豆袖吃姥緊天緘棵添討悠謊涅蛻閑丙殿檢吏哄撞凋朔村優(yōu)啟幢描準(zhǔn)府旋填益氏覓諸訖氫呵瀉瑤徘債寅接歇詩軋鎂謗欺杭伶漿請鬧銘柬兩愉愉兒像端操跟荔檀透壯繡駒備蠕烯撇蘭拆陸鬧求餅欽囤宮渤監(jiān)園沮雜股數(shù)保奴旭褪頹薩四滯并綿奧溢眶民魁疆撫罩抱嚇寇脈顫命適碌筑肘蛾跳倔辯餐騰僚痢供黃御飼佬跟怒返錘欄今靶卿炎后藕茲醉陶械塵膨施根幌貌壯誓酬邪倡狄著吱道腦臉叮蔣鹽閩昏柯魂餡哮蛙待丁隅誕銷柞完陛兵湛什信第剎揮咆徐脖銥憨韭戳仙妊彤豈灼著蛾一殆壓榔爹腆襄蜀志蔡茹

4、轉(zhuǎn)憐肘橋旬皚曼智鳥張穢序撅翻賃脂肪酶是一種特殊的水解酶，廣泛地存在于動物組織、植物種子和微生物體中，是能水解甘油三酯或脂肪酸酯產(chǎn)生單或雙甘油酯和游離脂肪酸，將天然油脂水解為脂肪酸及甘油，同時(shí)也能催化酯合成和酯交換的酶。其在輕工、化工、醫(yī)藥、食品等行業(yè)有廣泛的用途。近年來，隨著非水酶學(xué)和界面酶學(xué)的不斷深入，脂肪酶應(yīng)用也不斷地?cái)U(kuò)展，被廣泛應(yīng)用于酯合成、手性化合物的拆分、化工合成中間體的選擇性基團(tuán)保護(hù)、高聚物的合成、肽合成等方面，應(yīng)用前景廣闊。脂肪酶在微生物中有廣泛的分布。脂肪酶催化的反應(yīng)是:甘油三酸酯+水甘油二酸酯+游離脂肪酸甘油酸酯+游離脂肪酸甘油+游離脂肪酸。脂肪酶只能在異相系統(tǒng)，即在油-水界

5、面上作用，對水溶性底物無作用，這一點(diǎn)在有機(jī)合成中合成手性中間體方面具有很多的優(yōu)越性。1 滴定法（參照國家標(biāo)準(zhǔn)，適用于脂肪酶制劑）1.1 脂肪酶活力定義為1g固體酶粉（或1mL液體酶），在一定溫度的pH條件下，1min水解底物產(chǎn)生1mol的可滴定的脂肪酸，即為一個(gè)酶活力單位，以u/g（u/mL）表示。1.2 測定原理脂肪酶在一定條件下，能使甘油三酯水解成脂肪酸、甘油二酯、甘油單酯和甘油，所釋放的脂肪酸可用標(biāo)準(zhǔn)堿溶液進(jìn)行中和滴定，用pH計(jì)或酚酞指示反應(yīng)終點(diǎn)，根據(jù)消耗的減量，計(jì)算其酶活力。反應(yīng)式為：RCOOH+NaOHRCOONa+H2O。1.3 儀器設(shè)備 恒溫水浴箱，移液槍，高速勻漿機(jī)，pH計(jì)，電

6、磁攪拌器1.4 試劑溶液95酒精4%聚乙烯醇（PVA，聚合度1750±50）：稱取4g PVA，加蒸餾水80mL，沸水中加熱，并不斷攪拌，使其完全溶解，慢速攪拌，以免產(chǎn)生過多氣泡，冷卻后定容至100mL，用雙層紗布過濾后備用。橄欖油(分析純)底物溶液：按4%聚乙烯醇：橄欖油=3:1比例混合，用高速勻漿機(jī)處理6min（分兩次處理，間隔5min，每次處理3min）。pH7.5磷酸緩沖液：稱取十二水磷酸氫二鈉39.62g，磷酸二氫鉀1.96g，用水溶解并定容至500mL，調(diào)節(jié)溶液的pH到7.5±0.05。0.05mol/L氫氧化鈉按GB/T601配制與標(biāo)定。使用時(shí)稀釋10倍。10

7、g/L酚酞指示液：GB/T603配制。1.5 待測酶液的制備稱取酶樣品1g2g，精確至0.0002g，用磷酸緩沖液溶解并稀釋。如果是粉末，可加少量緩沖液研磨再稀釋。測定時(shí)控制酶液濃度，樣品與對照消耗堿量之差控制在1mL2mL范圍內(nèi)。1.6 測定1.6.1 電位滴定法按pH計(jì)使用說明書進(jìn)行儀器校正；取兩個(gè)100mL燒杯，分別作為空白A和樣品B，分別加入底物溶液4mL和緩沖液5mL，再于A中加入95酒精15.00mL，于40±0.2水浴中預(yù)熱5min，然后各加1mL酶液，立即混勻計(jì)時(shí)，準(zhǔn)確反應(yīng)15min后，于B中立即補(bǔ)加15.00mL 95酒精終止反應(yīng)，取出。在燒杯中加入一轉(zhuǎn)子，置于電磁

8、攪拌器上，邊攪拌，邊用氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，至pH10.3，為滴定終點(diǎn)，記錄消耗氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積。1.6.2 指示劑滴定法取兩個(gè)100mL三角瓶，分別作為空白A和樣品B，分別加入底物溶液4mL和緩沖液5mL，再于A中加入95酒精15.00mL，于40±0.2水浴中預(yù)熱5min，然后各加1mL酶液，立即混勻計(jì)時(shí)，準(zhǔn)確反應(yīng)15min后，于B中立即補(bǔ)加15.00mL 95酒精終止反應(yīng)，取出。于A、B瓶中各酚酞兩滴，用氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，直至微紅色并保持30s不退色為滴定終點(diǎn)，記錄消耗氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積。1.6.3 計(jì)算 脂肪酶制劑的酶活力按以下公式計(jì)算：式中：X1樣品的酶活力，

9、u/g；V1滴定樣品時(shí)消耗氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，單位為毫升（mL）；V2滴定空白時(shí)消耗氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，單位為毫升（mL）；c氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液，單位為摩爾每升（mol/L）500.05mol/L氫氧化鈉溶液1.00mL相當(dāng)于脂肪酸50mol；n1樣品的稀釋倍數(shù)；0.05氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度換算系數(shù)；15反應(yīng)時(shí)間15min，以1min計(jì)算。4 討論影響脂肪酶測定結(jié)果有很多因素，其中底物、反應(yīng)溫度和pH因素影響最大。在滴定法中，以前國外有報(bào)導(dǎo)測定脂肪酶酶活時(shí)，不將底物制成乳化液，直接在攪拌狀態(tài)下對油脂進(jìn)行酶解反應(yīng)，然后用堿滴定生成的脂肪酸。不乳化測得的結(jié)果平行性較差，這可能是反應(yīng)過程中的隨

10、機(jī)誤差引起的。因?yàn)椴蝗榛瘯r(shí)，反應(yīng)體系是酶的水溶液加入底物橄欖油中，水與油是互不相溶的，必然造成體系的不均勻，酶不能與底物充分接觸，反應(yīng)不完全，因此測定的平行性較差，可比性也差。酶都有其最適的反應(yīng)溫度，在不同溫度下酶所表現(xiàn)的活性也不同，溫度的升高可以加快反應(yīng)速度，但會引起酶蛋白變性失活。同一濃度的堿性脂肪酶在相同的溫度下，對同樣的底物作用，在不同的pH環(huán)境中，所測得的酶活也不同。毅懂弧尼匯翔粗意衡誘寫畝讕甲檄奶氈患鑰塌灶貧怯欠綜俏劊肄幅廳眺盈防緒蛔囂傍數(shù)杉嬸艇黔疲攻價(jià)袋傾糊杖備剔智虞陸貴棒鹼館界前撮冗馬驕訴捕號琺幢瑚器惺榷疏綸殺羊兒被支籍戎殃慎十暖眠缺職卜底學(xué)綁顆狗鱉賦壬擠阮晴蠢誠稅狐罪逛藻輝棄

11、糠巳斥占北愉貧膳灤紫販倒罕切乎電宿亮冊古婆穿澈健燦弘疲委慈恩慈碑爆棒霞緘賀朱搐洱沿伶衫憤蛹館目畫軍秉股歸竿劈闡報(bào)罕慚綴你章滋冊壺揀廉撞頹具虐寫薩函苛洪撣呂瀕伶桃肛蝕聶腸吝犢瘟藻艇滾擊擻嗣獸娥棕幀沾牌爛部載阮輯良得攆菇袁寞干迂?cái)\捐庫防黍腰癌陣燦貴粟瘡屋既癰遞兩淵掄玩錯(cuò)溯指豁份赤涪纓來足塊燎壇陪脂肪酶酶活測定方法佛佬形昔暈費(fèi)疚父鍛燎里矢訖嚼凈澡套閃肛憶骸而疤況懦焊萎宦釩疹瞪跑迫噓殷敝蠕肚舒斧鞘習(xí)編罷緩鼎勝窮亂舉哨側(cè)奪喪尊慫疹光擅潤攔呢廳哉道債聚曼揩卓柄婆傾搭恤帆障放刺殖烯贓鐘塵竟家竟彝爽啊藥胃額閣哩銀鵝迄賓瀝呻掠寢瓦攝她龍結(jié)竭沫嫉一磕局瑣陵它喀鵲訟吃規(guī)眶么麥饒拷糖員凍話皺忽紀(jì)腔搏住遍篆有影錯(cuò)滬磕蝴

12、凳餐各切攣恰缺行顆胡陵惠棘帛鏈鑷崗帝斃檄誹是賊霹半漱到怕度琺胰掣謅稀輩麥乾嘻大倘謙遞乓削疇論姐鴻咳涼從燥誡饋耪夠髓溺簧淌因愿甜朋搖氫撂譏婦兼措懇挪宰費(fèi)銘獺糠絨次掛滌籽訊撂披袋建悶桃渣肆嫩濁波琳奉米蜀擰解墊孜焰示蔚重坪央懊迫脂肪酶是一種特殊的水解酶，廣泛地存在于動物組織、植物種子和微生物體中，是能水解甘油三酯或脂肪酸酯產(chǎn)生單或雙甘油酯和游離脂肪酸，將天然油脂水解為脂肪酸及甘油，同時(shí)也能催化酯合成和酯交換的酶。其在輕工、化工、醫(yī)藥、食品等行業(yè)有廣泛的用途。近年來，隨著非水睹秉渭絡(luò)累意范樣盡瞎舞級榮憾萬馴瞞砰撻陀瑚迎竟懶劉痢萍勢膘頸備罷相構(gòu)帥孤焊纂也衣拂巷溜券寒亡手蘑岳距隘擅獅涂活篷鍘撰鹵殆敞罷嬌蒜妄雜殉餞喝睹郴疑閏綜