蛋白質(zhì)含量檢查方法驗(yàn)證方案

1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上蛋白質(zhì)含量檢查方法驗(yàn)證方案吉林亞泰生物藥業(yè)股份有限公司2015年10月方案批準(zhǔn)題目蛋白質(zhì)含量檢查方法驗(yàn)證方案起草人 部門 職務(wù) 起草日期 審核人 部門 職務(wù) 審核日期批準(zhǔn)人 部門 職務(wù) 批準(zhǔn)日期 目錄1.目的42.范圍和責(zé)任43.人員確定44.引用標(biāo)準(zhǔn)45.材料 55.1儀器設(shè)備 55.2器材、用具 56.風(fēng)險(xiǎn)因素分析57內(nèi)容 57.1檢查法驗(yàn)證簡(jiǎn)述 57.2驗(yàn)證方法 57.3驗(yàn)證步驟 58.偏差 79.附錄 81.目的在進(jìn)行常規(guī)的蛋白質(zhì)含量檢查之前，需驗(yàn)證在實(shí)際檢驗(yàn)條件下，檢驗(yàn)用物品及操作程序不得對(duì)檢驗(yàn)方法造成不良影響。本試驗(yàn)是關(guān)于對(duì)本公司產(chǎn)品的蛋白質(zhì)含量檢查方法的

2、驗(yàn)證，結(jié)果應(yīng)顯示：本公司產(chǎn)品的蛋白質(zhì)含量的檢查方法符合驗(yàn)證要求。2.范圍和責(zé)任2.1.本驗(yàn)證方案適用于吉林亞泰生物藥業(yè)股份有限公司人用狂犬病疫苗（地鼠腎細(xì)胞）純化原液、精制卡介菌多糖核酸檢驗(yàn)方法的驗(yàn)證。2.2.驗(yàn)證委員會(huì)：負(fù)責(zé)驗(yàn)證方案的審批；驗(yàn)證的協(xié)調(diào)工作，以保證本驗(yàn)證方案規(guī)定項(xiàng)目的順利實(shí)施；驗(yàn)證數(shù)據(jù)及結(jié)果的審核；負(fù)責(zé)驗(yàn)證報(bào)告的審批。2.3.質(zhì)量控制部：負(fù)責(zé)本驗(yàn)證方案、報(bào)告的起草與實(shí)施，并做好相應(yīng)的記錄；在驗(yàn)證過程中對(duì)驗(yàn)證相關(guān)SOP進(jìn)行確認(rèn)。2.4.驗(yàn)證管理部：負(fù)責(zé)驗(yàn)證過程中的組織協(xié)調(diào)，負(fù)責(zé)審核驗(yàn)證方案和驗(yàn)證報(bào)告，并對(duì)驗(yàn)證全過程進(jìn)行跟蹤和督導(dǎo)2.5.質(zhì)量保證部QA：參與驗(yàn)證實(shí)施，協(xié)助驗(yàn)證部門對(duì)

3、過程中出現(xiàn)的偏差進(jìn)行處理。 2.6.質(zhì)量副總：批準(zhǔn)驗(yàn)證文件。3.人員確定確定參與本次驗(yàn)證的人員并要求所有參與人員簽名確認(rèn)。小組職務(wù)姓名所在部門簽字日期組長(zhǎng)孫麗萍質(zhì)量控制部組員張 晶質(zhì)量控制部組員趙 磊驗(yàn)證管理部組員范 博質(zhì)量保證部4.引用標(biāo)準(zhǔn)4.1.蛋白質(zhì)含量測(cè)定SOP4.2.偏差管理SOP4.3.中華人民共和國(guó)藥典2015版 第四部5.材料5.1儀器設(shè)備5.1.1紫外分光光度計(jì)、電子天平5.2器材用具5.2.1.比色皿、量瓶、刻度吸管、具塞試管6.風(fēng)險(xiǎn)因素分析評(píng)估項(xiàng)目潛在風(fēng)險(xiǎn)風(fēng)險(xiǎn)級(jí)別控制措施是否需要確認(rèn)專屬性不能正確檢出被測(cè)物。中進(jìn)行專屬性試驗(yàn)證明輔料等基質(zhì)成分對(duì)待檢成分檢出無影響。低重現(xiàn)性

4、不能準(zhǔn)確測(cè)定出被測(cè)物含量。中進(jìn)行重復(fù)性試驗(yàn)證明該方法的精密度可以滿足試驗(yàn)要求。低線性與范圍不能準(zhǔn)確測(cè)定出被測(cè)物含量。中進(jìn)行線性試驗(yàn)證明該物質(zhì)的濃度與含量成正比例關(guān)系。低7.內(nèi)容7.1檢查法驗(yàn)證簡(jiǎn)述蛋白質(zhì)含量測(cè)定系采用福林酚法（Lowry法），蛋白質(zhì)分子中含有的肽鍵在堿性溶液中與Cu2+螯合形成蛋白質(zhì)-銅復(fù)合物，此復(fù)合物使酚試劑的磷鉬酸還原，產(chǎn)生藍(lán)色化合物，同時(shí)在堿性條件下酚試劑易被蛋白質(zhì)中酪氨酸、色氨酸、半胱氨酸還原呈藍(lán)色反應(yīng)。在一定范圍內(nèi)其顏色深淺與蛋白質(zhì)濃度呈正比，以蛋白質(zhì)對(duì)照品溶液作標(biāo)準(zhǔn)曲線，采用比色法測(cè)定供試品中蛋白質(zhì)的含量。7.2驗(yàn)證方法嚴(yán)格按照蛋白質(zhì)含量檢驗(yàn)方法，準(zhǔn)備人用狂犬病疫苗

5、（地鼠腎細(xì)胞）純化原液樣品、精制卡介菌多糖核酸樣品各3批和試驗(yàn)材料，并依據(jù)檢驗(yàn)方法的操作步驟對(duì)樣品進(jìn)行多次檢驗(yàn)，驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果均應(yīng)表明試驗(yàn)的專屬性、重現(xiàn)性及線性與范圍均能達(dá)到試驗(yàn)要求。7.3驗(yàn)證步驟7.3.1.文件檢查7.3.1.1.目的：驗(yàn)證所需的參考文件是完整可用的。7.3.1.2.測(cè)試方法：根據(jù)資料清單，逐一檢查文件的完整性。7.3.1.3.可接受標(biāo)準(zhǔn)：所有必需的文件必須是可用的和經(jīng)過批準(zhǔn)的。7.3.1.4.記錄：見附錄1。7.3.2.培訓(xùn)7.3.2.1.目的：確認(rèn)參與驗(yàn)證的人員都經(jīng)過此方案和相關(guān)SOP的培訓(xùn)。7.3.2.2.測(cè)試方法：檢查培訓(xùn)記錄。7.3.2.3.可接受標(biāo)準(zhǔn)：驗(yàn)證執(zhí)行前，

6、參與驗(yàn)證的人員已進(jìn)行此方案和相關(guān)SOP的培訓(xùn)。7.3.2.4.記錄：見附錄2。7.3.3.測(cè)試用儀器、儀表檢查7.3.3.1.目的：對(duì)測(cè)試用儀器、儀表進(jìn)行確認(rèn)。7.3.3.2.測(cè)試方法：檢查儀表參數(shù)和設(shè)備登記卡。7.3.3.3.可接受標(biāo)準(zhǔn)：測(cè)試用儀器、儀表符合測(cè)試要求。7.3.3.4.記錄：見附錄3。7.3.4.試劑配制7.3.4.1.堿性銅試液：取氫氧化鈉10g，碳酸鈉50g，加水400ml使溶解，作為甲液；取酒石酸鉀0.5g，加水50ml使溶解，另取硫酸銅0.25g，加水30ml使溶解，將兩液混合作為乙液。臨用前，合并甲、乙液，并加水至500ml。7.3.4.2.標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備 取血清白

7、蛋白(牛)標(biāo)準(zhǔn)品1支，至50ml量瓶中，加水稀釋至刻度，用刻度吸管移取10ml至25ml量瓶中，加水稀釋至刻度， 搖勻。7.3.4.3.供試品溶液的制備 精密量取供試品溶液1ml至具塞試管中。7.3.5.線性關(guān)系考察7.3.5.1.精密量取對(duì)照品溶液0.0ml、0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml (對(duì)照品溶液取用量可在本法測(cè)定范圍內(nèi)進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整），分別置具塞試管中，各加水至1.0ml，再分別加入堿性銅試液1.0ml，搖勻，室溫放置10分鐘，各加入福林酚試液取福林試液中的貯備液（2mol/L酸濃度）1164.0ml，立即混勻，室溫放置30分鐘，照紫外-可見分光光度法，在6

8、50nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。7.3.5.2.可接受標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)濃度和其吸光度在在規(guī)定范圍內(nèi)呈線性，相關(guān)系數(shù)（R2）0.995。7.3.5.3.記錄：見附錄4.7.3.6.專屬性7.3.6.1.精密量取空白輔料溶液、供試品溶液與標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液各1ml置玻璃試管中，再分別加入堿性銅試液1.0ml，搖勻，室溫放置10分鐘，各加入福林酚試液取福林試液中的貯備液（2mol/L酸濃度）1164.0ml，立即混勻，室溫放置30分鐘，照紫外-可見分光光度法，在650nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。7.3.6.2.可接受標(biāo)準(zhǔn)空白輔料溶液對(duì)蛋白質(zhì)含量測(cè)定無干擾；供試品溶液與標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液在650nm波長(zhǎng)處有吸收峰；7.3.

9、6.3.記錄：見附錄5。7.3.7.重現(xiàn)性7.3.7.1.取供試品人用狂犬病疫苗（地鼠腎細(xì)胞）純化原液3批，取精制卡介菌多糖核酸3批，精確稱取0.1g樣品用10ml水稀釋，分別精確量取1.0ml樣品，再分別加入堿性銅試液1.0ml，搖勻，室溫放置10分鐘，各加入福林酚試液取福林試液中的貯備液（2mol/L酸濃度）1164.0ml，立即混勻，室溫放置30分鐘，照紫外-可見分光光度法，在650nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。7.3.7.2.可接受標(biāo)準(zhǔn)每批供試品的平行含量測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不得過2.0%。7.3.7.3.記錄：見附錄6。8.偏差當(dāng)該方案的某一部分無法實(shí)施或?qū)嶋H情況無法達(dá)到可接受標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，

10、需要進(jìn)行偏差報(bào)告。當(dāng)偏差出現(xiàn)時(shí)，參考偏差管理SOP處理，確保所有的偏差得到評(píng)估和有效的解決。驗(yàn)證過程中產(chǎn)生的偏差記錄在附錄7。9.附錄9.1.附錄1：文件檢查確認(rèn)記錄9.2.附錄2：培訓(xùn)記錄9.3.附錄附錄3：儀器、儀表校驗(yàn)檢查記錄9.4.附錄4：線性關(guān)系檢查記錄9.5.附錄5：專屬性檢查9.6.附錄6：人用狂犬病疫苗（地鼠腎細(xì)胞）純化原液含量測(cè)定記錄9.7.附錄7：精制卡介菌多糖核酸含量測(cè)定記錄9.8.附錄8：驗(yàn)證偏差附錄1 文件檢查確認(rèn)記錄資料名稱文件編號(hào)存放地點(diǎn)是否可接受蛋白質(zhì)含量測(cè)定SOPJYT-SOP 03-5-1-033質(zhì)量保證部是 否偏差管理SOPJYT-SOP 02-7-0-0

11、03質(zhì)量保證部是 否測(cè)試的符合性合格 不合格備注：無 （如沒有，打勾）檢查人：日期：審核人：日期：附錄2 培訓(xùn)記錄培訓(xùn)課題蛋白質(zhì)含量檢查方法驗(yàn)證方案的培訓(xùn)培訓(xùn)目的使被培訓(xùn)人員掌握蛋白質(zhì)含量檢查方法的驗(yàn)證方法和過程培訓(xùn)內(nèi)容蛋白質(zhì)含量檢查方法的驗(yàn)證方法培訓(xùn)日期： 培訓(xùn)時(shí)間： 共 小時(shí)培訓(xùn)師： 培訓(xùn)方式： 培訓(xùn)地點(diǎn)： 培訓(xùn)人員簽到： 姓名簽字姓名簽字姓名簽字趙 磊張 晶范 博測(cè)試的符合性合格 不合格備注：無 （如沒有，打勾）檢查人：日期：審核人：日期：附錄3儀器、儀表校驗(yàn)檢查記錄儀器、儀表名稱型號(hào)設(shè)備編號(hào)生產(chǎn)廠家是否接受？（Y/N）紫外分光光度計(jì)UV-2401PC03A-032日本島津是 否電子天平

12、FA22403B-164上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司是 否測(cè)試的符合性合格 不合格備注：無 （如沒有，打勾）檢查人：日期：審核人：日期：附錄4線性關(guān)系檢查記錄濃度（g/ml）4080120160200A值曲線方程相關(guān)系數(shù)r2測(cè)試的符合性合格 不合格備注：無（如沒有，打勾）檢查人：日期： 審核人：日期： 附錄5專屬性檢查記錄樣品名稱在650nm處A值空白輔料溶液人用狂犬病疫苗（地鼠腎細(xì)胞）純化原液精制卡介菌多糖核酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液測(cè)試的符合性合格 不合格備注：無（如沒有，打勾）檢查人：日期： 審核人：日期： 附錄6人用狂犬病疫苗（地鼠腎細(xì)胞）純化原液含量測(cè)定記錄檢品名稱：人用狂犬病疫苗（地鼠腎細(xì)胞）純

13、化原液檢品來源：檢品批號(hào)：檢驗(yàn)日期： 年 月 日?qǐng)?bào)告日期： 年 月 日檢驗(yàn)依據(jù)：蛋白質(zhì)含量測(cè)定SOPJYT-SOP 03-5-1-0331.儀器設(shè)備紫外-可見分光光度計(jì)：型號(hào)_ 編號(hào)_ 校驗(yàn)有效期至_2.檢驗(yàn)方法：lowry法 2.1.標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液的制備：取蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品1支，用膠頭滴管加注射用水定容至 ml容量瓶中，搖勻，即得標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液貯備液。取標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液貯備液_ml定容至_ml容量瓶中，即為_µg/ml標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液。2.2.供試品溶液的制備：取供試品，加水制成含蛋白質(zhì)約200µg/ml的溶液，搖勻，即得供試品溶液。再用刻度吸管精密量取供試品溶液1ml。2.3.

14、標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：用刻度吸管精確量取標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液（ g/ml）0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml分別置于試管中，用刻度吸管加水補(bǔ)至1ml。再用刻度吸管準(zhǔn)確量取水1ml，作空白對(duì)照。2.4.測(cè)定：取上述溶液，用刻度吸管加入堿性銅試液1.0ml，搖勻，室溫放置10分鐘，各加入福林酚試液取福林試液中的貯備液（2mol/L酸濃度）1164.0ml，立即混勻，室溫放置30分鐘，照紫外-可見分光光度法，在650nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。標(biāo)準(zhǔn)曲線：標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液(g/ml) 650nm A值直線方程：r= ；Ya+bx_結(jié)果計(jì)算：用直線回歸法計(jì)算結(jié)果。蛋白質(zhì)含量（µg/ml）

15、=樣品相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)溶液體積數(shù)×稀釋倍數(shù)測(cè)定結(jié)果：稀釋倍數(shù)_ _ 檢品批號(hào)吸收值含量（µg/ml）平均值（µg/ml）測(cè)試的符合性 合格 不合格備注：無（如沒有，打勾）檢查人：日期： 審核人：日期： 此表可根據(jù)需要復(fù)制附錄7精制卡介菌多糖核酸含量測(cè)定記錄檢品名稱：精制卡介菌多糖核酸檢品來源：檢品批號(hào)：檢驗(yàn)日期： 年 月 日?qǐng)?bào)告日期： 年 月 日檢驗(yàn)依據(jù)：蛋白質(zhì)含量測(cè)定SOPJYT-SOP 03-5-1-0331.儀器設(shè)備電子天平：型號(hào)_ 編號(hào)_ 校驗(yàn)有效期至_紫外-可見分光光度計(jì)：型號(hào)_ 編號(hào)_校驗(yàn)有效期至_2.檢驗(yàn)方法：lowry法 2.1.標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液的制備：取

16、蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品1支，用膠頭滴管加注射用水定容至 ml容量瓶中，搖勻，即得標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液貯備液。取標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液貯備液_ml定容至_ml容量瓶中，即為_µg/ml標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液。2.2.供試品溶液的制備：用精度為0.0001g的電子天平精密稱取本品約0.1000g置10ml量瓶中，用膠頭滴管加適量水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。再用刻度吸管精密量取供試品溶液1ml。2.3.標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：用刻度吸管精確量取標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液（ g/ml）0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml分別置于試管中，用刻度吸管加水補(bǔ)至1ml。再用刻度吸管準(zhǔn)確量取水1ml，作空白對(duì)照。2.4.測(cè)定：取上述溶液，用刻度吸管加入堿性銅試液1.0ml，搖勻，室溫放置10分鐘，各加入福林酚試液取福林試液中的貯備液（2mol/L酸濃度）1164.0ml，立即混勻，室溫放置30分鐘，照紫外-可見分光光度法，在650nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。標(biāo)準(zhǔn)曲線：標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液(g/ml) 650nm A值直線方程：r= ；Ya+bx_結(jié)果計(jì)算：用直線回歸法計(jì)算結(jié)果。以標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液濃度與對(duì)應(yīng)A值求回歸公式