實驗二細菌的人工培養(yǎng)

1、西安醫(yī)學院西安醫(yī)學院病原生物學與免疫學教研室病原生物學與免疫學教研室Xian edical University微免教研室微免教研室目的要求目的要求掌握常用培養(yǎng)基的細菌接種法。掌握常用培養(yǎng)基的細菌接種法。掌握常用細菌生化反應的原理、檢查方法。掌握常用細菌生化反應的原理、檢查方法。熟悉常用培養(yǎng)基的種類。熟悉常用培養(yǎng)基的種類。了解細菌培養(yǎng)基的制備原則及其基本程序。了解細菌培養(yǎng)基的制備原則及其基本程序。了解細菌培養(yǎng)物的各種性狀。了解細菌培養(yǎng)物的各種性狀。Xian edical University微免教研室微免教研室實驗內容實驗內容一、細菌的一、細菌的培養(yǎng)技術（錄像）培養(yǎng)技術（錄像）二、二、培養(yǎng)基的

2、制備、種類及細菌的生長現(xiàn)象培養(yǎng)基的制備、種類及細菌的生長現(xiàn)象三、三、細菌的接種法細菌的接種法四、四、細菌的生化反應細菌的生化反應Xian edical University微免教研室微免教研室思考討論思考討論何謂培養(yǎng)基？其制備原則是什么？常用培養(yǎng)基何謂培養(yǎng)基？其制備原則是什么？常用培養(yǎng)基的種類及其用途？的種類及其用途？用什么方法檢查細菌的動力？有何實際意義？用什么方法檢查細菌的動力？有何實際意義？Xian edical University微免教研室微免教研室1 1、記錄細菌的生長現(xiàn)象。記錄細菌的生長現(xiàn)象。2 2、記錄并分析、記錄并分析細菌的生化反應細菌的生化反應。Xian edical Un

3、iversity微免教研室微免教研室 培養(yǎng)基的制備原則培養(yǎng)基的制備原則二二、培養(yǎng)基的制備、種類及細菌的生長現(xiàn)象培養(yǎng)基的制備、種類及細菌的生長現(xiàn)象1 1、充足的營養(yǎng)物質；充足的營養(yǎng)物質；2 2、合適的酸堿度；、合適的酸堿度；3 3、必須經過滅菌處理。、必須經過滅菌處理。 培養(yǎng)基的制備過程培養(yǎng)基的制備過程配料、溶化、測定及矯正配料、溶化、測定及矯正pHpH、過濾、分裝、滅菌備、過濾、分裝、滅菌備用用Xian edical University微免教研室微免教研室 培養(yǎng)基的種類（性狀）培養(yǎng)基的種類（性狀）二二、培養(yǎng)基的制備、種類及細菌的生長現(xiàn)象培養(yǎng)基的制備、種類及細菌的生長現(xiàn)象液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)

4、基、固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基、固體培養(yǎng)基 培養(yǎng)基的種類（用途）培養(yǎng)基的種類（用途）1 1、基礎培養(yǎng)基：如肉湯培養(yǎng)基、基礎培養(yǎng)基：如肉湯培養(yǎng)基2 2、營養(yǎng)培養(yǎng)基：如血平板、營養(yǎng)培養(yǎng)基：如血平板3 3、鑒別培養(yǎng)基：如糖發(fā)酵管、鑒別培養(yǎng)基：如糖發(fā)酵管4 4、選擇培養(yǎng)基：如、選擇培養(yǎng)基：如SSSS培養(yǎng)基培養(yǎng)基5 5、厭氧培養(yǎng)基：如、厭氧培養(yǎng)基：如庖庖肉培養(yǎng)基肉培養(yǎng)基Xian edical University微免教研室微免教研室 細菌的生長現(xiàn)象細菌的生長現(xiàn)象二二、培養(yǎng)基的制備、種類及細菌的生長現(xiàn)象培養(yǎng)基的制備、種類及細菌的生長現(xiàn)象1 1、液體培養(yǎng)基：混濁生長、沉淀生長、菌膜生長、液體培養(yǎng)基：

5、混濁生長、沉淀生長、菌膜生長2 2、半固體培養(yǎng)基：擴散生長、非擴散生長、半固體培養(yǎng)基：擴散生長、非擴散生長3 3、固體培養(yǎng)基：菌落、菌苔、固體培養(yǎng)基：菌落、菌苔Xian edical University微免教研室微免教研室三三、細菌的接種法細菌的接種法瓊脂平板培養(yǎng)基的分區(qū)劃線接種法瓊脂平板培養(yǎng)基的分區(qū)劃線接種法瓊脂斜面培養(yǎng)基的接種法瓊脂斜面培養(yǎng)基的接種法半固體培養(yǎng)基接種法半固體培養(yǎng)基接種法液體培養(yǎng)基接種法液體培養(yǎng)基接種法Xian edical University微免教研室微免教研室三三、細菌的接種法細菌的接種法瓊脂平板培養(yǎng)基的分區(qū)劃線接種法瓊脂平板培養(yǎng)基的分區(qū)劃線接種法瓊脂斜面培養(yǎng)基的接種

6、法瓊脂斜面培養(yǎng)基的接種法半固體培養(yǎng)基接種法半固體培養(yǎng)基接種法液體培養(yǎng)基接種法液體培養(yǎng)基接種法Xian edical University微免教研室微免教研室四四、細菌的生化反應細菌的生化反應 各種細菌具有的酶不完全相同，對營養(yǎng)物各種細菌具有的酶不完全相同，對營養(yǎng)物質的分解能力不一致，代謝產物有別。據(jù)質的分解能力不一致，代謝產物有別。據(jù)此特點，利用生物化學方法來鑒別不同細此特點，利用生物化學方法來鑒別不同細菌，稱為細菌的生化反應。菌，稱為細菌的生化反應。 Xian edical University微免教研室微免教研室v原理：原理： 細菌細菌 糖（醇）糖（醇）有機酸，有機酸，pHpH（指示劑呈酸

7、性反應）指示劑呈酸性反應） 甲酸解氫酶甲酸解氫酶 甲酸甲酸倒置小試管中有氣泡）倒置小試管中有氣泡）v方法：大腸埃希菌、傷寒沙門菌分別接種于葡萄糖、方法：大腸埃希菌、傷寒沙門菌分別接種于葡萄糖、乳糖等發(fā)酵管，乳糖等發(fā)酵管，3737培養(yǎng)培養(yǎng)18h18h24h24h觀察。觀察。v結果：結果： 糖發(fā)酵試驗糖發(fā)酵試驗四四、細菌的生化反應細菌的生化反應Xian edical University微免教研室微免教研室四四、細菌的生化反應細菌的生化反應 糖發(fā)酵試驗糖發(fā)酵試驗Xian edical University微免教研室微免教研室四四、細菌的生化反應細菌的生化反應 靛基質（吲哚）試驗靛基質（吲哚）試驗v

8、原理：原理： 細菌細菌 吲哚試劑吲哚試劑 色氨酸色氨酸吲哚吲哚v方法：大腸埃希菌、傷寒沙門菌分別接種于蛋白方法：大腸埃希菌、傷寒沙門菌分別接種于蛋白胨水，胨水，3737培養(yǎng)培養(yǎng)18h18h24h24h后，加入吲哚試劑觀察。后，加入吲哚試劑觀察。v結果：結果：Xian edical University微免教研室微免教研室四四、細菌的生化反應細菌的生化反應 靛基質（吲哚）試驗靛基質（吲哚）試驗Xian edical University微免教研室微免教研室四四、細菌的生化反應細菌的生化反應 硫化氫試驗硫化氫試驗v原理：原理： 細菌細菌v含硫氨基酸含硫氨基酸H H2 2S+S+FeSOFeSO4

9、4（黑色）（黑色）v方法：大腸埃希菌、肖氏沙門菌分別接種于硫方法：大腸埃希菌、肖氏沙門菌分別接種于硫酸亞鐵培養(yǎng)基，酸亞鐵培養(yǎng)基，3737培養(yǎng)培養(yǎng)18h18h24h24h觀察。觀察。v結果：結果：Xian edical University微免教研室微免教研室四四、細菌的生化反應細菌的生化反應 硫化氫試驗硫化氫試驗Xian edical University微免教研室微免教研室vI - I - 吲哚（吲哚（indolindol）試驗）試驗vM - M - 甲基紅（甲基紅（methyl redmethyl red）試驗）試驗vVi- VPVi- VP（Voges-ProskauerVoges-Pr

10、oskauer）試驗）試驗vC - C - 枸櫞酸鹽利用（枸櫞酸鹽利用（citrate utilizationcitrate utilization）試驗）試驗四四、細菌的生化反應細菌的生化反應 IMViC試驗試驗Xian edical University微免教研室微免教研室四四、細菌的生化反應細菌的生化反應 葡萄糖葡萄糖 丙酮酸丙酮酸 乙酰甲基甲醇（乙酰甲基甲醇（pHpH5.45.4） 混合酸（混合酸（ pHpH4.54.5） 甲基紅指示劑甲基紅指示劑 KOH+KOH+空氣空氣 丁二醇丁二醇 雙乙酰雙乙酰 - -萘酚萘酚+ +肌酸肌酸 紅色化合物紅色化合物 紅色紅色 （VPVP試驗陽性）試

11、驗陽性） （甲基紅試驗陽性）（甲基紅試驗陽性） VPVP試驗與甲基紅試驗原理試驗與甲基紅試驗原理Xian edical University微免教研室微免教研室v方法：方法：大腸埃希菌、產氣桿菌分別接種于葡萄糖大腸埃希菌、產氣桿菌分別接種于葡萄糖蛋白胨水，蛋白胨水，3737培養(yǎng)培養(yǎng)18h18h24h24h后，按每毫升培養(yǎng)后，按每毫升培養(yǎng)基加入含基加入含0.3%0.3%肌酸或肌酐的肌酸或肌酐的0.1ml 40% KOH0.1ml 40% KOH溶液，溶液，48485050水浴水浴2h2h或或3737 4h4h，充分搖動后觀察，充分搖動后觀察。v方法：方法：大腸埃希菌、產氣桿菌分別接種于葡萄糖大腸

12、埃希菌、產氣桿菌分別接種于葡萄糖蛋白胨水，蛋白胨水，3737培養(yǎng)培養(yǎng)18h18h24h24h后，滴加甲基紅指后，滴加甲基紅指示劑觀察結果。示劑觀察結果。四四、細菌的生化反應細菌的生化反應VP試驗試驗甲基紅試驗甲基紅試驗Xian edical University微免教研室微免教研室四四、細菌的生化反應細菌的生化反應枸櫞酸鹽利用試驗枸櫞酸鹽利用試驗v原理：原理： 細菌利用銨鹽作為唯一氮源，并利用枸細菌利用銨鹽作為唯一氮源，并利用枸櫞酸鹽作為唯一碳源時，可在枸櫞酸鹽培養(yǎng)基櫞酸鹽作為唯一碳源時，可在枸櫞酸鹽培養(yǎng)基上生長，分解枸櫞酸鹽生成碳酸鹽，并分解銨上生長，分解枸櫞酸鹽生成碳酸鹽，并分解銨鹽生成氨

13、，培養(yǎng)基呈堿性反應。鹽生成氨，培養(yǎng)基呈堿性反應。v方法：大腸埃希菌、產氣桿菌分別接種于枸櫞方法：大腸埃希菌、產氣桿菌分別接種于枸櫞酸鹽培養(yǎng)基，酸鹽培養(yǎng)基，3737培養(yǎng)培養(yǎng)18h18h24h24h觀察。觀察。v結果：結果：Xian edical University微免教研室微免教研室v大腸埃希菌大腸埃希菌 + + - - + + - - v產氣桿菌產氣桿菌 - - + + - - + + 四四、細菌的生化反應細菌的生化反應 IMViC試驗試驗Xian edical University微免教研室微免教研室四四、細菌的生化反應細菌的生化反應 尿素酶試驗尿素酶試驗v原理：原理： 細菌若有尿素酶，能分解培養(yǎng)基中的尿細菌若有