脂糖舒對(duì)糖尿病大鼠凝血功能和血液流變學(xué)異常的改善作用

1、脂糖舒對(duì)糖尿病大鼠凝血功能和血液流變學(xué)異常的改善作用                              作者：舒思潔，舒慧 梅同荷 鄭曦 【摘要】  目的觀察脂糖舒對(duì)糖尿病大鼠凝血功能和血液流變學(xué)異常的改善作用, 以探討該方藥對(duì)糖尿病血管并發(fā)癥的防治作用。方法腹腔注射鏈脲霉素制作糖

2、尿病大鼠模型。用不同劑量脂糖舒（0.5 g/kg和1.0 g/kg）灌胃，連續(xù)10周，并取健康大鼠作正常對(duì)照。分別于第8和第10周末，測(cè)定各組大鼠血糖（Glu）含量，凝血功能指標(biāo)凝血酶時(shí)間（TT）、凝血酶原時(shí)間（PT）、活化部分促凝血酶原激酶時(shí)間（APTT）和纖維蛋白原（Fbg）含量和血液流變學(xué)指標(biāo)全血黏度、血漿黏度、血沉、壓積、紅細(xì)胞聚集指數(shù)和紅細(xì)胞變形指數(shù)。結(jié)果模型組大鼠的血糖含量明顯升高，上述凝血功能指標(biāo)和血液流變學(xué)指標(biāo)明顯異常改變（較正常組P<0.01），而高劑量脂糖舒組大鼠的血糖含量明顯降低，凝血功能指標(biāo)和血液流變學(xué)指標(biāo)的異常改變有明顯的改善，與模型組比較有顯著性差異(P<

3、; 0.050.01)，且接近正常水平。結(jié)論高劑量脂糖舒對(duì)糖尿病大鼠凝血功能和血液流變學(xué)的指標(biāo)異常有明顯的改善作用。 【關(guān)鍵詞】  脂糖舒 糖尿病 凝血功能 血液流變學(xué) 大鼠Abstract：ObjectiveTo observe the effects of ZhiTangShu (ZTS) on coagulation and hemorrheology in diabetic rats. MethodsThe diabetic model of rats was established by abdominal injection of Streptozotocin（50 mg

4、/kg）.Then, different doses of ZTS (ZTS-1 group 0.5g/kg and ZTS-2 group 1.0 g/kg) were administrated intragastrically for 10 weeks, and healthy rats were used as control.  At the end of the 8th week, the content of Glucose (Glu) and the coagulation indexes fibrinogen (Fbg) in serum and thrombin

5、time (TT)，thromboplastin time (PT) and the activated partial thromboplastin time (APTT)were detected; at the end of the 10th week, the hemorrheology indexes blood viscosity, plasma viscosity, erythrocyte sedimentation, erythrocyte ratio, erythrocyte aggregation index and erythrocyte deformity indexw

6、ere detected. Results（1）Compared with normal control group , the content of Glu was increased and the indexes of coagulation and hemorrheology were abnormally changed in diabetic model group (P<0.05,P<0.01). （2）Courpared with the diabetic model group, the content of Glu was decreased and the i

7、ndexes of coagulation and hemorrheology were improve in high dose ( 1.0 g/kg ) of ZTS group (P<0.05 or P<0.01), and approached the normal level. ConclusionZTS has obvious protective effects on coagulation disorder and hemorrheology in diabetic rats.Key words：ZhiTangShu ;  Diabetes; 

8、Blood coagulation;   Hemorrheology;    Rats以往實(shí)驗(yàn)證明1，2，湖北咸寧學(xué)院藥學(xué)院研制的純中藥復(fù)方脂糖舒能明顯抑制蛋白非酶糖基化、清除自由基和抗脂質(zhì)過(guò)氧化等作用。本文探討脂糖舒對(duì)糖尿病大鼠凝血功能和血液流變學(xué)異常的改善作用，旨在為脂糖舒的抗糖尿病血管并發(fā)癥作用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。1  方法與儀器1.1  藥品與試劑 脂糖舒由山藥、山茱萸、女貞子和西洋參等十幾味中藥組成，方中藥材均購(gòu)自武漢市九通大藥房司門店，經(jīng)湖北中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系詹亞華教授鑒定為合格正品，按3法制成相當(dāng)原生藥0.5

9、g/ml和1.0 g/ml的濃縮口服液，冰箱40保存。鏈脲霉素（Streptozotocin）系美國(guó)Sigma公司產(chǎn)品，臨用前用預(yù)先高壓滅菌的0.1mol/L pH 4.5的檸檬酸緩沖液配成2% 溶液。試劑盒：葡萄糖（Glucose,Glu）測(cè)試盒，由南京建成生物工程研究所提供，批號(hào)070326；凝血酶原時(shí)間（prothrombin time, PT）, 凝血酶時(shí)間（thrombin time, TT）, 活化部分促凝血酶原激酶時(shí)間（activated partial thromoplastin time, APTT）和纖維蛋白原（fibrinogen, Fbg）等4試劑盒由美國(guó)太平洋公司提供

10、，批號(hào)分別為354602X，011501X，308506X和601504X。尿糖試紙：廣州珠江生化制藥有限公司，批號(hào)20070202。1.2   儀器 美國(guó)400cplus 半自動(dòng)血凝儀；SA-5000型全自動(dòng)血液流變儀和SD-100型動(dòng)態(tài)血沉壓積測(cè)試儀，北京賽科希德科技有限公司生產(chǎn)。             1.3  動(dòng)物   Wistar大鼠，體質(zhì)量 (220±20)g，清潔級(jí)，由湖

11、北省醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)：SCXK（鄂）2003-0005。1.4  方法45只大鼠隨機(jī)分為正常組（8只）和造模組（37只）。正常組大鼠不作任何處理，造模組大鼠按文獻(xiàn)4法一次性腹腔注射鏈脲霉素（50 mg/kg）制作糖尿病大鼠模型，72 h后用尿糖試紙測(cè)尿糖陽(yáng)性（+ +）、采鼠尾血測(cè)血糖>16 mmol/L者為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，再隨機(jī)分成糖尿病對(duì)照組（模型組）、脂糖舒1組和脂糖舒2組，每組10只，余者棄之。分別用等容量的生理鹽水和脂糖舒（1組0.5 g/kg；2組1.0 g/kg）灌胃， 1次/d，連續(xù)10周。各組大鼠自由飲水和攝食，飼料來(lái)源與動(dòng)物來(lái)源相同。于第8周末，給藥

12、后禁食16 h。剪各組存活大鼠尾尖取血，枸櫞酸鈉抗凝，制備血清，按試劑盒說(shuō)明書方法測(cè)定血清Glu和Fbg含量和PT，TT，APTT。然后恢復(fù)灌胃給藥、飲水和攝食，于第10周末，禁食16 h，摘眼球取血，肝素抗凝，血沉管于SD-100型動(dòng)態(tài)血沉/壓積測(cè)試儀中直立 30 min測(cè)定血沉。同時(shí)測(cè)定全血黏度、血沉、紅細(xì)胞聚集指數(shù)和紅細(xì)胞變形指數(shù)，然后離心（4 000 r/min）5 min，測(cè)定紅細(xì)胞壓積、血漿黏度、紅細(xì)胞聚集指數(shù)和紅細(xì)胞變形指數(shù)。1         1.5  統(tǒng)計(jì)學(xué)處理  &

13、#160;實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以±s表示，組間差異顯著性比較采用t檢驗(yàn)。        2  結(jié)果2.1  一般情況正常組大鼠動(dòng)作自如，反應(yīng)靈敏，毛發(fā)光澤；模型組大鼠消瘦、皮毛枯燥，倦怠，多飲多食，多尿。高劑量脂糖舒組大鼠上述癥狀明顯輕于模型組。2.2  脂糖舒對(duì)糖尿病大鼠血糖、凝血功能指標(biāo)和血液流變學(xué)指標(biāo)的影響糖尿病模型組大鼠的血糖明顯升高，凝血功能指標(biāo)和血液流變學(xué)指標(biāo)均發(fā)生異常變化，表現(xiàn)為Fbg含量明顯升高，PT，TT，APTT顯著減少；全血黏度、血漿黏度、血沉、紅細(xì)胞壓積和紅細(xì)胞聚

14、集指數(shù)明顯升高、紅細(xì)胞變形指數(shù)顯著降低（較正常組P<0.050.01）。應(yīng)用脂糖舒后其大劑量組的血糖及上述凝血功能和血液流變學(xué)的指標(biāo)與模型組比較，均有顯著性差異（P<0.050.01），接近正常組水平。結(jié)果見表12。表1  4組大鼠血糖和凝血功能指標(biāo)的比較(略)表2  4組大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)的比較（略）3 討論報(bào)道511，糖尿病及其并發(fā)癥患者和糖尿病模型大鼠的凝血功能和血液流變學(xué)均發(fā)生明顯異常改變，表現(xiàn)為血漿Fbg含量明顯升高，PT，TT，APTT顯著減少；全血黏度、血漿黏度、血沉、紅細(xì)胞壓積和紅細(xì)胞聚集指數(shù)升高，紅細(xì)胞變形指數(shù)顯著降低。發(fā)生凝血功能和血液流變學(xué)

15、異常改變的機(jī)制可能有：糖尿病長(zhǎng)期的高血糖狀態(tài)，使紅細(xì)胞膜蛋白、血紅蛋白和血漿蛋白非酶糖基化增強(qiáng)，糖基化終產(chǎn)物（AGEs）和自由基增多及脂質(zhì)過(guò)氧化亦增強(qiáng)，進(jìn)而使紅細(xì)胞彼此發(fā)生交聯(lián)使血液黏度升高、血沉增快和蛋白變性。其中，高切黏度反映紅細(xì)胞的變性能力，低切黏度反映紅細(xì)胞的聚集能力，全血黏度和血漿黏度升高表明紅細(xì)胞的發(fā)生變性和聚集、血流阻力增大，紅細(xì)胞壓積和紅細(xì)胞聚集指數(shù)升高。血沉增快說(shuō)明紅細(xì)胞表面負(fù)電荷減少，相對(duì)排斥力減弱。糖尿病患者血漿中脂類及各種蛋白質(zhì)成分如-球蛋白、-球蛋白和纖維蛋白原等含量均有明顯升高，導(dǎo)致血漿黏度升高，特別是纖維蛋白原這種鏈狀高分子化合物能在血漿中形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，從而影響血

16、漿流動(dòng)，使血漿黏度升高。纖維蛋白原附在紅細(xì)胞表面時(shí)能使表明電荷遮蔽負(fù)電荷能力降低，靜電斥力減少，紅細(xì)胞間聚集力增加，從而使紅細(xì)胞相互聚合成串狀，導(dǎo)致全血黏度明顯升高。糖尿病患者紅細(xì)胞變形能力降低由多種因素引起，主要由于糖代謝紊亂，使紅細(xì)胞膜上脂類成分變化以及通過(guò)葡萄糖滲透到紅細(xì)胞內(nèi)與血紅蛋白分子發(fā)生反應(yīng)，使紅細(xì)胞內(nèi)液滲透壓升高造成的。紅細(xì)胞變形能力降低和血液呈高黏狀態(tài)，是糖尿病并發(fā)微循環(huán)障礙的主要原因。同時(shí)紅細(xì)胞聚集性增加，導(dǎo)致局部微循環(huán)血流不暢，誘導(dǎo)微血栓形成和組織缺血缺氧。血液黏度升高導(dǎo)致凝血因子激活，TT反映凝血因子的活力，PT反映外源性凝血系統(tǒng)激活的凝血指標(biāo)，主要反映凝血因子、及因子等

17、多個(gè)凝血因子水平的一個(gè)凝血功能指標(biāo)，APTT縮短提示凝血過(guò)程中的各階段凝血因子均被激活，F(xiàn)bg增高提示凝血酶被激活，從而加速了糖尿病的病情惡化及糖尿病血管并發(fā)癥的發(fā)生和。因此調(diào)節(jié)凝血機(jī)制與抗凝血機(jī)制的動(dòng)態(tài)平衡和維持血液流變學(xué)的生理水平可成為阻止或延緩糖尿病血管并發(fā)癥的發(fā)生發(fā)展的重要機(jī)制之一。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：糖尿病模型組大鼠的血糖明顯升高、凝血功能指標(biāo)和血液流變學(xué)指標(biāo)均發(fā)生異常變化（較正常組P<0.050.01）。表明本實(shí)驗(yàn)的這些結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道相一致，具有凝血功能和血液流變學(xué)均異常的大鼠糖尿病模型制作成功。應(yīng)用脂糖舒后其大劑量組大鼠的血糖、凝血功能指標(biāo)和血液流變學(xué)的各項(xiàng)指標(biāo)與模型組均有顯著

18、性差異（P<0.050.01），且接近正常組水平，表明大劑量脂糖舒對(duì)糖尿病大鼠凝血功能和血液流變學(xué)異常均有明顯的改善作用。其作用機(jī)制可能與該方抑制蛋白糖基化、清除自由基和抗脂質(zhì)過(guò)氧化等效應(yīng)有關(guān)，但詳細(xì)機(jī)制有待于進(jìn)一步探討。本實(shí)驗(yàn)為脂糖舒對(duì)糖尿病血管并發(fā)癥的防治作用提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)?！疚墨I(xiàn)】  1舒思潔，舒 慧，劉彤云，等. 脂糖舒對(duì)糖尿病大鼠血清蛋白非酶糖化的影響J.廣西中醫(yī)藥，2003，26(6)：46. 2舒思潔，吳基良，閔 清，等.脂糖舒對(duì)2型糖尿病大鼠自由基防御體系的影響J.山東醫(yī)藥，2004,44 (7)：23.3李儀奎.中醫(yī)藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)M.上海：上海技術(shù)出版社，1991：36.4張均田.藥理實(shí)驗(yàn)方法M.北京: 北京醫(yī)科大學(xué)、協(xié)和醫(yī)科大學(xué)聯(lián)合出版社,1998：981.5趙俊娟，屈愛春.糖尿病慢性并發(fā)癥患者的血流變觀察J.中國(guó)血液流變學(xué)雜志，2000,10（2）： 121.6何劍峰，杜 娟，李向榮，等. 糖尿病大鼠血液流變學(xué)的動(dòng)態(tài)觀察J.中國(guó)血液流變學(xué)雜志，2004,14