腸道病毒71型及其疫苗的研究進(jìn)展.docx

1、腸道病毒71型及其疫苗的研究進(jìn)展楊俊杰'綜述；李薇'，王玉琳'審校(1蘭州生物制品研究所,蘭州730046;2北京微谷生物醫(yī)藥有限公司,北京100024)摘要:腸道病毒71型(E71,EV71)是手足口病的主要病原體,是一種具有較強(qiáng)傳染性和致病性的病毒，其流行范圍波及全世界,近年來在亞太地區(qū)尤其是在中國的流行日趨頻繁前HV71病原學(xué)病學(xué)以及動槌型的研究均取得了一定進(jìn)展，為疫苗的研發(fā)奠定了相應(yīng)的基礎(chǔ)，中國三家公司的EV71滅活疫苗現(xiàn)已率先獲得臨床批件,有望成為預(yù)防手足口病的有效手段。關(guān)鍵詞：腸道病毒71型；疫苗研究;動物模型；研究進(jìn)展中圖分類號：R373-2文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

2、文章編號:1005-5673(2011)02-005-06腸道病毒71型屬于小RNA病毒科(P)腸道病毒屬(E)，是引起手足口病(Hand-foodandmoudiHFMD)的主要病原體，并有一定的幾率引發(fā)無菌性腦膜炎(AszpacmeihgpH腦炎(Braiig】和脊髓灰質(zhì)炎樣麻痹(P。偵y等多種神經(jīng)系統(tǒng)并發(fā)癥1969年在美國首次分腐A來，EV71已在世界范圍內(nèi)引起十多次爆發(fā)與流行，尤其是I997年以來,EV71在亞太地區(qū)的流行呈顯著上升趨勢"3來西亞3*坡亞等國以及中國的大陸V準(zhǔn)和臺灣地區(qū)等均發(fā)生了不同程度的爆發(fā)流行，其中，臺灣1998年和2000年的EV71大爆發(fā)中分別有129

3、106人和80677人感染，并最終導(dǎo)致78人和41人死亡回1于缺乏有效的抗病毒藥物以及可用的疫苗,EV7【的廣泛流行造成了巨大的疾病負(fù)擔(dān)，同時(shí)也引起了社會的恐慌2008年中國安徽省阜陽市爆發(fā)人手足II病疫情，并隨后擴(kuò)展到全國其他地區(qū)，全年共報(bào)告發(fā)病488955例，重癥病例1165例，死亡126例月衛(wèi)生部把手足口病納入丙類法定傳染病管理009年，全年報(bào)告發(fā)病I15535例，死亡約例VH0年共報(bào)告病例1774669例，死亡905VHFMD在中國大規(guī)模流行己引起人們的廣泛關(guān)注文對EV71的病原學(xué)因分型，亍病學(xué)收稿日期:20lI-02-28;修回日期:20lI-03-10基金項(xiàng)目：甘謝科技重大專項(xiàng)(0

4、92GKDA010)通訊作者：王玉琳，E-m*ilyliw我i注r作者簡介:楊俊杰(I985-).男.碩士研尤生,主要從事病毒性疫苗的研究研發(fā)以及動物模型研究等作一綜述1病原學(xué)與基因分型1-1病原學(xué)特征EV71的病毒顆粒為直徑2430nm的二十面體立體對稱的球形結(jié)構(gòu)，無包膜和突起V核心為一條長約7.4kb的正鏈RNA,基因組中僅有一個(gè)開放閱讀框，編碼含2194個(gè)氨基酸的多聚蛋白路聚蛋白可進(jìn)一步被水解成PlVX三個(gè)前體街，PI前體蛋白編碼VP18。四種病爭卜殼蛋白，P2和P3前體蛋白編碼7個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白(2A2C和3A3D)層的衣殼首先由四種衣殼蛋白構(gòu)成原聚體，再由5個(gè)原聚體拼裝成具有五聚體樣結(jié)構(gòu)

5、的亞單位,60個(gè)亞單位通過各自的結(jié)構(gòu)域相互連接，形成病毒的衣殼和VP3三種結(jié)構(gòu)蛋白裸露于病毒顆粒的表面，而VP4則位于病毒顆粒衣殼內(nèi)側(cè)與RNA核心緊密連接而病毒的抗原決定簇基本上位于VP1VP3上其在VP1上含有多個(gè)中和抗原表位馬VP1蛋白的基因在外界選擇壓力下易發(fā)生變異從而賦予EV71病毒顆粒不同的抗原特性，因此VP1基因被認(rèn)為是序列分析的最佳選擇*71受體研究顯示，VPI能與多種人類蛋白受體結(jié)合，在病毒對細(xì)胞的吸附以及穿入金過程中起著至關(guān)重要的作用C5oI-2EV7I的基因分型腸道病毒傳統(tǒng)的中和血清分型逐漸被基因分型所取代，至今腸道病毒己發(fā)現(xiàn)的10()多個(gè)血清型，按基因分型則分為腸道病毒A

6、D組，EV71和柯薩奇病毒A16(CoxMrkieirusAl6,CVAl6)均屬于腸道病毒A組71的基因分型主要基于VP1和VP基因基因編碼EV71的主要抗原決定簇具有高度的遺傳多樣性，它不僅可作為腸道病毒屬內(nèi)不同血清型分類的依據(jù)，亦可作為小RNA病毒科內(nèi)不同屬的分類參考，因此VPi基因被認(rèn)為是系統(tǒng)進(jìn)化分析最具研究價(jià)值的區(qū)域n等對113株EV71的VPlf亥酸序列的同源性進(jìn)行了分析，首先將EV7I劃分為個(gè)基因型，屬于A型枚有BrCr原型株，與其他EV71分離株的核苜酸差異在I6.5o19.7%等m最近研究顯示2008年中國安徽省六安地區(qū)分離到的5株EV7I的VP1序列與BrCr株的同源性均超

7、過97.4%，屬于A型是繼1969年發(fā)現(xiàn)BrCr原型株之后，A型EV71株的首次被分離的報(bào)道因B型和C型又被進(jìn)T劃分為BlB5以及ClC5亞型，也有學(xué)者將中國大陸地區(qū)流行的C4亞型進(jìn)一步分為C4a和C4b群然EV7I結(jié)構(gòu)蛋白VP4的氨基酸序列非保守，但其核昔酸序列的變異幅度達(dá)17.5%24-4%，也據(jù)此用于分子流行病學(xué)和基因分型的研究基因亞型之間和EV71與柯薩奇病毒之間艦的基因重組，使全序列的基因分型則更為準(zhǔn)確'，但在流行病學(xué)調(diào)查方面有其局限性2流行病學(xué)2J血清流行病學(xué)迄今為止,EV7I流行已遍布全球，病毒主要通過糞-口傳播，且隱性感染者居多，因此易出現(xiàn)爆發(fā)流行是EV7I己知的唯一自

8、然宿主，EV7I酷對象主要為5歲以下的兒童，特別是1歲以下的嬰幼兒，產(chǎn)生神經(jīng)系統(tǒng)癥狀的幾率較大*清流彳病學(xué)研究表明勇】，新生兒由于帶有母傳抗體，"具有EV71抗體，但一個(gè)月后會迅速下降;6個(gè)月至3歲的幼兒EV71抗體水平較低(4%26%);3-12歲的兒童因自然感染而EV71抗體陽性率從26%上升到5()%；成人血清EV71抗體陽性率在50%以上，證實(shí)了缺乏EV71保護(hù)性抗體是嬰幼兒高感染率和高死亡率的主要原因©德國的一項(xiàng)血清流行病學(xué)調(diào)查顯示，5，僅有27.3%的0-3歲幼兒以及45.6%的3-6歲兒童具有EV7I中和抗體，而63.4%的學(xué)前兒童無EV7I中和抗體，10歲以

9、上兒童和成人中和抗體陽性率均超過50%f.東南亞和南美地區(qū)血清流行病淌查也顯示了類似的數(shù)據(jù)表明了嬰幼兒血清中缺乏EV71中和抗體可能是引起EV7I大爆發(fā)并導(dǎo)致較高病死率的原因2J分子流行病學(xué)對腸道病毒衣殼蛋白VP1序列的分析己成為腸道病毒基因分型的金標(biāo)準(zhǔn)，也是分子流行病學(xué)研究的主要手段，通過EV71VP1基因序列的分析，發(fā)現(xiàn)EV71在流行過程中的基因型變化情況)9犢國首次分離并于1974年報(bào)道的EV71病毒株BrCrCAJO是一直以來僅有的A型株，2009年在中國安徽省六安地區(qū)又分離到5株A型株2(1止紀(jì)70-80年代EV71引起的爆發(fā)流行中，優(yōu)勢毒株的基因型則為B型，包括1975和1978年

10、保加利亞和匈牙利分別導(dǎo)致44和47名兒童死亡的EV71第一次大爆發(fā)流行，以及美國僉大利亞國等的部流行8年之后，B基因型在美國消失，取而代之的是C基因型，而在美國以外的其他地區(qū)，尤其是東南亞各國，則出現(xiàn)了B和C基因型共流行和交替流行，包括198年期間中國的香港與臺灣僉國西等地的EV71第二次大流行，以及199800年發(fā)生丁東南亞各國的EV7I第三次大流行V*中B3四個(gè)亞型均于100年在馬來西亞流行中出現(xiàn)，B3一型為1997年流行的優(yōu)勢基因型，但到2000年，則變?yōu)镃1和B4亞型''幻，一時(shí)期中國的臺灣坡。|匚國大量病例報(bào)告顯示，患者以C2亞型感染為主，同時(shí)也有少量B4亞型的出現(xiàn)，

11、到2000年優(yōu)勢流行基因型又轉(zhuǎn)為亞型年C基因型再次引起流行，但為以前從未出現(xiàn)過的©亞型"年則出現(xiàn)B5IE型，呈B型C型交替流行，而這種優(yōu)勢基因型或亞型的替換與HFMD的爆發(fā)流行密切相關(guān)e1,對同一地區(qū)EV7I頻繁發(fā)生基因型的交替尚無確切解釋，2005年M預(yù)右等知一項(xiàng)長達(dá)6年的研究提示兩個(gè)可能的原因：EV71在鄰近國家或地區(qū)之間傳播活躍，導(dǎo)致不同基因型病毒株的頻繁引入或輸出；與所有RNA病毒相同,EV7I基因組突變頻率高，進(jìn)化速度快，尤其是用來進(jìn)行基因分型的VP1區(qū)，由于編碼病毒抗原表位面臨宿主免疫系統(tǒng)強(qiáng)大的選擇壓力，使其新發(fā)現(xiàn)的B5亞型在短期內(nèi)便取代了C4亞型成為流行株，并

12、發(fā)生了抗原表位變異e中國自1981年上海發(fā)現(xiàn)的HFMD在全國十幾個(gè)省均有報(bào)道，從2007年至今，EV71的流行范圍和規(guī)模均進(jìn)一步擴(kuò)大，對分離到的EV71基因序列分析顯示，均屬于C4亞型，但不同時(shí)間不同地區(qū)分離到的C4亞型毒株也存有一定的差異，示0亞型在中國大陸較長時(shí)間的傳播過程中，可能通過變異和基因重組產(chǎn)生了不同的分支。EV71基因型間的交替與其基因重組現(xiàn)象是有一定聯(lián)系的，基因重組在腸道病毒中普遍存在，在同一次爆發(fā)流行中不同基因型病毒的共感染為病毒的基因重組提供了可能，如馬來西亞EV7I流行中同時(shí)出現(xiàn)四種基因亞型回W'HFVD的主要病脈為EV71和CVA16,以及存在其他的腸道病毒共同

13、感染，這都為EV71各基因型間的種內(nèi)重組以及EV7I與其他腸道病毒（主要是CVA16瞥）的PI間重組提供了一定的條件'皿，增加了EV71流行的不可預(yù)測性，目前發(fā)現(xiàn)的基因重組主要發(fā)生在非結(jié)構(gòu)蛋白基因區(qū)或非編碼區(qū)，一些重組株可能會發(fā)展成為某一階段的流行株，如造成2008年安徽阜陽HFMD大爆發(fā)的C4亞型為C4與CVA16的重組株2。©3疫苗研究EV71的持續(xù)爆發(fā)流行使得疫苗的研發(fā)變得非常迫切并備受關(guān)注，目前國內(nèi)外很多研究機(jī)構(gòu)正在致力于EV7I疫苗的研發(fā)*71疫苗的研究主要集中在滅活疫苗有舌疫苗j樣顆粒（ViuskepaoralVLP）疫苗一位疫苗V疫苗V嘩VP1中和表位的多肽疫苗

14、等研究方向些研究在實(shí)驗(yàn)室階段均有一定的保護(hù)作用，但目前尚無上市疫苗用于EV71感染的預(yù)防得慶幸的是前不久國藥北京微谷生物醫(yī)藥有限公司京科興生物制品有限公司以及中國醫(yī)科院醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所率先完成rEV7I滅活疫苗的臨床前研究，獲得國家食品藥品監(jiān)督管理局（SFDA）臨床研究批件，預(yù)計(jì)臨床試驗(yàn)將很快啟動，有望成為預(yù)防手足曰病的有效手段Di-233滅活疫苗滅活脊髓灰質(zhì)炎病毒疫苗（VV）對脊髓灰質(zhì)炎感染和流行預(yù)防的成功經(jīng)驗(yàn)，亦可為EV71疫苗的研發(fā)借鑒過熱滅活的EV7I疫苗顯示出了良好勺免疫原性，用其免疫受孕前的母鼠，可在新生小鼠體內(nèi)檢測到EV71中和抗體，該母傳抗體對以23OOLD知病毒株攻擊的保護(hù)效

15、果達(dá)80%以上，顯示出比VPI重組疫苗以及DNA疫苗更好的保護(hù)效果”門來西亞學(xué)者Ong等e用甲醛滅活一/鼠適應(yīng)的EV71毒株MAV（B3亞型）制備的滅活疫苗，免疫小鼠后產(chǎn)生的抗體對B3C5«EV71均有良好的交叉中和活性，該滅活疫苗對ER乳鼠在I天一兩針免疫后，能抵抗5）LDMAV病毒株的攻擊一前尚不能證實(shí)其在小鼠源上以B3亞型外的其他基因型或亞型的EV71進(jìn)行攻擊的交又保護(hù)性71滅活疫苗有效免疫劑量的研究顯示，80EU滅活疫苗可誘導(dǎo)靈長類動物產(chǎn)生高水平的中和抗體，并維持4個(gè)月以上臺灣一項(xiàng)研究探討了EV71滅活疫苗（C2亞型）與滅活脊髓灰質(zhì)炎疫苗I咳疫苗流感嗜血搐疫苗V喉類毒素和破傷

16、風(fēng)類毒素五價(jià)疫苗共同免疫的可行性結(jié)果顯示EV7I滅活疫苗與該五價(jià)疫苗的免疫效果互不干擾，EV71滅活疫苗單獨(dú)免疫和與五價(jià)疫苗共同免疫小鼠，兩針免疫后產(chǎn)生的中和抗體效價(jià)均為1:256,并對致死劑量EV7I活病毒攻擊具有保護(hù)性，同時(shí)所產(chǎn)生的抗血清對型的EV7I病毒具有廣泛的交叉中和作用，為今后EV71滅活疫苗與現(xiàn)有疫苗使用的可行性提供了一定依據(jù)制備滅活疫苗需要大量的病毒為基礎(chǔ)，目前報(bào)道用于EV7I滅活疫苗制備的細(xì)胞系主要是Veo細(xì)胞以及人二倍體細(xì)胞系KMB-I7,因此EV71在這些細(xì)胞系上的適應(yīng)培養(yǎng)是研制EV71滅活疫苗的首要條件等'E實(shí)驗(yàn)室選育的Veo細(xì)胞適薄株YN3-4a以及Dong等

17、D9選育的KMB-17細(xì)胞適應(yīng)毒株FYW3KB在各自的適應(yīng)細(xì)胞系上顯示出生長速度快滴度高等特性疫動物產(chǎn)的血清對不同時(shí)期O同地區(qū)分離的多株EV7I期"交叉保護(hù)作用，YN3-4a和FY-23K-B株是具有應(yīng)用前景的滅活疫苗候選株卜，Wu等阮利用2L生物反應(yīng)器進(jìn)行了無血清Veo細(xì)胞微載體培養(yǎng)，為病毒的大量制備提供了條件，71通過生物反應(yīng)微載體培養(yǎng)的病毒產(chǎn)量比轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)可提高三倍，在無血清培養(yǎng)條件下病毒滴度可高達(dá)58107TCP/n1且后續(xù)研究表明，與血清培養(yǎng)收獲的病毒相比，無血清培養(yǎng)的病毒免疫動物后產(chǎn)生的中和抗體滴度更高，此可見，無血清微載體培養(yǎng)的EV7I病毒為滅活疫苗的開發(fā)提供了有利的條件

18、目前國內(nèi)外對EV71疫苗的研究主要為滅活疫苗，中國上述三家公司的EV71滅活疫苗獲得SFDA的臨床批件，表明在疫苗用毒種選育苗生產(chǎn)檢起藝研究以及疫苗評價(jià)動物模型等關(guān)鍵技木方面取得了突破，為生產(chǎn)人用EV71疫苗奠定了基礎(chǔ)。2基因工程疫苗基因工程疫苗的研究主要集中在EV71病毒樣顆粒疫苗以及通過各種表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)的完整或部分VP1蛋白的亞單位疫苗©VLP由呈一定空間結(jié)構(gòu)的結(jié)構(gòu)蛋白組成，與全病毒相比，因其不含感染性的核酸，是理想的EV71疫苗®昆蟲細(xì)胞SF9共同表達(dá)P解【13CD蛋白，可組裝成VLP，其免疫效果優(yōu)于經(jīng)變性處理的VLP和熱滅活的EV7I病毒，能產(chǎn)生更高滴度的中和抗體,

19、對新生小鼠有更好的保護(hù)效果，并且VLP還能誘導(dǎo)產(chǎn)生細(xì)胞免疫應(yīng)答，尤其產(chǎn)生較高水平的FN-2以及I：-4,于表達(dá)量和最后的收率械，限制了其大規(guī)模生產(chǎn)應(yīng)用，最近，Chu331使用2L生物反應(yīng)器對VLP的表達(dá)進(jìn)行了進(jìn)一步的研究，通過表達(dá)載體設(shè)計(jì)3細(xì)胞抱密度，模式恐氧量等關(guān)鍵參數(shù)的篩選，獲得較高的表達(dá)量（m廈），是用轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)產(chǎn)量的43倍rP釋放于細(xì)胞培養(yǎng)液，簡化了后續(xù)的純化工藝，提高了產(chǎn)品的收率，為規(guī)模化生產(chǎn)奠定了基礎(chǔ)外，其免疫小鼠產(chǎn)生的抗血清對EV71不同基因型具有的廣譜交叉保護(hù)作用，EV71VLP疫苗是一種很有前景的候選疫苗VP1±含有病毒主要的抗原決定簇，基于VP1蛋白的亞單位疫苗也是

20、基因工程疫苗的主要研究方向，有通過原核I蟲細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)以及轉(zhuǎn)地哺乳動物狎因植物成功表達(dá)EV7IVPI蛋郵J報(bào)道，并且都顯示出一定的免疫原性，Wu等對通過大腸桿菌BL2I原核表達(dá)的重組VPI蛋白疫苗（10田劑），免疫小鼠能產(chǎn)生對EV71四個(gè)亞型均有保護(hù)作用的中和抗體，誘導(dǎo)T輔助細(xì)胞增殖并產(chǎn)生高水平的I：-10和正N-些通過口服途徑謎的VPI疫苗如利用可食用植物因動物;汁C35以及在減毒的百日咳桿菌表面表達(dá)VP1蛋白正處于研究階段©3其他候選疫苗處于實(shí)驗(yàn)室研究階段的候選疫苗還有減毒活疫苗V收疫苗和DNA疫苗等EV71減毒株S1-3CV是將脊髓灰質(zhì)炎病毒S*bi!疫苗株位于5NTR合酶和3

21、NTR的溫螂感突變位點(diǎn)引入EV71BrCr株基因組構(gòu)建而成的，盡管誘導(dǎo)產(chǎn)生的體液和細(xì)胞免疫應(yīng)答很好，同時(shí)在小鼠感染模型以及貓猴感染模型上表現(xiàn)出神經(jīng)毒力明顯減弱，但還是出現(xiàn)了輕度的神經(jīng)系統(tǒng)癥狀，表明減毒并不徹底1#EV71的毒力決定位點(diǎn)研邢深入，在借鑒脊觥灰質(zhì)炎口服活疫苗（OPV）成功經(jīng)驗(yàn)的基礎(chǔ)上,將有可能開發(fā)出減毒徹底的EV71減毒活疫苗多肽疫苗的研究主要集中在VPI上，目前對VP1蛋白的線性中和表位”以及T細(xì)胞表位3J研究己經(jīng)比較清楚，但多肽的局限性在于其免疫原性較弱且表位較為單一，不能產(chǎn)生全面的免疫應(yīng)答因此，設(shè)計(jì)出含有中和性B細(xì)胞表位以及T細(xì)胞表位的復(fù)合肽段對EV71感染的預(yù)防會更有意義T

22、uqg等"'將流行株中分離的EV71基因，經(jīng)PCR擴(kuò)增后克隆到真核表達(dá)質(zhì)粒pVAXI構(gòu)建了EV71DNA疫苗組質(zhì)粒在Veo細(xì)胞中具有林VP南白的能力，但動物免疫效果不盡理想，隨著免疫佐劑峻系統(tǒng)等技術(shù)的發(fā)展，EV71DNA孀仍是很有發(fā)展前景的一種候選疫苗。4動物模型動物模型在病毒的毒力V苗效力的評價(jià)V性試驗(yàn)等方面的研究具有重要的作用VX舟，EV71的動物模型主要有狒猴模型以及小鼠模型，密猴口J通過皮卜或脊髓接種的途徑感染EV71病毒并出現(xiàn)典型的神經(jīng)系統(tǒng)癥狀，用于安全性評價(jià)和保護(hù)效果驗(yàn)證，但由于價(jià)格昂貴，應(yīng)用受限71感染的舊齡新生TR或BALB/t乳鼠是最為常見的EV71模型動物

23、一使用B3亞型的小鼠適應(yīng)株，可通過灌胃與注射感染2周齡IR小鼠本研究成功了N0D/SCD小鼠感染模型4!,VP1GI45位k氨基酸點(diǎn)突變的變異株是N0DZCD小鼠的適應(yīng)病毒株，病毒感染持續(xù)時(shí)間可達(dá)個(gè)月以上，組織分布也更廣泛，可用3周齡以上小鼠進(jìn)行動物試驗(yàn)，是該模型迄今為止能感染EV71病毒的年齡最大的小鼠中國大陸地區(qū)的EV7I流行株主要屬于C4亞型，而實(shí)驗(yàn)動物普遍對該毒株不敏感®前主要建立了恒河猴感染模型以及IR乳鼠模型等3：通過腹腔注射對1日齡的TR乳鼠進(jìn)行病毒感染，繪制了病毒在骨骼肌內(nèi)的復(fù)制曲線,并聯(lián)合組織的病理變化，建立了中國流行的C4亞型毒株的小鼠模型河猴感染模型'0

24、在以EV7IIOCCD、,的劑量鼻腔感染（氣霧劑形式）后，可在中樞神經(jīng)系統(tǒng)*系統(tǒng)H等檢出病毒，并伴隨利超病理組織學(xué)改變，為分析EV7I感染過程提供了病原學(xué)及病理學(xué)的指標(biāo)5展望近十幾年來EV71在亞太地區(qū)越來越頻繁的爆發(fā)流行，現(xiàn)已成為一個(gè)嚴(yán)重威脅兒童健康的公共衛(wèi)生問題71病毒被認(rèn)為是脊髓灰質(zhì)炎病毒即將消滅之際，最重要的嗜神經(jīng)性腸道病毒，由于其致病機(jī)制以及流行趨勢目前尚不明確，既無可用的疫苗用于預(yù)防，又無有效的藥物用于治療，使疫情在很長時(shí)間內(nèi)雅以得到緩解，而中國巳有三種候選疫苗獲準(zhǔn)臨床fit件，給EV7I感染的成功預(yù)防帶來了希望。當(dāng)前EV71研究己取得了一定進(jìn)展，今后仍需進(jìn)一步加強(qiáng)對EV71致病機(jī)

25、理，尤其是中樞神經(jīng)系統(tǒng)致病機(jī)理的研究病毒受體研究的基礎(chǔ)上建立理想的動物模型，為抗病毒藥物的開發(fā)以及疫苗效果的評價(jià)提供條件強(qiáng)流行病學(xué)研究，建立完善的監(jiān)測系統(tǒng)，及時(shí)了解病毒基因的變異情況，外，還應(yīng)加強(qiáng)公共衛(wèi)生條件的改善以及預(yù)防知識的宣傳，這將對預(yù)防和治療EV71感染具有重大意義考文獻(xiàn)：D1SdimidoNJ.?ntpptra>6|noEisihidironpwiaiCKwi1idixzucofA<2cxKralncriois;?5'>6taij.J再feu5Dis1974,129:304-309.DTomSolmon.PciinyLs&tideVk>電，岐.

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