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1、食品中抗生素殘留危害及檢測(cè)方法隨著人們生活質(zhì)量的提高,食品安全問(wèn)題越來(lái)越為廣大消費(fèi)者所關(guān)注,特別是農(nóng)藥和抗生素等藥物殘留問(wèn)題更是廣大消費(fèi)者所關(guān)注的焦點(diǎn)問(wèn)題。在食品安全這個(gè)全球關(guān)注的熱點(diǎn)問(wèn)題上,如何快速、準(zhǔn)確地檢測(cè)食品安全的問(wèn)題已成為重中之重。 要檢測(cè)抗生素在食品中的殘留, 必須選擇特異性強(qiáng)、靈敏度高、高效快速的檢測(cè)方法。因此,研究各種抗生素類殘留檢測(cè)的 方法,提高其靈敏度與選擇性具有十分重要的意義??股鼐哂心男┪:θ藗兂粤擞锌股貧埩舻娜?、蛋、奶等食物后,會(huì)造成抗生素在人體內(nèi)蓄積,使人產(chǎn)生對(duì)抗生素的抗性,引起各種組織器官病變,甚至癌變。對(duì)人類健康的危害對(duì)人體腸道菌群的影響人體腸道菌群是一個(gè)平
2、衡的生態(tài)系統(tǒng),對(duì)保持人體健康起著非常重要的作用。如果人們長(zhǎng)期攝入含有抗生素的食品后,會(huì)使敏感菌群被殺滅或抑制,而耐藥菌群卻大量繁殖, 從而打破原來(lái)的平衡狀態(tài)造成菌群失調(diào),這就可能會(huì)導(dǎo)致長(zhǎng)期腹瀉或營(yíng)養(yǎng)不良,嚴(yán)重時(shí)還可造成耐藥菌感染,給臨床治療帶來(lái)困難。引起過(guò)敏和變態(tài)反應(yīng)青霉素、四環(huán)素、磺胺類及某些氨基糖昔類抗生素能使部分人群發(fā)生過(guò)敏反應(yīng)和變態(tài)反應(yīng),氯霉素可破壞機(jī)體造血功能,誘發(fā)再生障礙性貧血。經(jīng)常食用含抗生素的動(dòng)物性食品,輕者出現(xiàn)皮膚瘙癢、尊麻疹、關(guān)節(jié)腫痛,重者導(dǎo)致血管性水腫、休克、甚至死亡。導(dǎo)致細(xì)菌耐藥性增加目前,由于抗生素的廣泛使用, 使得細(xì)菌的耐藥性不斷增加, 食用含抗生素殘留的動(dòng)物性食品
3、后,人體內(nèi)細(xì)菌的耐藥性增加。 同時(shí),動(dòng)物體內(nèi)的耐藥性菌株的耐藥性也可能轉(zhuǎn)移到人體細(xì)菌中,從而對(duì)人類產(chǎn)生極大的危害。其他毒害作用動(dòng)物性食品中殘留的鏈霉素進(jìn)入人體后可引起腎損害和聽(tīng)神經(jīng)受損。長(zhǎng)期攝入氨基糖昔類抗生素殘留嚴(yán)重超標(biāo)的動(dòng)物性食品,可損害第8對(duì)腦神經(jīng),出現(xiàn)頭暈、頭痛、耳鳴、耳聾、惡心、嘔吐等癥狀。四環(huán)素會(huì)引起肝損傷,與骨骼或牙齒中的鈣質(zhì)結(jié)合后,使骨骼及牙齒黃染,還可影響兒童的生長(zhǎng)發(fā)育。鄰氯青霉素、頭抱菌素等可引起人類免疫性疾??;氯霉素會(huì)損害人的造血功能,抑制蛋白質(zhì)摘要:文章綜述了抗生素殘留的來(lái)源與途徑,介紹了抗生素殘留對(duì)人類健康、乳制品生產(chǎn)、環(huán)境及其他方面造成的危害,分析了檢測(cè)抗生素殘留的
4、方法,包括微生物檢測(cè)法、儀器檢驗(yàn)法、免疫學(xué)分析法等,并指出了這些檢測(cè)方法的研究現(xiàn)狀與發(fā)展前景。對(duì)乳制品生產(chǎn)工藝的危害由于含有抗生素的奶無(wú)法制成酸奶、奶酪等一些高質(zhì)量牛奶產(chǎn)品,容易造成大量原料奶的浪費(fèi),給乳品企業(yè)造成經(jīng)濟(jì)損失。另一方面,一些不法奶戶在高溫季節(jié)為防止鮮乳的酸敗,往往向牛乳中摻雜各種抗生素,從而造成乳中抗生素殘留,對(duì)人體也造成了很大的危害。對(duì)環(huán)境的危害一些性質(zhì)穩(wěn)定的藥物被排泄到環(huán)境中仍能穩(wěn)定存在很長(zhǎng)時(shí)間,從而造成環(huán)境中的藥物殘留。鏈霉素、土霉素在環(huán)境中不易降解;螺旋霉素低濃度降解很快,但濃度高時(shí)需6個(gè)月才能降解完;桿菌肽鋅在有氧的條件下完全降解需34個(gè)月,在無(wú)氧環(huán)境中降解所需要的時(shí)間
5、更長(zhǎng)。據(jù)報(bào)道,動(dòng)物養(yǎng)殖場(chǎng)污水處理池中紅霉素、復(fù)紅霉素、磺胺甲陛質(zhì)量濃度可達(dá) 69g/L ,這些藥物的排放污染了環(huán)境,破壞了生態(tài)平衡??股貧埩袅康臋z測(cè)方法隨著社會(huì)的進(jìn)步和人們對(duì)抗生素殘留的日益重視,在客觀上就要求改進(jìn)傳統(tǒng)的檢測(cè)方法。引進(jìn)先進(jìn)的檢測(cè)儀器,尋求一種快速、精確的檢測(cè)方法,使得檢測(cè)結(jié)果更加準(zhǔn)確、可靠。微生物檢測(cè)方法微生物檢測(cè)方法的主要原理是根據(jù)抗微生物藥對(duì)特異微生物的抑制作用,來(lái)定性或定量檢測(cè)受檢樣品中殘留的抗微生物藥。 微生物檢測(cè)法應(yīng)用較為廣泛, 是抗生素殘留檢測(cè)的傳統(tǒng)方法, 但測(cè)定時(shí)間長(zhǎng),結(jié)果誤差較大,操作復(fù)雜。其優(yōu)點(diǎn)是費(fèi)用低,一般實(shí)驗(yàn)室都能操作。氯化三苯四氮唾法(TTC)這是目前
6、我國(guó)食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)中用來(lái)檢查牛乳中抗生素殘留的檢測(cè)方法。如果牛乳中有抗生素存在,當(dāng)乳中加入菌種(嗜熱鏈球菌)經(jīng)培養(yǎng)后,菌種不增殖。此時(shí),加入的TTC指示劑不發(fā)生還原反應(yīng),所以仍呈無(wú)色狀態(tài)。 如果沒(méi)有抗生素存在, 則加入菌種就可增殖,TTC還 原變成紅色,使樣品染成紅色。棉拭法或紙片法這是檢測(cè)胴體內(nèi)可疑抗生素殘留的現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)方法,簡(jiǎn)便而又有一定準(zhǔn)確性,被世界普遍采用,具有廣域的靈敏性。它是用棉拭插入待檢部位浸潤(rùn)20min取出,放入有枯草桿菌的培養(yǎng)基中培養(yǎng)18h24 h ,或用圓濾紙從腎臟或乳取樣,與含有枯草桿菌等細(xì)菌的營(yíng)養(yǎng)瓊脂貼合培養(yǎng),通過(guò)觀察棉拭周圍有無(wú)抑菌圈或根據(jù)其大小判定有無(wú)抗菌物質(zhì)存在。該法
7、的特點(diǎn)是能夠確定抗生素的種類,提高檢出率和準(zhǔn)確率。如,氯霉素最低檢出限量為0.01mg/kg 、土霉素為0.05mg/kg 等。杯蝶法樣品經(jīng)處理后,注入牛津杯中,與含菌液的檢定平板貼合。培養(yǎng)后,根據(jù)抑菌圈的有無(wú)及大小判定結(jié)果。采用不同的試驗(yàn)菌種, 可檢測(cè)不同的抗生素。 如檢測(cè)肉中四環(huán)素類抗生素用蠟樣芽胞桿菌;檢測(cè)青霉素用金黃色葡萄球菌;檢測(cè)鏈霉素或雙氫鏈霉素用枯草桿菌。電泳生物檢測(cè)法該法靈敏度較高。Fusac (1989 )應(yīng)用電泳和微生物自顯影技術(shù)測(cè)定動(dòng)物組織中殘留的氨基糖昔類抗生素(如,雙氫鏈霉素、卡那霉素等),取得了滿意的結(jié)果。瓊脂擴(kuò)散法Korkela以豬腎為樣品采用瓊脂擴(kuò)散法對(duì)幾種抗生
8、素殘留檢測(cè)進(jìn)行了比較。能檢測(cè)出土霉素和鏈霉素的殘留。Untermann (1986 )報(bào)道,采用枯草桿菌進(jìn)行瓊脂擴(kuò)散法檢測(cè)出了牛、豬及山羊的肌肉中和腎臟內(nèi)抗生素的殘留。儀器檢驗(yàn)方法儀器檢驗(yàn)方法是利用抗生素分子中的基團(tuán)所具有的特殊反應(yīng)或性質(zhì)來(lái)測(cè)定其含量,進(jìn)行定性士旦和藥劑鑒定。其敏感性較高,但有的檢測(cè)程序較復(fù)雜或檢測(cè)費(fèi)用較高。液相色譜法(LC)德國(guó)Russel報(bào)道了液相色譜法檢測(cè)氯霉素殘留,檢測(cè)PM為10聞/kg,回收率為63%79%。Jefery等(1994 )報(bào)道了用LC法測(cè)定沙拉沙星在海峽魚占魚肌肉中的殘留,沙拉沙星的檢測(cè)限為1.4ng/g ,回收率為85.4 %104 %。氣相色譜法(G
9、C)該法有許多高靈敏、通用性或?qū)R恍詮?qiáng)的檢測(cè)器供選用。Plomp和Maes報(bào)道了在血液和羊水中甲碉霉素的快速氣相色譜檢測(cè)方法,檢測(cè)PM為0.1四/mL ,甲碉霉素血清的回收率為91.3%,羊水的回收率為 90.3%。.薄層色譜法(TLC)該法經(jīng)常作為樣品篩選方法。其優(yōu)點(diǎn)是速度快,有利于現(xiàn)場(chǎng)應(yīng)用,且已在飼料、組織和體液等的分析中得到了廣泛的應(yīng)用。Bossuyt等( 1976 )報(bào)道用TLC法測(cè)定牛奶中新霉素的殘留。但新霉素的檢測(cè)限為15聞/g ,遠(yuǎn)高于牛奶中的新霉素殘留限量。高效薄層色譜法(HPTLC )該法現(xiàn)已成為僅次于 HPLC的殘留分析法。HPTLC在獸藥殘留的快速篩選檢測(cè)方面應(yīng)用廣泛。測(cè)
10、定組織樣品時(shí)需在樣品展開(kāi)后噴以硫酸-高氯酸試液,靈敏度可提高 10倍,檢測(cè)限達(dá)10闖/kg 。高效液相色譜法(HPLC )這是目前廣泛應(yīng)用的一種理化檢測(cè)方法。該法對(duì)抗生素殘留的檢測(cè)具有較高的靈敏性。Anadan等( 1995 )報(bào)道了用HPLC法測(cè)定雞脂肪、肝臟、腎臟、肺臟及皮膚中恩諾沙星及代謝產(chǎn)物環(huán)丙沙星濃度,檢測(cè)限為0.003 闖/g ,在各種組織中提取回收率均大于70%。Rolinski等(1997 )用HPLC法檢測(cè)了肉雞組織和雞蛋中諾氟沙星殘留,檢測(cè)限為0.0025聞/g。超臨界流體色譜法(SFC)該法可彌補(bǔ)GC和HPLC法的不足,但不可能取代二者。SFC最大優(yōu)點(diǎn)是可以方便地連接各種
11、靈敏的檢測(cè)器。Pensabene等將雞蛋樣品進(jìn)行超臨界流體萃取后進(jìn)行磺胺類藥物的殘留分析,檢測(cè)限為 25聞/kg ,回收率為81 %101% 。毛細(xì)管電泳法(CE)Ackermans等將豬肉樣品加乙睛提取,離心后上清液過(guò)濾膜后直接進(jìn)行毛細(xì)管區(qū)帶電泳分 析。測(cè)出肉樣中15種磺胺類藥物的檢測(cè)限在 2 mg/kg9mg/kg 的范圍內(nèi)。聯(lián)用技術(shù)聯(lián)用技術(shù)可揚(yáng)長(zhǎng)避短,一般兼分離、定量和定性(分子結(jié)構(gòu)信息)于一體,因而特別適用于確證性分析。常見(jiàn)的聯(lián)用技術(shù)有薄層色譜-質(zhì)譜(TLC-MS、氣相色譜-質(zhì)譜(GC-MS、液相色譜-質(zhì)譜(LC-M9等。色譜和質(zhì)譜聯(lián)用由于實(shí)現(xiàn)了高效層析分離和檢測(cè)聯(lián)機(jī),可用微 電腦控制
12、層析條件、程序和數(shù)據(jù)處理,其特異性、靈敏度和重復(fù)性均好,并可一次同時(shí)完成同一樣本中多種藥物及其代謝物的檢測(cè)。免疫分析法免疫分析法主要有放射免疫分析(RIA)、酶免疫分析(EIA)、熒光免疫分析(FIA)和酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)。與常規(guī)的理化分析技術(shù)相比,免疫分析技術(shù)最突出的優(yōu)點(diǎn)是操作 簡(jiǎn)單、容量大、速度快、儀器化程度低且分析成本低,分析效率則為HPLC或GC的幾十倍以上。免疫分析法能與其他技術(shù)聯(lián)用。放射免疫分析(RIA)Mahon等曾將卡那霉素與人血清白蛋白直接連接制備結(jié)合抗原,并建立了血清樣品的放射 免疫測(cè)定法,檢測(cè)限為10 ng/mLo 1984 年Arnold等即建立了氯霉素的放射免疫測(cè)定法,其檢測(cè)限為0.21科g/kg。酶聯(lián)免疫吸附
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