儀器分析小結(jié)new

1、一、基礎(chǔ)內(nèi)容（一）緒論儀器分析使用較特殊儀器，以物質(zhì)的物理或物理化學(xué)性質(zhì)為基礎(chǔ)的分析方法，分為物理分析法和物理化學(xué)分析法，具有靈敏、快速、準(zhǔn)確的特點(diǎn)。物理分析法根據(jù)物質(zhì)的某些物理性質(zhì)，如旋光度、光譜特征、相對(duì)密度等，不經(jīng)化學(xué)反應(yīng)直接進(jìn)行定性、定量、結(jié)構(gòu)和形態(tài)分析的方法。物理化學(xué)分析法根據(jù)物質(zhì)在化學(xué)變化中的某些物理性質(zhì)，進(jìn)行定性分析或定量分析的方法。（二）電位分析法電化學(xué)研究化學(xué)反應(yīng)中的電現(xiàn)象，電能與化學(xué)能的相互轉(zhuǎn)化及其規(guī)律的學(xué)科.電化學(xué)分析利用物質(zhì)的電學(xué)及電化學(xué)性質(zhì)來(lái)進(jìn)行物質(zhì)定性和定量分析的一類(lèi)分析方法，也就是通過(guò)測(cè)量工作電池的電參數(shù)（電壓、電流、電量、電阻、電容）的變化從而確定樣品溶液的濃度

2、、化學(xué)反應(yīng)進(jìn)行的程度或者直接稱定電極上產(chǎn)物的重量，對(duì)樣品溶液中待測(cè)組分定性、定量分析的一類(lèi)方法。電位分析法將合適的指示電極與參比電極插入被測(cè)溶液中組成原電池，通過(guò)測(cè)定電池電動(dòng)勢(shì)或指示電極電位的變化進(jìn)行分析的方法，分為直接電位法和電位滴定法。電位滴定法（間接電位法）用指示電極電位的突變來(lái)指示滴定反應(yīng)終點(diǎn)的容量分析方法?；瘜W(xué)電池由二個(gè)（相同的或不相同的）電極插入電解質(zhì)溶液中組成的裝置，分為原電池和電解池。原電池電極反應(yīng)可以自發(fā)進(jìn)行，化學(xué)能被轉(zhuǎn)換為電能，化學(xué)體系的自由能降低。電解池電極反應(yīng)不能自發(fā)進(jìn)行，當(dāng)有適當(dāng)?shù)耐饧与妷簳r(shí)，電極反應(yīng)才可以進(jìn)行，電能被轉(zhuǎn)換為化學(xué)能，化學(xué)體系的自由能增加。電極電位電極與

3、溶液間的電位差。標(biāo)準(zhǔn)電極電位298K，氧化態(tài)和還原態(tài)的活度為1mol·L-1時(shí)測(cè)得的電池電動(dòng)勢(shì)（電位）。（三）光學(xué)分析導(dǎo)論光學(xué)分析法基于物質(zhì)發(fā)射的電磁輻射或物質(zhì)與輻射相互作用后產(chǎn)生的輻射或發(fā)生信號(hào)變化來(lái)測(cè)定物質(zhì)的性質(zhì)、含量和結(jié)構(gòu)的一類(lèi)儀器分析方法。分為光譜法和非光譜法，包括三個(gè)過(guò)程：1.能源提供能量；2.能量與物質(zhì)作用；3.產(chǎn)生被檢測(cè)信號(hào)。電磁輻射一種以光速通過(guò)空間而不需要任何物質(zhì)作為傳播媒介的光（量）子流。光是一種電磁輻射，具有波粒二象性。電磁波譜電磁輻射按波長(zhǎng)順序排列，包括從射線到無(wú)線電波。光譜法物質(zhì)與輻射能作用時(shí)，測(cè)量由物質(zhì)內(nèi)部發(fā)生量子化的能級(jí)之間的躍遷而產(chǎn)生的發(fā)射、吸收或散射

4、輻射的波長(zhǎng)和強(qiáng)度進(jìn)行分析的方法。分為原子光譜法和分子光譜法。物質(zhì)分子中存在一系列電子能級(jí)，而每個(gè)電子能級(jí)中又包含一系列的振動(dòng)和轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)。吸收光譜法利用物質(zhì)吸收光后所產(chǎn)生的吸收光譜來(lái)進(jìn)行分析的方法。產(chǎn)生的必要條件是所提供的輻射能量恰好滿足該吸收物質(zhì)兩能級(jí)間躍遷所需的能量。M+ hn ¾®M*發(fā)光光譜法（發(fā)射光譜法）物質(zhì)中的粒子用一定的能量（如光、電、熱等）激發(fā)到高能級(jí)后，當(dāng)躍遷回低能級(jí)時(shí)，便產(chǎn)生出特征的發(fā)射光譜，利用此發(fā)射光譜進(jìn)行分析的方法。M* ¾® M+ hn散射光譜法利用物質(zhì)對(duì)光的散射來(lái)進(jìn)行分析的方法。原子光譜法以測(cè)量氣態(tài)原子或離子外層或內(nèi)層電子能級(jí)

5、躍遷所產(chǎn)生的原子光譜（表現(xiàn)形式為線光譜）進(jìn)行分析的方法。包括：原子發(fā)射光譜法（AES）、原子吸收光譜法（AAS），原子熒光光譜法（AFS）、X射線熒光光譜法（XFS）等。分子光譜法基于分子中電子能級(jí)、振動(dòng)和轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)的變化產(chǎn)生的光譜（表現(xiàn)形式為帶光譜）進(jìn)行分析的方法。包括：紫外-可見(jiàn)分光光度法（UV-Vis）、紅外光譜法（IR）、分子熒光光譜法（MFS）、分子磷光光譜法（MPS）等。線狀光譜由若干條強(qiáng)度不同的譜線和暗區(qū)相間而成的光譜。帶狀光譜由幾個(gè)光帶和暗區(qū)相間而成的光譜。連續(xù)光譜在一定范圍內(nèi)各種波長(zhǎng)的光都有，且連續(xù)不斷，無(wú)明顯的譜線和譜帶。非光譜法物質(zhì)與輻射相互作用時(shí)，測(cè)量輻射的某些性質(zhì)，如折

6、射、散射、干涉、衍射、偏振等變化的分析方法。分光光度計(jì)（光譜儀）用來(lái)研究吸收、發(fā)射或熒光的電磁輻射強(qiáng)度和波長(zhǎng)關(guān)系的儀器，包括五部分：光源、單色器、樣品容器、檢測(cè)器和讀出器件。（四）紫外-可見(jiàn)光分光光度法單色光具有相同能量（相同波長(zhǎng)）的光?；旌瞎猓◤?fù)合光）具有不同能量（不同波長(zhǎng)）的光復(fù)合在一起?；パa(bǔ)色：max（最大吸收波長(zhǎng)）吸收曲線中，吸光度最大處的波長(zhǎng)，是定性鑒別物質(zhì)的基礎(chǔ)。吸收曲線以波長(zhǎng)為橫坐標(biāo)，吸光度A為縱坐標(biāo)作圖所得曲線。光吸收具有選擇性和加和性。（五）紅外吸收光譜法紅外光譜又稱為分子振動(dòng)轉(zhuǎn)動(dòng)光譜，當(dāng)樣品受到頻率連續(xù)變化的紅外光照射時(shí)，分子吸收某些頻率的輻射，并由其振動(dòng)運(yùn)動(dòng)或轉(zhuǎn)動(dòng)運(yùn)動(dòng)引起

7、偶極矩的凈變化，產(chǎn)生的分子振動(dòng)和轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)從基態(tài)到激發(fā)態(tài)的躍遷，從而形成的分子吸收光譜。一般指有機(jī)物質(zhì)在4000400cm-1紅外線的照射下，選擇性的吸收其中某些頻率后，用紅外光譜儀記錄所形成的吸收譜帶。特點(diǎn)：1）紅外吸收只有振-轉(zhuǎn)躍遷，能量低；2）應(yīng)用范圍廣；3）分子結(jié)構(gòu)更為精細(xì)的表征；4）固、液、氣態(tài)樣均可用，且用量少、不破壞樣品；6）分析速度快；7）與色譜等聯(lián)用具有強(qiáng)大的定性功能。紅外活性分子產(chǎn)生紅外吸收的分子，如非對(duì)稱分子。反之為非紅外活性分子，如對(duì)稱分子。伸縮振動(dòng)原子沿鍵軸方向伸縮，鍵長(zhǎng)發(fā)生變化而鍵角不變的振動(dòng)。分為對(duì)稱伸縮振動(dòng)(s)和不對(duì)稱伸縮振動(dòng)(as)。變形振動(dòng)()又稱彎曲振動(dòng)或

8、變角振動(dòng)，基團(tuán)鍵角發(fā)生周期變化而鍵長(zhǎng)不變的振動(dòng)。分為面內(nèi)變形振動(dòng)和面外變形振動(dòng)。產(chǎn)生吸收峰的條件 ：只有偶極矩大小或方向有一定改變的振動(dòng)才能吸收紅外光而發(fā)生振動(dòng)能級(jí)躍遷。線性分子具有3n-5種振動(dòng)方式，非線性分子有3n-6種。產(chǎn)生紅外光譜的兩個(gè)條件： 1輻射應(yīng)具有能滿足物質(zhì)產(chǎn)生振動(dòng)躍遷所需的能量； 2輻射與物質(zhì)間有相互偶合作用。紅外光譜三要素：峰位、峰強(qiáng)、峰形。紅外譜帶位移影響因素： 1.誘導(dǎo)效應(yīng)與共軛效應(yīng) 2.鍵應(yīng)力效應(yīng)（張力效應(yīng)） 3.空間效應(yīng) 4.氫鍵效應(yīng) 5.振動(dòng)偶合與費(fèi)米共振 6.物態(tài)變化 7.溶劑影響紅外光譜的最大特點(diǎn)是具有特征性。基團(tuán)頻率與一定的結(jié)構(gòu)單元相聯(lián)系的振動(dòng)頻率。（六）核

9、磁共振波譜法核磁共振定量分析的基礎(chǔ)是結(jié)構(gòu)分析。優(yōu)點(diǎn)：定性測(cè)定不具有破壞性，定量測(cè)定不需標(biāo)樣，靈敏度、精確度、準(zhǔn)確度及分析速度高。核磁共振譜定量分析的基礎(chǔ)：各化學(xué)環(huán)境不同的質(zhì)子吸收蜂的面積，只與所包含的質(zhì)子數(shù)有關(guān)，可直接根據(jù)各共振峰積分值的比值推算所代表的各自旋核的數(shù)量。NMR定量方法：1、要求： 1.被測(cè)物質(zhì)的結(jié)構(gòu)必須是已知； 2.核磁共振譜線已歸屬； 3.理想的被測(cè)信號(hào)是多個(gè)質(zhì)子的單蜂； 4.信號(hào)兩端的基線位置一致； 5.每一信號(hào)需進(jìn)行5次積分，取平均值。2、分類(lèi)： 1.內(nèi)標(biāo)絕對(duì)測(cè)定法常用內(nèi)標(biāo)：六甲基環(huán)三硅氧烷和六甲基環(huán)三硅胺 2.外標(biāo)絕對(duì)測(cè)定法樣品和外標(biāo)分別放置在兩只核磁管中測(cè)定，二管直徑

10、必須相同，最好使用同一支樣品管。樣品和外標(biāo)必須交叉重復(fù)測(cè)定以提高分析的準(zhǔn)確性。 3.相對(duì)含量測(cè)定法被測(cè)樣品是由若干已知化合物組成，如果沒(méi)有合適的內(nèi)標(biāo)化合物時(shí)，可采用以其中一個(gè)組分做“標(biāo)樣”。 4.峰高定量法通過(guò)求出樣品中某組質(zhì)子的峰高，求出樣品的含量。峰高與自旋-自旋弛豫常數(shù)有關(guān)，而后者與化合物的類(lèi)型有關(guān)，受局部磁場(chǎng)的影響，故不能直接用于定量。被積信號(hào)過(guò)于接近而無(wú)法準(zhǔn)確測(cè)定各質(zhì)子峰積分面積時(shí)，可考慮用峰高法進(jìn)行定量分析，通過(guò)實(shí)驗(yàn)求出峰高與含量之間的關(guān)系，校正誤差。（七）質(zhì)譜法質(zhì)譜儀：進(jìn)樣系統(tǒng)、離子源、質(zhì)量分析器、檢測(cè)器、計(jì)算機(jī)系統(tǒng)藥用植物中的組分提取分析： 低極性組分GC-MS 大極性組分、生

11、物大分子HPLC-MS蛋白質(zhì)測(cè)定：基質(zhì)輔助激光解吸/電離飛行時(shí)間質(zhì)譜（MALDI-TOF MS） 、電噴霧質(zhì)譜（ESI-MS）。蛋白質(zhì)分子量測(cè)定： 1、多肽與蛋白質(zhì)的ESI-MS分析采用正離子方式進(jìn)行，ESI-MS可以產(chǎn)生多電荷離子峰使檢測(cè)的分子質(zhì)量范圍擴(kuò)大。 2、ESI-MS得到的是一簇多電荷的質(zhì)譜峰群，相鄰兩簇質(zhì)譜峰之間電荷數(shù)差1。 3、P=(Mr+MaZ)ZP：多電荷離子質(zhì)荷比，Mr：蛋白質(zhì)分子量，Ma：正離子分子量（來(lái)源為氫時(shí)，Ma=1.0079），Z：多電荷離子帶電量故，Mr=(P-Ma)Z=(P-1)Z 4、高分辨質(zhì)譜求電荷數(shù)：Z=1P-P'，P、P：相鄰?fù)凰胤宓馁|(zhì)荷比蛋

12、白質(zhì)鑒定：肽質(zhì)量指紋譜+基于串聯(lián)質(zhì)譜多肽測(cè)序肽質(zhì)量指紋譜(PMF)蛋白質(zhì)的氨基酸序列經(jīng)酶解為肽段序列，所測(cè)得的肽混合物質(zhì)量數(shù)即稱為肽質(zhì)量指紋譜。（八）熒光分析法熒光分光光度法利用物質(zhì)的熒光光譜進(jìn)行定性定量分析方法。振動(dòng)弛豫同一電子能級(jí)電子通過(guò)與溶劑分子碰撞從高的振動(dòng)能級(jí)返回到最低的振動(dòng)能級(jí)。躍遷的能量轉(zhuǎn)移方式：1、振動(dòng)弛豫，2、內(nèi)部能量轉(zhuǎn)移（內(nèi)轉(zhuǎn)換），3、熒光發(fā)射，4、外部能量轉(zhuǎn)移（外轉(zhuǎn)換），5、體系間跨越，6、磷光發(fā)射。其中，2、3、4、6可使激發(fā)態(tài)回到基態(tài)。激發(fā)態(tài)分子與溶劑分子及其它溶質(zhì)分子之間相互碰撞而失去能量（常以熱能的形式放出），這種不同物質(zhì)間的能量轉(zhuǎn)移引起熒光淬滅（熄滅）。熒光熄滅

13、指熒光物質(zhì)分子與溶劑分子或溶質(zhì)分子相互作用，引起熒光強(qiáng)度降低的現(xiàn)象。熒光熄滅劑引起熒光熄滅的物質(zhì)。磷光經(jīng)過(guò)體系間跨越的分子降至三線態(tài)最低能級(jí)，躍遷至基態(tài)而發(fā)生的光。不同強(qiáng)度、不同波長(zhǎng)的激發(fā)光不影響（同一物質(zhì)的）熒光光譜：電子都從第一電子激發(fā)態(tài)的最低振動(dòng)能層返回到基態(tài)的各個(gè)振動(dòng)能層。Stokes位移熒光波長(zhǎng)大于激發(fā)光波長(zhǎng)的現(xiàn)象。說(shuō)明在激發(fā)和（熒光）發(fā)射之間存在一定的能量損失。產(chǎn)生原因：振動(dòng)馳豫、內(nèi)轉(zhuǎn)換熒光壽命當(dāng)除去激發(fā)光源后，分子的熒光強(qiáng)度降低到激發(fā)時(shí)最大熒光強(qiáng)度的1/2所需的時(shí)間稱熒光壽命，常用f表示。熒光效率激發(fā)態(tài)分子發(fā)射熒光的光子數(shù)與基態(tài)分子吸收激發(fā)光的光子數(shù)之比。熒光熄滅法利用熒光強(qiáng)度的

14、減小與熒光熄滅劑的濃度呈線性關(guān)系來(lái)進(jìn)行測(cè)定含量的方法。熒光產(chǎn)生的兩個(gè)條件： 1.分子必須具有與所照射的輻射頻率相適應(yīng)的結(jié)構(gòu)，才能吸收激發(fā)光； 2.必須具有一定的熒光效率。激發(fā)光譜與熒光光譜（發(fā)射光譜）的關(guān)系： 1.Stokes紅移 2.互為鏡像 3.熒光光譜形狀與激發(fā)光波長(zhǎng)無(wú)關(guān) 4.熒光強(qiáng)度與激發(fā)光波長(zhǎng)有關(guān)熒光強(qiáng)度影響因素： 溶劑（極性、粘度，強(qiáng)度） 溫度（溫度，強(qiáng)度） pH（影響離解） 熒光淬滅 散射（干擾）提高檢測(cè)精度：1、改善散射光因素影響：溶液透明，選擇合適測(cè)定波長(zhǎng)。2、選擇合適的溶劑、溫度、酸堿度。定量分析方法：1、工作曲線法；2、比例法；3、聯(lián)立方程式法（多組分）紫外-可見(jiàn)光法也有

15、工作曲線法和聯(lián)立方程式法，兩者也都有單波長(zhǎng)和雙波長(zhǎng)法。（九）原子吸收分光光度法原子吸收分光光度法根據(jù)蒸氣相中被測(cè)元素的基態(tài)原子對(duì)特征輻射的吸收來(lái)測(cè)定試樣中該元素含量的方法。分為火焰原子吸收法和石墨爐原子吸收法。準(zhǔn)確度、靈敏度高，選擇性好，抗干擾性強(qiáng)，適用范圍廣，但工作曲線范圍窄，通常每測(cè)定一種元素要使用一種元素?zé)簦褂貌槐?，且?duì)難溶元素和多種元素的測(cè)定尚存在困難。原子能級(jí)：原子有原子核和核外電子組成，核外電子按照一定規(guī)律排列在一定軌道繞核運(yùn)動(dòng)，由于不同軌道的能級(jí)不同，所以每個(gè)電子的能量也由它所處的能級(jí)所決定的，意即不同能量的電子發(fā)生躍遷時(shí)所需的激發(fā)能是不一樣的。不同能級(jí)間的能量差不同且量子化；

16、原子的吸收光譜由原子最外層電子的躍遷所產(chǎn)生的。線系原子由基態(tài)向激發(fā)態(tài)躍遷時(shí)，因?yàn)榭梢攒S遷到不同的能級(jí)而產(chǎn)生的一系列吸收曲線。所有原子光譜線中，由基態(tài)向第一激發(fā)態(tài)躍遷所產(chǎn)生的線最強(qiáng)，也最易發(fā)生。由于不同元素原子由基態(tài)向第一激發(fā)態(tài)躍遷所需能量不同，因而這種共振線也各具特征，稱為第一共振吸收線，也稱為元素的特征譜線。UV-Vis分光光度計(jì)：連續(xù)光源單色器吸收池檢測(cè)器AAS分光光度計(jì)：銳線光源原子化器單色器檢測(cè)器原子化過(guò)程被測(cè)元素由試樣轉(zhuǎn)入氣相，并轉(zhuǎn)化為基態(tài)原子的過(guò)程。包括火焰原子化法（常用為乙炔-空氣火焰）和非火焰原子化法（最常用的是管式石墨爐原子化器）兩種方法。定量分析方法：1、校正曲線法；2、標(biāo)

17、準(zhǔn)加入法；3、內(nèi)標(biāo)法（十）色譜法導(dǎo)論色譜法是一種重要的分離分析方法，它是根據(jù)組分與固定相和流動(dòng)相的作用力不同而達(dá)到分離目的。色譜流出曲線或色譜圖樣品注入色譜柱后，信號(hào)隨時(shí)間變化的曲線?；€實(shí)驗(yàn)條件下，樣品加入色譜柱后僅有純流動(dòng)相進(jìn)入檢測(cè)器時(shí)的流出曲線，反映了S/N（信噪比）大小的穩(wěn)定性的水平直線。峰高色譜峰頂點(diǎn)與基線的距離。保留值：1、死時(shí)間(t0 )不與固定相作用的物質(zhì)從進(jìn)樣到出現(xiàn)峰極大值時(shí)的時(shí)間，與色譜柱的空隙體積成正比。流動(dòng)相平均流速： u=Lt0，L為柱長(zhǎng)2、保留時(shí)間(tR )試樣從進(jìn)樣到出現(xiàn)峰極大值時(shí)的時(shí)間。包括組份隨流動(dòng)相通過(guò)柱子的時(shí)間t0和組份在固定相中滯留的時(shí)間。保留時(shí)間為色譜

18、定性依據(jù)，但同一組份的保留時(shí)間還與流速有關(guān)，因此有時(shí)需用保留體積來(lái)表示保留值。3、調(diào)整保留時(shí)間(tR )某組份的保留時(shí)間扣除死時(shí)間后的時(shí)間，它是組份在固定相中的滯留時(shí)間。即tR = tR - t04、死體積(V0)色譜柱管內(nèi)固定相顆粒間空隙、色譜儀管路和連接頭間空隙和檢測(cè)器間隙的總和。V0=t0Fco，F(xiàn)co：柱出口的載氣流速(ml/min)5、保留體積(VR)從進(jìn)樣到待測(cè)物在柱后出現(xiàn)濃度極大點(diǎn)時(shí)所通過(guò)的流動(dòng)相的體積。6、調(diào)整保留體積(VR)某組份的保留體積扣除死體積后的體積。即VR = VR - V07、相對(duì)保留值(r2,1)組份2的調(diào)整保留值與組份1的調(diào)整保留值之比。r2,1只與柱溫和固定

19、相性質(zhì)有關(guān)，而與柱內(nèi)徑、柱長(zhǎng)、填充情況及流動(dòng)相流速無(wú)關(guān)，又稱選擇因子或者分離因子：反映兩組分間的分離情況，=1，則兩組分無(wú)法分離，而越大則分離越好。兩組分在兩相間的分配系數(shù)不同，是色譜分離的先決條件。區(qū)域?qū)挾龋?、標(biāo)準(zhǔn)偏差峰高0.607處的峰寬的一半。2、半峰寬W1/2峰高一半處的峰寬。3、峰（底）寬W色譜峰兩側(cè)拐點(diǎn)上切線與基線的交點(diǎn)間的距離。色譜流出曲線的意義： 色譜峰數(shù)樣品中單組份的最少個(gè)數(shù)； 色譜保留值定性依據(jù)； 色譜峰高或面積定量依據(jù)； 色譜保留值或區(qū)域?qū)挾壬V柱分離效能評(píng)價(jià)指標(biāo)； 色譜峰間距固定相或流動(dòng)相選擇是否合適的依據(jù)。分配系數(shù)K一定溫度與壓力下兩相達(dá)平衡后，組分在固定相和流動(dòng)相

20、濃度的比值。分配比（容量因子或者保留因子）k一定溫度與壓力下兩相達(dá)平衡后，組分在固定相和流動(dòng)相質(zhì)量的比值。塔板理論假定：1）塔板之間不連續(xù)；2）塔板之間無(wú)分子擴(kuò)散；3）組分在各塔板內(nèi)兩相間的分配瞬間達(dá)到平衡（達(dá)一次平衡所需柱長(zhǎng)為理論塔板高度H）；4）某組分在所有塔板上的分配系數(shù)相同；5）流動(dòng)相以不連續(xù)方式加入（以一個(gè)一個(gè)的塔板體積加入）。 當(dāng)塔板數(shù)n較少時(shí)，組分流出曲線呈峰形，但不對(duì)稱；當(dāng)塔板數(shù)n>50時(shí)，峰形接近正態(tài)分布。速率理論認(rèn)為：?jiǎn)蝹€(gè)組分粒子在色譜柱內(nèi)的運(yùn)動(dòng)是高度不規(guī)則的、隨機(jī)的，在柱中隨流動(dòng)相前進(jìn)的速度是不均一的。塔板理論研究的是平衡態(tài)，速率理論則從動(dòng)態(tài)角度出發(fā)，提出改變色譜條

21、件、控制流速、提高分離效率的理論。色譜分離條件選擇：1、兩組份峰間距足夠遠(yuǎn)：由各組份在兩相間的分配系數(shù)（k）決定，即由色譜過(guò)程的熱力學(xué)性質(zhì)決定。2、每個(gè)組份峰寬足夠?。河山M份在色譜柱中的傳質(zhì)和擴(kuò)散（H或n）決定，即由色譜過(guò)程動(dòng)力學(xué)性質(zhì)決定。（十一）氣相色譜法氣相色譜儀：載氣系統(tǒng)、進(jìn)樣系統(tǒng)、色譜柱系統(tǒng)、檢測(cè)系統(tǒng)、記錄系統(tǒng)固定液的選擇相似性原則；組分極性差別較大選用極性固定液，沸點(diǎn)差別較大選用非極性固定液。被分離物質(zhì)固定液主要作用力出峰順序非極性非極性色散力按沸點(diǎn)順序，沸點(diǎn)低者先出柱。相同沸點(diǎn)的極性組分先出。中等極性中等極性誘導(dǎo)力和色散力按沸點(diǎn)順序，沸點(diǎn)低者先出柱。相同沸點(diǎn)的極性組分后出。極性極性

22、靜電力按極性順序出柱，非極性組分先出柱。能形成氫鍵的試樣氫鍵型氫鍵力按形成氫鍵的能力大小出柱。常用檢測(cè)器濃度型熱導(dǎo)檢測(cè)器(TCD)有機(jī)和無(wú)機(jī)，適用范圍廣；一般氫氣作載氣，氮?dú)忪`敏度差電子捕獲檢測(cè)器(ECD)只對(duì)含有電負(fù)性強(qiáng)元素的物質(zhì)有響應(yīng)；氮?dú)庾鬏d氣質(zhì)量型氫焰離子化檢測(cè)器(FID)僅用于有機(jī)物檢測(cè)；氮?dú)庾鬏d氣，氫氣作燃?xì)?，空氣助燃流量關(guān)系一般為，N2:H2:Air為1:11.5:10火焰光度檢測(cè)器(FPD)氦氣熱離子化檢測(cè)器(TID)氦氣、氮?dú)馑俾世碚搼?yīng)用1、（A=2dp）減小A：粒度較細(xì)，顆粒均勻， 一般為6080目或80100目的填料。2、（B=2Dg）減小B：載氣線速度較低時(shí)用氮?dú)?，較高

23、時(shí)宜用氦氣或氫氣；較低的柱溫。（1）填充柱<1，空心毛細(xì)管柱1。（2）Dg與載氣的分子量的平方根成反比，隨柱溫升高而增大，隨柱壓增大而減小。3、減小C：固定相的液膜厚度要??；組分在液相中的擴(kuò)散系數(shù)要大。分離度R應(yīng)用1、增大k：峰間隔變大。2、增大n：峰寬變窄。色譜柱評(píng)價(jià)1、色譜柱效率峰尖評(píng)價(jià)：理論板高(H)、理論塔板數(shù)(n)對(duì)策：將Van Deemter 各因素優(yōu)化2、選擇性峰的分離度評(píng)價(jià)：分離因子或分離度(R)對(duì)策：選擇極性相當(dāng)?shù)墓潭ㄏ?、峰的對(duì)稱性吸附現(xiàn)象評(píng)價(jià)：拖尾因子(f)對(duì)策：色譜柱進(jìn)一步老化柱溫選擇原則：不超過(guò)固定液最高使用溫度；在良好分離前提下，盡可能采用低柱溫。柱長(zhǎng)選擇原則

24、：在達(dá)到一定分離度的條件下，應(yīng)使用盡可能短的柱。其他條件：1、氣化室溫度等于或稍高于試樣的沸點(diǎn)，不超過(guò)沸點(diǎn)50以上，高于柱溫3050。2、檢測(cè)室溫度高于或至少等于柱溫。3、進(jìn)樣速度快，試樣不超載。 定量分析的依據(jù)：在恒定的實(shí)驗(yàn)條件下，峰面積（或峰高）與組分的（含）量成正比。同一檢測(cè)器對(duì)不同物質(zhì)具有不同的響應(yīng)靈敏度。（需要校正）定量分析方法： 外標(biāo)法校正曲線法和外標(biāo)一點(diǎn)法 內(nèi)標(biāo)法校正曲線法和內(nèi)標(biāo)一點(diǎn)法氣相色譜與液相色譜的比較1、流動(dòng)相GC用氣體做流動(dòng)相（載氣），常用載氣（氮?dú)?、氦氣和氫氣）種類(lèi)少，可選擇范圍小，對(duì)分離影響??；LC中，流動(dòng)相種類(lèi)多，對(duì)分離結(jié)果貢獻(xiàn)大。2、固定相GC一般選定一種載氣，

25、然后通過(guò)改變色譜柱（固定相）以及操作參數(shù)（柱溫和載氣流速）來(lái)優(yōu)化分離；LC則往往是選定色譜柱后，通過(guò)改變流動(dòng)相的種類(lèi)、組成以及操作參數(shù)（柱溫）來(lái)優(yōu)化分離。3、分析對(duì)象GC分離的樣品可揮發(fā)且熱穩(wěn)定，沸點(diǎn)一般不超過(guò)450度。已知化合物中，有2025%可用GC直接分析，其余原則上可用LC分析。 4、檢測(cè)設(shè)備不同5、制備分離GC收集餾分后載氣很容易除去，原理上有優(yōu)勢(shì)，但由于其柱容量遠(yuǎn)不及LC，故實(shí)用價(jià)值很有限，而制備LC則有很廣泛的應(yīng)用。（十二）高效液相色譜法高效液相色譜法（HPLC）在經(jīng)典液相色譜法的基礎(chǔ)上，引入了氣相色譜法的理論和實(shí)驗(yàn)技術(shù)，以高壓輸送流動(dòng)相，采用高效固定相及高靈敏度檢測(cè)器，發(fā)展而成

26、的現(xiàn)代液相色譜分析方法。具有分離效率高、選擇性好、分析速度快、檢測(cè)靈敏度高、操作自動(dòng)化和應(yīng)用范圍廣的特點(diǎn)。（I）HPLC與經(jīng)典LC比較主要區(qū)別：固定相、輸液設(shè)備和檢測(cè)手段的差別1經(jīng)典LC：僅做為一種分離手段；柱內(nèi)徑13cm，固定相粒徑>100m且不均勻；常壓輸送流動(dòng)相；柱效低；分析周期長(zhǎng)；無(wú)法在線檢測(cè)。2、HPLC：可用于分離和分析；柱內(nèi)徑26mm，固定相粒徑<10m且均勻；高壓輸送流動(dòng)相，分析速度快；柱效高；采用高靈敏度檢測(cè)器，分析時(shí)間大大縮短；可以在線檢測(cè)。（II）HPLC與GC比較相同：兼具分離和分析功能，均可以在線檢測(cè) 區(qū)別：分析對(duì)象和流動(dòng)相的差別1、GC：分析可氣化、熱穩(wěn)

27、定性好且沸點(diǎn)較低的樣品；采用惰性氣體為流動(dòng)相，組分與流動(dòng)相無(wú)親合作用力，只與固定相作用；實(shí)驗(yàn)過(guò)程常需加溫。2、HPLC：分析樣品范圍廣，不受樣品揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的影響；流動(dòng)相為液體，種類(lèi)較多，選擇余地廣；一般常溫進(jìn)行。HPLC分類(lèi)：按固定相的聚集狀態(tài)分為液液色譜法（LLC）和液固色譜法（LSC）；按分離機(jī)制分為分配色譜法、吸附色譜法、離子交換色譜法、空間排阻色譜法；最常見(jiàn)的是化學(xué)鍵合相色譜法、離子抑制色譜法、離子對(duì)色譜法等，其他如親和色譜法、手性色譜法、膠束色譜法和電色譜法等。化學(xué)鍵合相色譜法以化學(xué)鍵合相為固定相的色譜法，適用于分離幾乎所有類(lèi)型的化合物，是應(yīng)用最廣的色譜法。其均一性和穩(wěn)定性好；

28、柱效高，重現(xiàn)性好；分離選擇性高?；瘜W(xué)鍵合相采用化學(xué)反應(yīng)的方法，將官能團(tuán)鍵合在載體表面所形成的固定相。具有使用過(guò)程中不流失、化學(xué)穩(wěn)定性好、適于梯度洗脫、載樣量大等特點(diǎn)。但流動(dòng)相的pH應(yīng)在其相應(yīng)使用范圍內(nèi)，如28，否則硅膠會(huì)被溶解；按極性可分為非極性、弱極性和極性三類(lèi)。非極性鍵合相：表面基團(tuán)為非極性烴基，如十八烷基（C18）、辛烷基（C8）和苯基等，最常用是C18（ODS）。一般來(lái)說(shuō)，長(zhǎng)鏈烷基可使得樣品保留時(shí)間延長(zhǎng)，分離的選擇性增加，且載樣量提高，穩(wěn)定性好。弱極性鍵合相：常見(jiàn)的有醚基和二羥基鍵合相，使用較少。極性鍵合相：常用的有氨基和氰基鍵合相?；瘜W(xué)鍵合相色譜法可分為正相色譜法和反相色譜法，最常用

29、的是反相色譜法。正相鍵合相色譜法以極性鍵合相為固定相，如氰基（-CN）、氨基（-NH2）等，并以非極性或弱極性溶劑為流動(dòng)相，如各種烷烴等，即固定相極性大于流動(dòng)相極性。主要用于分離溶于有機(jī)溶劑的極性至中等極性的分子型化合物。反相鍵合相色譜法以非極性鍵合相為固定相，如十八烷基硅烷（C18）、辛烷基（C8）等，有時(shí)也用弱極性或中等極性的鍵合相為固定相，流動(dòng)相則以水為基礎(chǔ)溶劑，再加入一些與水混溶的有機(jī)溶劑，如甲醇、乙腈等，以調(diào)整流動(dòng)相的極性比例，即固定相極性小于流動(dòng)相極性的色譜法。適合于分離非極性或弱極性化合物，可用于分子型化合物及離子型或可離子化的化合物（加入抑制劑）的分離。極性鍵合相的分離選擇性決

30、定于鍵合相的種類(lèi)、流動(dòng)相的強(qiáng)度和樣品的性質(zhì)。1、正相鍵合相色譜中，組分極性越強(qiáng)，吸附越牢，越后洗脫出柱；固定相極性增加，組分保留時(shí)間變大，洗脫減慢；流動(dòng)相極性增加，洗脫能力增強(qiáng)，組分保留時(shí)間變小，洗脫加快。一般情況下分離含雙鍵的化合物常用氰基鍵合相，而分離多官能團(tuán)化合物則用氨基鍵合相；流動(dòng)相常以飽和烷烴加極性調(diào)節(jié)劑的方式組成。2、反相鍵合相色譜中，組分極性越弱，疏水性越強(qiáng)，與固定相的親和力越大，越后洗脫出柱；流動(dòng)相極性越小，洗脫能力越強(qiáng)，保留時(shí)間越短（水增多，保留時(shí)間增加）。以長(zhǎng)鏈烷基組成的鍵合相適合分離非極性化合物，短鏈烷基鍵合相則能用于分離部分極性化合物，苯基鍵合相適用于分離芳香化合物以及

31、多羥基化合物等。HPLC固定相：顆粒細(xì)且均勻；傳質(zhì)快；機(jī)械強(qiáng)度高，能耐高壓；化學(xué)穩(wěn)定性好，不與流動(dòng)相發(fā)生化學(xué)反應(yīng)。HPLC流動(dòng)相：不與固定相發(fā)生化學(xué)反應(yīng)；對(duì)樣品有適宜的溶解度；必須與檢測(cè)器相適應(yīng)；純度要高，粘度要小。使用前，需用微孔濾膜過(guò)濾，同時(shí)還要脫氣。在正相和反相色譜中，流動(dòng)相極性強(qiáng)弱與洗脫能力是相反的相似相溶HPLC速率方程：H=A+Cmu+Csmu，降低流速，可增加H，但流速太低，分析時(shí)間長(zhǎng)。傳質(zhì)過(guò)程組分在固定相和流動(dòng)相間不斷的溶解、擴(kuò)散、轉(zhuǎn)移的過(guò)程。影響此過(guò)程進(jìn)行的阻力稱為傳質(zhì)阻抗。為降低流動(dòng)相的傳質(zhì)阻抗，應(yīng)降低固定相的粒度，同時(shí)選用粘度比較小的流動(dòng)相，使得分子擴(kuò)散比較容易。在實(shí)驗(yàn)中

32、常用粘度比較低的甲醇或乙腈，而少用粘度比較大的乙醇。HPLC儀器主要由輸液系統(tǒng)（高壓輸液泵以及在線脫氣和梯度洗脫裝置）、進(jìn)樣系統(tǒng)（手動(dòng)進(jìn)樣閥或自動(dòng)進(jìn)樣器）、色譜柱系統(tǒng)（色譜柱以及柱溫箱）、檢測(cè)系統(tǒng)和數(shù)據(jù)記錄處理系統(tǒng)組成，制備型HPLC還備有自動(dòng)餾分收集裝置。HPLC的三大關(guān)鍵部件：輸液泵、色譜柱、檢測(cè)器。等度洗脫在同一分析周期內(nèi)流動(dòng)相組成保持恒定的洗脫方式。該法適合于組分?jǐn)?shù)目少，性質(zhì)差別不大的樣品的分離分析。梯度洗脫在一個(gè)分析周期內(nèi)可以程序改變流動(dòng)相組成的洗脫方式。該法適合分析組分?jǐn)?shù)目多，性質(zhì)相差較大的復(fù)雜樣品的分離分析。梯度洗脫可以縮短分析時(shí)間、提高分離度、改善峰形、提高檢測(cè)靈敏度，但是可能

33、引起基線漂移和重現(xiàn)性降低。根據(jù)具體情況，可將等度洗脫和梯度洗脫結(jié)合起來(lái)。線性梯度洗脫是常用梯度洗脫方式，即在一個(gè)分析周期內(nèi)，流動(dòng)相隨時(shí)間均勻線性變化。梯度洗脫有兩種裝置：高壓梯度和低壓梯度。選擇性（專屬型）檢測(cè)器：紫外、二極管陣列、熒光、電化學(xué)檢測(cè)器（安培檢測(cè)器）。其只能檢測(cè)某一組分的某一性質(zhì)，響應(yīng)值不僅與待測(cè)溶液的濃度有關(guān)，還與化合物的結(jié)構(gòu)有關(guān)。通用型檢測(cè)器：示差折光檢測(cè)器和蒸發(fā)光散射檢測(cè)器。檢測(cè)是一般物質(zhì)都具有的性質(zhì)，對(duì)所有的化合物均有響應(yīng)。HPLC的定性分析方法可以分為色譜鑒定法和非色譜鑒定法，后者又分為化學(xué)鑒定法和兩譜聯(lián)用鑒定法。色譜的定量分析需要色譜系統(tǒng)符合一定要求，即要進(jìn)行色譜系統(tǒng)

34、適用性實(shí)驗(yàn)，包括理論塔板數(shù)、分離度、峰對(duì)稱因子、重復(fù)性等參數(shù)，其中分離度和重復(fù)性最具實(shí)用意義。HPLC定量分析方法：1、外標(biāo)法以對(duì)照品的量對(duì)比求算樣品含量的方法?？煞譃樾Ｕ€法、外標(biāo)一點(diǎn)法及外標(biāo)兩點(diǎn)法等。2、內(nèi)標(biāo)法以待測(cè)組分和內(nèi)標(biāo)物的峰高或峰面積比求算含量的方法?？煞譃樾Ｕ€法、內(nèi)標(biāo)一點(diǎn)法、內(nèi)標(biāo)兩點(diǎn)法和校正因子法等。3、內(nèi)加法將待測(cè)組分的對(duì)照品加至待測(cè)樣品溶液中，測(cè)定增加對(duì)照品后的溶液比原樣品溶液中組分的峰面積增加量，以求算該組分含量的方法。（十三）平面色譜法薄層色譜法將固定相均勻涂布在表面光滑的平板上，形成薄層而在此薄層上進(jìn)行色譜分離和分析的方法。薄層色譜屬于固-液吸附色譜。操作步驟：鋪

35、板活化點(diǎn)樣展開(kāi)定位(定性)/洗脫(定量)紙色譜法以紙纖維為載體，吸著其上的水為固定相，與水不相混溶的有機(jī)溶劑為流動(dòng)相，物質(zhì)在流動(dòng)相的移動(dòng)過(guò)程中被分離的色譜方法。操作步驟：點(diǎn)樣展開(kāi)顯色定性定量分析流動(dòng)相運(yùn)動(dòng)的動(dòng)力來(lái)于毛細(xì)管運(yùn)動(dòng)。比移值溶質(zhì)移動(dòng)距離與流動(dòng)相移動(dòng)距離之比，與組分及色譜條件有關(guān)。Rf=L/L0（0<Rf<1），實(shí)際實(shí)驗(yàn)中，Rf = 0.20.8，最佳取0.30.5。相對(duì)比移值Rr = Rf (i)/Rf (s)=L(i)/L(s)，重現(xiàn)性和可比性均比Rf好，能消除系統(tǒng)誤差（參考物質(zhì)與組分在完全相同的條件下展開(kāi)）。Rf=1(k+1)，k：保留因子面效參數(shù)是動(dòng)力學(xué)參數(shù)，是平面色

36、譜分離效能的指標(biāo)，與載體的粒度、均勻度、活度及流動(dòng)相有關(guān)。n =16 (L/W)2，L：原點(diǎn)到斑點(diǎn)中心的距離，W：斑點(diǎn)縱向?qū)挾?；H = L0/n分離度是平面色譜實(shí)驗(yàn)結(jié)果評(píng)價(jià)的重要指標(biāo)，即兩相鄰斑點(diǎn)中心的距離與兩斑點(diǎn)平均寬度的比值，通常應(yīng)該R>1。R=2(L2-L1)W1+W2=2dW1+W2吸附薄層色譜在各組分與流動(dòng)相分子爭(zhēng)奪吸附劑表面活性中心的過(guò)程中，利用吸附劑對(duì)不同組分的吸附能力差異而實(shí)現(xiàn)分離。組分在薄層板上反復(fù)吸附、解吸附，經(jīng)過(guò)一定時(shí)間（距離）層析而實(shí)現(xiàn)分離。吸附劑為多孔、微粒狀物質(zhì)，常用如硅膠、氧化鋁、聚酰胺。1、硅氧交聯(lián)多孔結(jié)構(gòu)表面有硅醇基（吸附活性中心），與極性物質(zhì)或不飽和化

37、合物形成氫鍵，物質(zhì)極性，吸附能力。吸水失活（110度烘干活化）2、酸性氧化鋁（-Al-OH），pH 45，適于分析酸性、中性物質(zhì)。 中性氧化鋁（-Al-OH+-Al-O-），pH7.5，適于分析酸性、堿性和中性物質(zhì)。 堿性氧化鋁（-Al-O-），pH 910，適于分析堿性、中性物質(zhì)。較佳分離條件的選擇必須對(duì)樣品、吸附劑、流動(dòng)相三者兼顧考慮： a.被測(cè)組分性質(zhì)（極性大小） b.吸附劑的活性：吸附劑的活性，對(duì)被測(cè)組分的吸附能力 強(qiáng)極性物質(zhì)選擇弱吸附劑 弱極性物質(zhì)選擇強(qiáng)吸附劑 c.流動(dòng)相的極性：流動(dòng)相極性，對(duì)被測(cè)組分的洗脫能力一般地，吸附劑的極性（活性）選擇跟樣品相反，展開(kāi)劑的極性則跟樣品相同。洗脫

38、順序：吸附弱的組分先被洗脫，吸附強(qiáng)的組分后被洗脫。 1、非極性化合物，吸附弱。 2、基本母核相同，分子中取代基的極性越強(qiáng)，或極性基團(tuán)越多，分子極性越強(qiáng)，吸附能力越強(qiáng)。 3、分子中雙鍵數(shù)越多，則吸附力越強(qiáng)。 4、能形成分子內(nèi)氫鍵的化合物，其吸附能力降低。一般地，吸附能力：烷烴<烯烴<醚類(lèi)<硝基化合物<酯類(lèi)<酮類(lèi)<醛類(lèi)<硫醇<胺類(lèi)<酰胺<醇類(lèi)<酚類(lèi)<羧酸類(lèi)常用的顯色方法有噴灑顯色劑、碘蒸氣熏或氨水熏以及紫外顯色等。紙色譜分離：K小則上升快，K大則慢。主要用于多官能團(tuán)或高極性化合物的分析和分離。（十四）毛細(xì)管電泳法毛細(xì)管電泳（C

39、E）是將電泳技術(shù)與高效液相色譜技術(shù)相結(jié)合形成的一種新的分離分析方法。電泳技術(shù)利用待分離樣品中各種分子帶電性質(zhì)以及分子本身大小、形狀等性質(zhì)的差異，在電場(chǎng)的作用下，使帶電分子產(chǎn)生不同的遷移速度，從而對(duì)樣品進(jìn)行分離、鑒定或提純。1、電泳過(guò)程必須在一種支持介質(zhì)中進(jìn)行，自由界面電泳無(wú)固定支持介質(zhì)，擴(kuò)散和對(duì)流較強(qiáng)，影響分離效果。2、電泳過(guò)程應(yīng)在適當(dāng)?shù)木彌_液中進(jìn)行的，緩沖液可保持待分離物的帶電性質(zhì)的穩(wěn)定。電泳裝置主要包括電源和電泳槽兩個(gè)部分。毛細(xì)管電泳法的原理：以石英毛細(xì)管為分離通道，高壓直流電場(chǎng)為動(dòng)力，樣品中各組分因淌度（和分配行為）的差異而分離。電場(chǎng)作用下電泳管中的二種運(yùn)動(dòng)（遷移）：電泳和電滲。電泳帶電

40、荷粒子在電場(chǎng)作用下，向與所帶電荷相反的電極運(yùn)動(dòng)。電泳淌度單位電場(chǎng)強(qiáng)度（1V/cm）下帶電分子的遷移速度，E=q6r高電場(chǎng)作用下，石英毛細(xì)管柱管壁表面的硅醇基電離所成雙電層中的水合陽(yáng)離子整體向陰極移動(dòng)，驅(qū)動(dòng)毛細(xì)管內(nèi)的溶液向陰極移動(dòng)，形成了電滲流。電滲淌度：eof=，：介電常數(shù)，：雙電層電勢(shì)，：介質(zhì)粘滯系數(shù)電滲在外電場(chǎng)作用下，毛細(xì)管內(nèi)溶液整體朝一個(gè)方向運(yùn)動(dòng)的現(xiàn)象。電滲流特點(diǎn)：1、平流型2、不管電荷、直徑大小，所有粒子電滲流的速度一樣。粒子（帶正電、帶負(fù)電、電中性）在毛細(xì)管溶液中的運(yùn)動(dòng)結(jié)果是電泳速度和電滲流速的矢量和。不同組分的混合物得以分離是電泳和電滲共同作用的結(jié)果：1、大多數(shù)條件下電滲的速度是電

41、泳速度的幾倍，所以所有的粒子均會(huì)從負(fù)極流出。帶正電的粒子先流出，中性粒子次之，帶負(fù)電的粒子最后流出。正電荷粒子，荷質(zhì)比越大，越先流出；負(fù)電荷粒子，荷質(zhì)比越大，越后流出；中性粒子不分先后。2、電滲流太快，則組分未分離就流出柱；電滲流太慢，則分析時(shí)間長(zhǎng)，焦?fàn)枱岣?，分離度低。電滲的控制較易實(shí)現(xiàn)，故成為CE操作中的要素。電滲流的改變，最主要通過(guò)改變緩沖溶液的pH值來(lái)達(dá)到：pH，veop；pH，veop焦?fàn)枱崾请娏魍ㄟ^(guò)緩沖溶液時(shí)溶液產(chǎn)生的自熱，不利于電泳的快速高效。解決方法：（1）Edc1/3<1500E：電泳電場(chǎng)強(qiáng)度，d：毛細(xì)管內(nèi)徑，c：介質(zhì)濃度一般取25100m管內(nèi)徑（2）采用低電導(dǎo)緩沖液表觀

42、電滲淌度：a=LtmV，tm：遷移時(shí)間，L：遷移距離，V：電泳電壓（E=V/L）分離度： R=2(tm2-tm1)W1+W2理論塔板數(shù)： n=16(tmW)2或者n=aV2DE，Dm：擴(kuò)散系數(shù)常用分離模式：毛細(xì)管區(qū)帶電泳、膠束電動(dòng)毛細(xì)管電泳、毛細(xì)管凝膠電泳、毛細(xì)管電色譜、非水毛細(xì)管電泳。I.毛細(xì)管區(qū)帶電泳也稱毛細(xì)管自由區(qū)帶電泳，其內(nèi)充液為一定pH值的緩沖溶液。1、V，tm，n，但同時(shí)焦耳熱，故應(yīng)選取合適V。2、緩沖溶液的選擇直接影響粒子的遷移和分離，還影響進(jìn)樣：（1）要求自身淌度低，即分子大而電荷小；（2）對(duì)于兩性電解質(zhì)，pH影響其所帶電荷種類(lèi)及多少，pH<pI帶正電，pH>pI帶

43、負(fù)電；（3）高濃度緩沖下，組分間、組分與管壁間作用減少，有利于分離，但c，電滲，tm，焦?fàn)枱?，?duì)分離又不利。II.膠束電動(dòng)毛細(xì)管電泳色譜能用于中性物質(zhì)的分離。（十五）色譜聯(lián)用技術(shù)為何要聯(lián)用？色譜分離能力強(qiáng)，質(zhì)譜定性、結(jié)構(gòu)分析能力強(qiáng)，兩者聯(lián)用，取長(zhǎng)補(bǔ)短，更快、更高效。GC-MS、HPLC-MS、CE-MS、GC-FTIR、HPLC-FTIR、HPLC-NMR、HPLC-NMR-MS色譜聯(lián)用特點(diǎn)：1.分離和定性一氣呵成；2.定性指標(biāo)多而全；3.靈敏度高；4.應(yīng)用范圍廣全掃描對(duì)指定質(zhì)荷比范圍內(nèi)的離子全部掃描并記錄。色譜-質(zhì)譜三維譜全離子（Total Ion）色譜圖或總離子流色譜圖總離子強(qiáng)度隨時(shí)間變化

44、的曲線。選擇離子（Select Ion）監(jiān)測(cè)圖選擇一定m/z的離子進(jìn)行掃描。掃描時(shí)對(duì)選定的離子進(jìn)行檢測(cè)，其它離子不被記錄，能提高靈敏度，改善峰形和準(zhǔn)確度，主要用于定量分析。選擇反應(yīng)監(jiān)測(cè)質(zhì)量色譜圖又稱提取離子色譜圖，是由全掃描質(zhì)譜中提取一種質(zhì)荷比的離子得到的色譜圖。離子化方式：EI（電子轟擊離子源）、FAB（快原子轟擊離子源）、ESI、MALDI、API（大氣壓電離源）接口（1）要求：1.組分能進(jìn)質(zhì)譜2.維持真空度3.不發(fā)生化學(xué)變化4.有效傳遞的重復(fù)性5.控制簡(jiǎn)單、方便、可靠6.接口短（2）目的：GC-MS：除載氣；降壓；富集（3）分類(lèi)：GC-MS：一般式（直接導(dǎo)入型、分流型、濃縮型）和特殊式H

45、PLC-MS：電噴霧離子化接口（ESI）、大氣壓電離源如大氣壓化學(xué)離子化接口（APCI）常見(jiàn)的離子化方式有兩種：一種是樣品在離子源中以氣體的形式被離子化，另一種為從固體表面或溶液中濺射出帶電離子。很多情況下進(jìn)樣和離子化同時(shí)進(jìn)行。質(zhì)量分析器：四極桿、離子阱、TOF，兩個(gè)主要技術(shù)參數(shù)是所能測(cè)定的質(zhì)荷比范圍（質(zhì)量范圍）和分辨率。MS-MS串聯(lián)：時(shí)間串聯(lián)和空間串聯(lián)二、公式小結(jié)1、Nernest方程：Red Ox + eE=EOx/Red0+RTnFlnOxRed課件給出數(shù)值：R=8.314、F=96487，實(shí)際用下式即可：E=EOx/Red0+0.059nlnOxRed2、氣相色譜D=2N/S或者3N

46、/SD檢測(cè)限或敏感度，某組分峰高恰為噪音（N）的2或3倍時(shí)，單位時(shí)間內(nèi)載氣引入檢測(cè)器中的該組分質(zhì)量（g/s）或者單位體積載氣中所含該組分的量（mg/ml）。S靈敏度或響應(yīng)值，1ml載氣攜帶1mg某組分通過(guò)檢測(cè)器所產(chǎn)生的電壓，或者每秒鐘1g組分被載氣攜帶通過(guò)檢測(cè)器所產(chǎn)生的電壓。3、朗伯-比爾定律A=EbcA：吸光度，A=-lgT（T=I/I0，稱為透光率）E：吸光系數(shù)，b：比色池厚度（cm），c：濃度（mol/L或者質(zhì)量百分?jǐn)?shù)）E分為摩爾吸光系數(shù)和質(zhì)量吸光系數(shù)E1cm1%，兩者關(guān)系為： =M10E1cm1%，其中M為分子量。（1）條件：1.單色光；2.稀溶液；3.吸收溶質(zhì)形式不變。（2）當(dāng)T=0

47、.368，即A=0.434時(shí)測(cè)量誤差最小。透光率20%65%，A為0.20.7時(shí)，濃度相對(duì)誤差在約3倍T以內(nèi)。4、色譜基本公式（1）速率理論：H=A+B/u+Cu（Van Deemter方程）H：塔板高度，A：渦流擴(kuò)散系數(shù)，B：縱向擴(kuò)散系數(shù)，C：傳質(zhì)阻抗系數(shù)，u：流動(dòng)相線速度a.渦流擴(kuò)散項(xiàng)A與流速u(mài)無(wú)關(guān)；b.低流速區(qū)(u小)，B/u大，分子擴(kuò)散占主導(dǎo)；c.高流速區(qū)(u大)，Cu大，傳質(zhì)阻力占主導(dǎo)；（2）塔板理論：H=L/nL：有效柱長(zhǎng)，n：塔板數(shù)n=16tRW2或n=5.54tRW1/22tR：保留時(shí)間，W：峰寬，W1/2：半峰寬。其中，W=4，W1/2=2.355（：標(biāo)準(zhǔn)差），即W=1.669 W1/2色譜柱的長(zhǎng)度一定時(shí)，理論板數(shù)目n越大，色譜峰越窄。（3）分配系數(shù)和保留因子分配系數(shù)：K=cscm，保留因子： k=msmm=KVsVms：固定相，m：流動(dòng)相色譜基本保留方程（保留時(shí)間與保留因子的關(guān)系）：tR=t0(1+k)(a) 色譜條件一定時(shí)，K或k值越大，則組分的保留值也越