化妝品中丙烯酰胺的檢測方法

1、附件1:化裝品中丙烯酰胺的檢測方法1范圍本方法規(guī)定了采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定化裝品中丙烯酰胺單體CAS:79-06-1的方法。本方法適用于化裝品中丙烯酰胺單體含量的測定。2方法提要樣品經(jīng)過提取后，用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定，以多反響離子監(jiān)測模式進行監(jiān)測，采用特征離子豐度比進行定性，丙烯酰胺與內(nèi)標(biāo)峰面積比定量。 本方法 對丙烯酰胺的檢出限為0.00005 gt,定量下限為0.0002 g；假設(shè)取0.2 g樣品測定， 本方法對丙烯酰胺的檢出濃度為 0.005 mg/kg，最低定量濃度為0.025 mg/kg。3試劑除另有規(guī)定外，所用試劑均為分析純，水為實驗室用一級水。3.1丙烯酰胺，純度 &g

2、t; 99.0 %3.2氘代丙烯酰胺2,3,3-D3，純度 > 98 %3.3醋酸銨。3.4乙腈，色譜純。3.5甲醇，色譜純。3.6空白化裝品樣品：選擇不含丙烯酰胺的化裝品作為空白樣品。3.7乙腈溶液M 乙腈=10%:量取10 mL乙腈3.4置100 mL量瓶中，加 水稀釋至刻度，混勻。3.8醋酸銨溶液c 醋酸銨=0.02 mol/L:稱取醋酸銨0.08 g,置50 mL量瓶中， 加水溶解并定容至刻度，即得濃度約為 0.02 mol/L的醋酸銨溶液。3.9丙烯酰胺標(biāo)準(zhǔn)儲藏溶液丙烯酰胺=0.5 g/L:稱取丙烯酰胺標(biāo)準(zhǔn)品3.150 mg 精確到0.1 mg置100 mL量瓶中，加乙腈溶液3

3、.7使溶解并定容至 刻度，搖勻，即得質(zhì)量濃度為0.5 g/L的丙烯酰胺標(biāo)準(zhǔn)儲藏溶液。3.10 丙烯酰胺系列標(biāo)準(zhǔn)溶液： 按照表 1 操作，分別精密量取一定體積的丙烯酰胺 標(biāo)準(zhǔn)儲藏溶液 3.9置 10 mL 量瓶中，以乙腈溶液 3.7稀釋并定容至刻度， 得不同濃度的丙烯酰胺系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。3.11內(nèi)標(biāo)工作溶液：稱取氘代丙烯酰胺標(biāo)準(zhǔn)品10 mg 精確到0.1 mg置100 mL 量瓶中，加乙腈溶液3.7使溶解并定容至刻度，搖勻，即得質(zhì)量濃度為100卩g/mL 的氘代丙烯酰胺儲藏溶液，然后精密量取氘代丙烯酰胺儲藏溶液 1mL 置 50 mL 量瓶中，加乙腈溶液3.7使溶解并定容至刻度，搖勻，即得質(zhì)量濃度

4、為2卩g/mL 的氘代丙烯酰胺內(nèi)標(biāo)工作溶液。3.12 丙烯酰胺參加空白樣品標(biāo)準(zhǔn)溶液：取空白化裝品樣品 6 份，每份約 0.20 g 精確至0.001 g于5 mL塑料離心管中，分別加濃度為2卩g/m的內(nèi)標(biāo)溶液50 L渦旋30 s,再分別加丙烯酰胺系列標(biāo)準(zhǔn)溶液 50卩，渦旋30 s；然后加0.15 mL0.02 mol/L的醋酸銨水溶液，渦旋30 s。再加2.0 mL乙腈，渦旋60 s后，以10000rpm離心轉(zhuǎn)速10 min，取上清液，氮氣吹干，殘渣加 2 mL色譜流動相復(fù)溶，渦 旋60 s，以10000 rpm轉(zhuǎn)速離心5 min,取上清液，經(jīng)0.45卩微孔濾膜過濾后， 濾液作為待測液，備用，

5、使得每克樣品中含有丙烯酰胺0.025卩、.05 »g.25 yg1.25 yg 12. 5 yg5 yog4 儀器4.1 液相色譜-三重串聯(lián)四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀。4.2 分析天平：感量 0.0001 g。4.3 超聲波清洗儀。4.4 高速離心機。4.5 精密移液器。4.6 渦旋振蕩器。5. 分析步驟5.1 樣品預(yù)處理稱取樣品0.20 g 精確至0.001 g，置5 mL塑料離心管中，加濃度為2 y g/mL 的內(nèi)標(biāo)溶液50卩,渦旋30 s；然后加0.15 mL 0.02 mol/L的醋酸銨水溶液，渦旋30 s,再加2.0 mL乙腈，渦旋60 s后，以10000 rpm轉(zhuǎn)速離心10 min

6、，取上 清液，氮氣吹干，殘渣加2 mL色譜流動相復(fù)溶，渦旋60 s,以10000 rpm轉(zhuǎn)速 離心5 min，經(jīng)0.45卩微孔濾膜過濾后，濾液作為待測液，備用。5.2 液相色譜-三重串聯(lián)四極桿質(zhì)譜聯(lián)用分析條件5.2.1 色譜參考條件色譜柱：Waters Atlantis T3 3.5卩m, 2.1 x 100 m或具有同等柱效的色譜柱；流動相：甲醇 +0.1%甲酸水溶液 = 1.5+98.5，恒度洗脫 3 min；流速： 0.3 mL/min；柱溫：25 C；進樣量：5譏5.2.2 質(zhì)譜參考條件離子源： 電噴霧離子源 ESI 源；監(jiān)測模式： 正離子監(jiān)測模式； 監(jiān)測離子對及相關(guān)電壓參數(shù)設(shè)定見表

7、2；霧化氣壓力： 50 psi；枯燥氣流速： 12 L/min；枯燥氣溫度：350 C；毛細管電壓： 4000 V；0 - 1 min：不進入質(zhì)譜儀分析,1 - 2.5 min：進入質(zhì)譜儀分析。5.3 定性判定用液相色譜 -串聯(lián)質(zhì)譜法對樣品進行定性判定，如果檢出的色譜峰的保存時 間與標(biāo)準(zhǔn)品相一致， 并且所選擇的監(jiān)測離子對的相對豐度比與標(biāo)準(zhǔn)樣品的離子對 相對豐度比相一致見表 3，那么可以判斷樣品中存在丙烯酰胺。5.4 定量測定在一5.2項液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用分析條件下，用丙烯酰胺參加空白 樣品的系列濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液 3.12分別進樣，以丙烯酰胺參加空白樣品的系列 濃度為橫坐標(biāo)，丙烯酰胺與內(nèi)

8、標(biāo)的峰面積比為縱坐標(biāo)， 進行線性回歸，建立標(biāo)準(zhǔn) 曲線，其線性相關(guān)系數(shù)應(yīng) > 0.99。取一5.1項下處理得到的樣品待測溶液進樣 5 L將丙烯酰胺與內(nèi)標(biāo)的峰面積比代入標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算丙烯酰胺的質(zhì)量濃度，按一6計算II,計算樣品中丙烯酰胺的含量。5.5平行實驗按以上步驟操作，對同一樣品獨立進行測定獲得的兩次獨立測試結(jié)果的絕對 差值不得超過算術(shù)平均值的15%。6計算-丙烯酰胺二mim式中：，丙烯酰胺一一化裝品中丙烯酰胺的含量，mg/kg;m樣品取樣量，g;mi 代入回歸方程計算得到的樣品待測溶液中丙烯酰胺的質(zhì)量，弋；7回收率和精密度兩個濃度水平的平均提取回收率在 85 -110%,并且RSD小于

9、8% n=6，平均方法回收率在96.6 -106%之間，并且RSD小于8% n=6。表1丙烯酰胺系列標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制工作溶液溶液初始濃度量取體積定容終體積標(biāo)準(zhǔn)溶液終濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液1(0.5 mg/mL)2 mL10 mL100 gg/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液2(0.5 mg/mL)1 mL10 mL50 g g/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液3(50 gg/ml)1 mL10 mL5 g g/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液4(5 g g/mL)2 mL10mL1 g g/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液5(1 g g/m)2 mL10 mL0.2 gg/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液6(1 g g/m)1 mL10 mL0.1 gg/mL表2二重四級桿離子對及相關(guān)電壓參數(shù)設(shè)定表編號物質(zhì)名稱母離子m/z Frag.(V)子離子m/zCE (V)12丙烯酰胺氘代丙烯酰胺內(nèi)標(biāo)72407540555888表3監(jiān)測離子和離子相對豐度比監(jiān)測離子對m/z離子相對豐度比%允許相對偏差%72-5510072-44應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)品測定離子相對豐度比