腦脊液常規(guī)操作規(guī)程

1、.1 檢驗(yàn)?zāi)康?指導(dǎo)腦脊液CSF)常規(guī)測定。2 方法原理2.1腦脊液是存在于腦室及蛛網(wǎng)膜下腔中的無色透明液體。由于脈絡(luò)叢上皮細(xì)胞對血漿 中各種物質(zhì)的選擇性分泌和超濾作用，血漿中各種成分對血腦屏障的通透性各有不 同。其中最易通過血腦屏障的是氯、鈉、鎂離子及乙醇;其次為清蛋白、葡萄糖、鈣 離子、乳酸、氨基酸、尿素和肌酐;纖維蛋白原、補(bǔ)體、抗體、某些藥物、膽紅素、 膽固醇那么極難或不能通過。中樞神經(jīng)系統(tǒng)任何部位發(fā)生器質(zhì)性病變時，如感染、炎 癥、腫瘤、外傷、水腫和阻塞等都可以引起腦脊液成分的改變。通過對腦脊液理學(xué) 檢查，顯微鏡檢查、化學(xué)和免疫學(xué)檢查及腦脊液病原學(xué)檢查，可對疾病的診斷、治 療和預(yù)后判斷提

2、供依據(jù)。 2.2腦脊液CSF常規(guī)測定內(nèi)容包括:顏色、性狀、有核細(xì)胞計數(shù)、紅細(xì)胞計數(shù)、 氏試驗(yàn)、細(xì)菌等。 2.3潘氏pandys)試驗(yàn)：CSF中的球蛋白與苯酚結(jié)合，形成不溶性的蛋白鹽而產(chǎn)生白 色混濁或沉淀。 1顏色COLOR) 6中性粒細(xì)胞NE) 2透明度clearity) 7淋巴細(xì)胞LY 3凝固性coagulability 8單核細(xì)胞MO 4腦脊液有核細(xì)胞計數(shù)CSFNUCL) 9潘氏試驗(yàn)pandys test 5腦脊液紅細(xì)胞計數(shù)CSFRBC)3 方法性能參數(shù)如線性、檢出限、測量區(qū)間、不確定度、準(zhǔn)確性、精細(xì)度、靈敏度和特4.標(biāo)本類型4.1標(biāo)本類型：新鮮CSF。4.2標(biāo)本拒收條件：拒收延遲室溫2h

3、、冷藏6h未送達(dá)標(biāo)本。4.3標(biāo)本保存與穩(wěn)定性：一般室溫1h內(nèi)完成檢驗(yàn)，久置可致細(xì)胞破壞，影響細(xì)胞計數(shù) 及分類檢查。5.要求的容器、防腐劑或添加物、儀器、試劑或分析系統(tǒng) 5.1標(biāo)本容器：BD無促凝成分紅頭管或干凈枯燥帶蓋玻璃管。5.2試劑 5.2.1試劑組分：生理鹽水0.9%Nacl溶液白細(xì)胞稀釋液1%冰乙酸1ml分析純冰醋酸+蒸餾水至100ml)X氏快速瑞氏染色液 A液：曙紅、甲醇 B液：亞甲藍(lán)潘氏試劑10%苯酚溶液純苯酚10ml+蒸餾水至100ml 5.2.2 試劑存儲和有效期：試劑名稱存儲條件有效期開瓶有效期位置生理鹽水室溫1年1年存貨柜/血常規(guī)室操作臺冰乙酸室溫2年1年藥品柜1%乙酸冷藏

4、1年1年試劑冰箱10%苯酚溶液室溫1年1年藥品柜X氏快速瑞氏染色液室溫2年6個月藥品柜/染色操作臺5.3儀器：OLYMPUS光學(xué)顯微鏡，血細(xì)胞計數(shù)板。 6. 校準(zhǔn)程序 計量學(xué)溯源性不適用7. 質(zhì)量控制，控制品使用水平和頻率，允許限的糾正措施不適用8. 程序步驟 8.1一般性狀檢查：輕輕混勻CSF，觀察量、顏色、有無凝塊和透明度一般細(xì)胞數(shù)300 /l個時或蛋白增加可產(chǎn)生混濁，并記錄。 8.2顯微鏡檢查 8.2.1細(xì)胞計數(shù)無凝塊標(biāo)本 1清或微混標(biāo)本：a) 混勻后直接沖入計數(shù)池，計數(shù)四角四大方格內(nèi)細(xì)胞總 數(shù)包括RBC，NUCL。 b) 用白細(xì)胞稀釋液作1：1稀釋，計數(shù)有核細(xì)胞數(shù) c) 紅細(xì)胞數(shù)細(xì)胞總

5、數(shù)有核細(xì)胞數(shù) 當(dāng)白細(xì)胞數(shù)30個/l時，在白細(xì)胞計數(shù)池中直接分類至少50個白細(xì)胞 2混濁及以上標(biāo)本：外觀稀釋樣本量稀釋液/溶解劑粉色/輕度混濁1:2020l380l紅色/混濁1:5010l490l帶血量極高/極度混濁1:10010l990l a)稀釋標(biāo)本：于清潔試管中按上表進(jìn)展稀釋，用以計數(shù)細(xì)胞總數(shù)； b)溶解RBC：于清潔試管中按上表進(jìn)展稀釋，用以計數(shù)有核細(xì)胞數(shù)； c)沖池；計數(shù) d)紅細(xì)胞數(shù)=細(xì)胞總數(shù)有核細(xì)胞數(shù) 8.2.2 有凝塊或粘稠標(biāo)本： 1用吸管旋轉(zhuǎn)并擠壓凝塊，擠出里面的液體及細(xì)胞。 22000rpm×5min離心，別離上清液和沉渣。 3混勻沉渣，涂片，用高倍鏡觀察NUCL、

6、RBC。 4報告每高倍鏡視野的紅細(xì)胞和有核細(xì)胞數(shù)。 8.2.3離心獲取沉渣和上清液：將完成計數(shù)的CSF離心，2000rpm×5min離心,吸出上 清液于另一試管，并在試管上編號。 8.2.4瑞氏染色：當(dāng)NUCL>106/l時進(jìn)展操作。將沉渣混勻涂片，厚薄根據(jù)有核細(xì) 胞數(shù)而定，血性標(biāo)本可考慮推片。待干后，瑞氏染色進(jìn)展分類分 100個NUCL；如見有不能分類細(xì)胞或疑心有惡性細(xì)胞時，應(yīng)請示 上級主管，由有經(jīng)歷的上級主管進(jìn)展分析，并在報告時另行描述報 告，如腦膜白血病或腫瘤細(xì)胞等。 8.3潘氏試驗(yàn) 8.3.1試驗(yàn)操作：取小試管一支，參加10%的石碳酸水溶液約5ml，用一次性吸管 加一滴

7、CSF上清液立即在黑色背景燈照下觀察結(jié)果。 8.3.2結(jié)果判定：陰性：清晰透明。 弱陽性±：微呈白霧狀，在黑色背景下才能看到。 陽性+：灰白色云霧狀。 2+：白色渾濁。 3+)：白色濃絮狀沉淀。 4+：白色凝塊。9. 計算結(jié)果原理 9.1顏色 9.1.1紅色：常見于穿刺損傷或出血性病變。 為區(qū)別蛛網(wǎng)膜下腔出血和穿刺損傷應(yīng)注意： (1)離心沉淀后：如上層液體呈黃色，隱血試驗(yàn)陽性，多為蛛網(wǎng)膜下腔出 血，且出血時間已經(jīng)超過4小時。如上層液體澄清無色，紅細(xì)胞均沉 管底，多為穿刺出血或因病變所致的新鮮出血。 2紅細(xì)胞皺縮，不僅見于陳舊性出血，在穿刺損傷引起出血時也可看 到，因腦脊液滲透壓較血漿

8、高所致。 9.1.2黃色：可因陳舊性蛛網(wǎng)膜下腔或腦室出血、椎管梗阻、化膿性腦膜炎、結(jié)核性 腦膜炎、重癥如核黃疸等引起。 9.1.3白色或灰白色：多因白細(xì)胞增加所致，常見于化膿性腦膜炎。 9.1.4褐色或黑色：常見于腦膜黑色素瘤。 9.1.5綠色：可見于綠膿假單胞菌、肺炎鏈球菌、甲型鏈球菌引起的腦膜炎、高膽紅 素血癥和膿性腦脊液。 9.2透明度：腦脊液混濁程度與細(xì)胞數(shù)量有關(guān)，腦脊液中細(xì)胞數(shù)超過300×10/L時，可出現(xiàn) 混濁。蛋白質(zhì)含量增加或含大量微生物也可產(chǎn)生混濁。 9.3凝固性：結(jié)核性腦膜炎靜置12-24小時后，標(biāo)本外表有纖細(xì)的網(wǎng)膜形成。蛛網(wǎng)膜下腔 梗阻時，可產(chǎn)生黃色膠凍狀。 9.

9、4潘氏試驗(yàn)：有腦組織和腦脊髓膜疾患時常成陽性反響如化膿性腦脊髓膜炎、梅毒性中 樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病、脊髓灰質(zhì)炎、流行性腦炎等。腦出血時多呈陽性反響， 如外傷性血液混入腦脊液中，亦呈陽性反響。 9.5細(xì)胞分類： 9.5.1中樞神經(jīng)系統(tǒng)病變的CSF，細(xì)胞可增多，其增多的程度及細(xì)胞的種類與病變的 性質(zhì)有關(guān)。 9.5.2中樞神經(jīng)系統(tǒng)病毒感染、結(jié)核性或霉菌性腦脊髓膜炎時，細(xì)胞數(shù)可中度增加， 常以淋巴細(xì)胞為主。 9.5.3細(xì)菌感染時化膿性腦脊髓膜炎，細(xì)胞數(shù)顯著增加，以中性粒細(xì)胞為主。 9.5.4寄生蟲病時，可見較多的嗜酸性粒細(xì)胞。 9.5.4腦室或蛛網(wǎng)膜下腔出血時，腦脊液內(nèi)可見多數(shù)紅細(xì)胞。10. 生物參考區(qū)間

10、顏色COLOR)無色透明度clearity)透明凝固性coagulability無凝塊潘氏試驗(yàn)pandys test陰性O(shè)R弱陽性有核細(xì)胞計數(shù)CSFNUCL)成人0-8×106/L中性粒細(xì)胞NE)成人0-6%兒童0-15×106/L新生兒0-8%新生兒0-30×106/L淋巴細(xì)胞LY成人40-80%單核細(xì)胞MO成人15-45%新生兒5-35%新生兒50-90%紅細(xì)胞計數(shù)CSFRBC)0×10/L正常腦脊液中白細(xì)胞主要為淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞，之比約為7:3，可含極少中性粒細(xì) 胞。11.警告值、危急值適用時12.檢驗(yàn)結(jié)果可報告區(qū)間13.對超出可報告X圍的結(jié)果的處理13.1如檢到細(xì)菌時應(yīng)建議培養(yǎng)確認(rèn)。 13.2有不能分類細(xì)胞，應(yīng)請示上級主管，并另行描述報告，如腦膜白血病或腫瘤細(xì)胞。14.實(shí)驗(yàn)室解釋 15.平安防護(hù)措施 15.1所有樣品按具有潛在傳染性的標(biāo)本處理。15.2測定完成后，上清液及沉渣試管于2000mg/L有效氯消毒液浸泡4小時以上，倒入 醫(yī)療廢物下水槽，由醫(yī)院統(tǒng)一消毒處理；塑料試管或容器等容器等醫(yī)療廢棄物倒入 黃色醫(yī)療垃圾袋，貼上標(biāo)簽并封口，由醫(yī)院統(tǒng)一銷毀處理。15