幾種不同DNA聚合酶比較

1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上 合理選擇耐熱DNA聚合酶是PCR成敗與否的一個關(guān)鍵因素，如何選擇最合適的耐熱聚合酶，是進行PCR實驗首先要考慮的問題。目前市面上有許多耐熱DNA聚合酶，雖然名稱各不相同，但主要區(qū)別在于特異性、保真性、耐熱性、擴增速率、擴增片段長度等幾個指標。 Taq DNA聚合酶 存在于水生嗜熱菌(Thermus aquaticus)的嗜熱DNA聚合酶，可在74復(fù)制DNA，在95仍具有酶活力。該酶可在離體條件下，以DNA為模板，延伸引物，合成雙鏈DNA。這個酶只有53DNA聚合酶活性和53的外切酶活性，缺少35的外切酶活性，即具有5-3DNA聚合酶活性和對雙鏈DNA特異的5-3外切

2、核酸酶活性，無3-5外切酶活性。使用該產(chǎn)品擴增得到的PCR產(chǎn)物的3末端附有一個“A”堿基，可直接用于TA克隆。由于不具有3-5外切酶活性，因而在合成中對某些單核苷酸錯配沒有校正功能。 TaqDNA聚合酶還具有非模板依賴性活性，可將PCR雙鏈產(chǎn)物的每一條鏈3加入單核苷酸尾，故可使PCR產(chǎn)物具有3突出的單A核苷酸尾；另一方面，在僅有dTTP存在時，它可將平端的質(zhì)粒的3端加入單T核苷酸尾，產(chǎn)生3端突出的單T核苷酸尾。應(yīng)用這一特性，可實現(xiàn)PCR產(chǎn)物的T-A克隆法。適用于： 普通PCR，TA克隆 Super Taq DNA聚合酶 Super Taq DNA聚合酶是由耐熱的Taq DNA聚合酶和具有3-5

3、外切酶活性的高保真DNA聚合酶按照最合適的比例混合而成，具有擴增效率高和錯配率低的優(yōu)良性能，使用該產(chǎn)品擴增得到的PCR產(chǎn)物的3末端附有一個“A”堿基，可直接用于TA克隆。適用于：要求效率高保真性好的PCR反應(yīng)。UlltraPF DNA聚合酶 UlltraPF DNA Polymerase是一種耐熱的超保真DNA聚合酶，具有5-3聚合酶活性和3-5外切酶活性，具有比Pfu DNA Polymerase更好的保真性能和更快的擴增效率。使用該產(chǎn)品擴增得到的PCR產(chǎn)物為平滑末端，可直接克隆于平滑末端載體中。 LA Taq DNA 聚合酶 LA Taq DNA polymerase是一種具有5-3DNA

4、聚合酶活性和3-5校對活性的聚合酶，可用于擴增較長的富含GC的片段。作為具有3-5校對活性的且熱穩(wěn)定性最強的DNA聚合酶之一，該酶可在最佳溫度（75）催化DNA合成，且錯配率低（準確率約是標準Taq DNA polymerase的10倍）。該酶可擴增人基因組DNA長達17.5 kb的片段和DNA長達20 kb的片段。在較長的PCR擴增中應(yīng)用LApro Taq DNA polymerase可減少拖尾效應(yīng)，實際上減少背景影響。LA Taq DNA polymerase擴增產(chǎn)物帶有A尾可用于T-A克隆。LA Taq DNA聚合酶的應(yīng)用： LA Taq DNA polymerase可應(yīng)用于許多方面：擴

5、增人基因組中長達20 kb的片段；高忠實度擴增；比普通Taq聚合酶更穩(wěn)定；T-A克??；定點突變；片段分析。 Tth DNA聚合酶 Tth DNA聚合酶是一種熱穩(wěn)定性酶，分子量為92kDa，從Thermus thermophilus HB-8中分離。該酶在74時可進行DNA復(fù)制，在95的半衰期為20分鐘。 Tth DNA聚合酶在鎂離子存在的條件下可催化核苷酸沿53方向發(fā)生聚合反應(yīng)，形成雙鏈DNA，也可在鎂離子存在的條件下，以RNA為模板沿53方向發(fā)生核苷酸聚合反應(yīng)。該酶也具有53外切酶活力。 Tth DNA聚合酶可用于PCR、RT-PCR、逆轉(zhuǎn)錄和較高溫度條件下的引物延伸反應(yīng)。產(chǎn)品特點：1、RT

6、-PCR反應(yīng)的特異性增加：在較高的溫度下進行逆 轉(zhuǎn)錄，增加了引物雜交和延伸的特異性2、二級結(jié)構(gòu)減少：在較高的溫度下進行逆轉(zhuǎn)錄，減少了由于RNA二級結(jié)構(gòu)引起的問題3、當加入Mg2+后，該酶的聚合活性大大增加，從而使cDNA合成與擴增可用一種酶催化。生產(chǎn)公司：美國 promage 公司 Pfu DNA 聚合酶 該酶在75時可進行DNA復(fù)制，Pfu DNA聚合酶在鎂存在的條件下可催化核苷酸沿53方向發(fā)生聚合反應(yīng)，形成雙鏈DNA，Pfu DNA聚合酶具有3 5外切酶校正活性。當聚合反應(yīng)發(fā)生堿基錯配時，聚合酶的校正活性可將錯配的堿基切除。在所有熱穩(wěn)定性聚合酶中Pfu DNA聚合酶的錯誤幾率最低，錯誤率約

7、為110-6/每堿基對 ，缺點是PCR擴增靈敏度較Taq 低。建議Pfu DNA聚合酶用于要求保真度比較高的PCR反應(yīng)，引物的延伸反應(yīng)以及其它的一些應(yīng)用，包括克隆、DNA表達、突變分析等。Pfu DNA聚合酶產(chǎn)生的PCR產(chǎn)物為平端，無末端磷酸化。若要進行“T-A”克隆，可在PCR反應(yīng)完了之后，加入Taq DNA聚合酶，于72反應(yīng)1-2小時，以便在DNA 3端附加一個“A”。 GenStar Pfu DNA Polymerase是將克隆有Pyrococcus furiosis的DNA聚合酶基因在大腸桿菌中重組表達，經(jīng)多次柱層析純化而獲得的高純度、高效率耐熱DNA聚合酶。該酶具有53DNA聚合酶活

8、性和35的外切酶活性(即校讀活性)，能夠糾正DNA擴增過程中產(chǎn)生的堿基錯配現(xiàn)象，適用于對保真性要求較高的DNA片段的擴增，如基因克隆、定點突變、SNP分析等，也可用于DNA片段的末端補平。本產(chǎn)品擴增得到的PCR產(chǎn)物無3端突出堿基，不可直接用于T載體克隆。用途：基因克隆、測序；定點突變。特點：高保真性：高純度的酶帶來優(yōu)于其它品牌的保真性。 VentR DNA 聚合酶 該酶是從Litoralis棲熱球菌中分離出的，不具有5-3外切酶活性，但具有3-5外切酶活性，可以去除錯配的堿基，具有校對功能。生產(chǎn)公司：美國NEB公司Phusion DNA聚合酶 特的Phusion DNA聚合酶是Finnzyme

9、s公司的拳頭產(chǎn)品，其合成準確率和合成速度無與倫比。Phusion DNA聚合酶的獨特的分子結(jié)構(gòu)和特性使其成為基因克隆的最佳選擇，為PCR擴增樹立了新的標準。Phusion DNA聚合酶（以及Phusion Hot Start DNA聚合酶）的出錯率是4.4 x 10-7，比Taq DNA聚合酶低50倍、比Pfu酶低6倍，是目前市場上準確性最高的DNA聚合酶；此外其擴增速率比Pfu快10倍，比Taq酶快2倍。Phusion DNA聚合酶的應(yīng)用：高保真PCR：擴增錯誤率只有4.4 x 10-7，是目前保真性最好的DNA聚合酶克?。篜husion DNA擴增保真性最好，基因克隆的最佳選擇長片段擴增：

10、最高的核苷酸滲入率，在短時間內(nèi)可以擴增更長的DNA片段DHPLC分析芯片分析 生產(chǎn)公司：Finnzymes公司KOD DNA聚合酶 1、最適合于克隆反應(yīng)，具備超群的準確性 KOD DNA多聚酶的特點是具有很高水準的準確性，而KOD Plus的準確性則有了更大的提高，具有Taq DNA多聚酶82倍左右的PCR可信度，最適合于克隆。 2、通過熱啟動PCR，提高了PCR的性能。 通過采用兩種抗kod單克隆抗體，抑制了PCR反應(yīng)前常溫狀態(tài)下的多聚酶活性和35核酸外切酶活性。不需其他特殊操作即可進行熱啟動PCR。抗體的阻斷作用在94、2分鐘預(yù)熱下即發(fā)生失活，不需要冗長的變性步驟，實現(xiàn)了高特異性 的PCR

11、反應(yīng)。 3、伸長性、擴增效果的提高 對PCR反應(yīng)緩沖液的組成進行了最優(yōu)化重組，使之較以往的KOD DNA多聚酶相比伸長性及擴增效果均有所提高，可對更多種類的目標物進行PCR反應(yīng)。 4、超群的耐熱性 因來源于超嗜熱原始菌，其耐熱性比Taq DNA多聚酶還要高，在100、1小時的熱處理候仍可保持約70%的活性。故可以將熱變性步驟的溫度設(shè)定提高，對gc含量高的模板等具有特異性高級結(jié)構(gòu)的樣品非常有利。用途因準確性高，特別適用于pcr產(chǎn)物的克隆。另外，由于通過抗體法實現(xiàn)熱啟動反應(yīng)，所以能夠輕松簡便地實施高特異性的pcr反應(yīng)。伸長性、擴增效率也很高， 可以進行更多種類目標物的pcr反應(yīng)。生產(chǎn)公司：toyo

12、bo公司最高擴增性能的PCR酶-KOD-FX- 貨號： KFX-101規(guī)格：200U優(yōu)勢:長片斷擴增效率,(DNA 40kb, 基因組DNA 24kb, cDNA 13.5kb)高擴增效率 ，（1ng的模板量即可擴增）對高GC含量的模版也有很高擴增效率 （70%以上GC含量也能擴增） KOD-PLUS-KOD-Plus- ver2.0 貨號：KOD-211規(guī)格：200U優(yōu)勢:世界最高水平保真度的PCR酶，是Taq酶的可信度的倍，pfu酶的7倍.用途:特別適合PCR產(chǎn)物的克?。贿M行熱啟動PCR,實現(xiàn)高特異反應(yīng)。 高效率高速度PCR酶-KOD Dash 貨號：LDP-101規(guī)格：250U優(yōu)勢:世界合成速度最快的PCR酶，是Taq酶的倍,pfu酶的6倍。用途:長距離PCR菌落直接法PCR病毒或細菌的快速檢測