豬脂多糖LPS酶聯(lián)免疫分析

1、豬脂多糖（LPS）酶聯(lián)免疫分析試劑盒利用說明書本試劑盒僅供研究利用。檢測范圍：96T10pg/L-240pg/L利用目的：本試劑盒用于測定豬血清、血漿及相關(guān)液體樣本中脂多糖（LPS）含量。實驗原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中豬脂多糖（LPS）水平。用純化的豬脂多糖（LPS）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入脂多糖（LPS）,再與HRP標(biāo)記的脂多糖（LPS）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，通過完全洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的脂多糖（LPS）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下

2、測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中豬脂多糖（LPS）濃度。試劑盒組成130倍濃縮洗滌液20mlX1瓶7終止液6mlX1瓶2悔標(biāo)試劑6ml義1瓶8標(biāo)準(zhǔn)品(480pg/L)0.5mlX1瓶3悔標(biāo)包被板12孔乂8條9標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5mlX1瓶4單品稀釋液6ml義1瓶10兌明書1份5顯色劑A液6mlX1瓶11:時板膜2張6顯色劑B液6ml義1/瓶12：村封袋1個標(biāo)本要求1 .標(biāo)本搜集后及早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。假設(shè)不能馬上進(jìn)行實驗，可將標(biāo)本放于-20C保留，但應(yīng)幸免反復(fù)凍融2 .不能檢測含NaX3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。操作步驟1

3、.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可依照以下圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。240pg/L5號標(biāo)準(zhǔn)品1503的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入1503標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液120pg/L4號標(biāo)準(zhǔn)品1503的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150川標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液60pg/L3號標(biāo)準(zhǔn)品1503的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入1503標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液30pg/L2號標(biāo)準(zhǔn)品1503的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150M標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液15pg/L1號標(biāo)準(zhǔn)品1503的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入1503標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液2,加樣：別離設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣503，待測樣品孔中先加樣品稀釋液403,然后再加待測樣品10

4、pl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻°3 .溫育：用封板膜封板后置37c溫育30分鐘。4 .配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸馀水30倍稀釋后備用5 .洗滌：警惕揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。6 .加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50pl,空白孔除外。7 .溫育：操作同3.8 .洗滌：操作同5。9 .顯色：每孔先加入顯色劑A50川，再加入顯色劑B50pL輕輕震蕩混勻，37避光顯色15分鐘.10 .終止：每孔加終止液503,終止反映（現(xiàn)在藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。11 .測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測

5、量各孔的吸光度（OD值）0測定應(yīng)在加終止液后15分鐘之內(nèi)進(jìn)行。操作程序總結(jié)：準(zhǔn)備試劑，樣品和標(biāo)準(zhǔn)品加入準(zhǔn)備好的樣品和標(biāo)準(zhǔn)品，37C反應(yīng)30分鉀加入終止液I15分鐘之內(nèi)鋪痂計算計算以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在座標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，依照樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度：再乘以稀釋倍數(shù)：或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。注意事項1 .試劑盒從冷藏環(huán)境中掏出應(yīng)在室溫平穩(wěn)15-30分鐘后方可利用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保留。2 .濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不阻礙結(jié)果。3 .各步加樣均應(yīng)利用加樣器，并常常校對其準(zhǔn)確性，以幸免實驗誤差。一次加樣時刻最好操縱在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦利用排槍加樣。4 .請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，最好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量太高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋必然倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)（XnX5）。5 .封板膜只限一次性利用，以幸免交叉污染。6 .底物請避光保留。7 .嚴(yán)格依照說明書的操作進(jìn)行，實驗結(jié)果判定必需以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).8 .所有樣品，