血細胞計數板相關知識及練習

1、血細胞計數板一、血細胞計數板的構造血細胞計數板被用以對人體內紅、白血細胞進行顯微計數之用，也常用于計算一些細菌、真菌、酵母等微生物的數量，是一種常見的生物學工具。血細胞計數板是由一塊比普通載玻片厚的特制玻片制成的。玻片中有四條下凹的槽,構成三個平臺。中間的平臺較寬,其中間又被一短橫槽隔為兩半,每半邊上面,刻有一個方格網。方格網上刻有9個大方格,其中只有中間的一個大方格為計數室,供微生物計數用。這一大方格的長和寬各為1mm,深度為0.1mm,其體積為0.1mm3。計數室通常有兩種規(guī)格.一種是大方格內分為16中格,每一中格又分為25小格；另一種是大方格內分為25中格,每一中格又分為16小格。但是不

2、管計數室是哪一種構造，它們都有一個共同的特點,即每一大方格都是由16×25=25×16=400個小方格組成,見圖：  血細胞計數板（25格×16格）二、血細胞計數板的使用以計數酵母菌為例1.使用 (1)用血細胞計數板計數酵母菌懸液的酵母菌個數。 (2)樣品稀釋的目的是便于酵母菌懸液的計數,以每小方格內含有4-5個酵母細胞為宜,一般稀釋10倍即可。 (3)將血細胞計數板用擦鏡紙擦凈,在中央的計數室上加蓋專用的厚玻片。 (4)將稀釋后的酵母菌懸液,用吸管吸取一滴置于蓋玻片的邊緣,使菌液緩緩滲入,多余的菌液用吸水紙吸取,捎待片刻,使酵母菌全部沉降到血

3、細胞計數室內。 (5)計數時,如果使用16格×25格規(guī)格的計數室,要按對角線位,取左上,右上,左下,右下4個中格(即100個小格)的酵母菌數.如果規(guī)格為25格×16格的計數板,除了取其4個對角方位外,還需再數中央的一個中格(即80個小方格)的酵母菌數。 (6)當遇到位于大格線上的酵母菌,一般只計數大方格的上方和右方線上的酵母細胞(或只計數下方和左方線上的酵母細胞) 。 (7)對每個樣品計數三次,取其平均值,按下列公式計算每1ml菌液中所含的酵母菌個數。、計算公式： (1)16格×25格的血細胞計數板計算公式:酵母細胞數/ml=100小格內酵母細胞個數/100

4、15;400×10四次方×稀釋倍數 (2)25格x16格的血細胞計數板計算公式:酵母細胞數/ml=80小格內酵母細胞個數/80×400×10四次方×稀釋倍數.血細胞計數板的清潔：血細胞汁數板使用后,用自來水沖洗,切勿用硬物洗刷,洗后自行晾干或用吹風機吹干,或用95%的乙醇,無水乙醇,丙酮等有機溶劑脫水使其干燥.通過鏡檢觀察每小格內是否殘留菌體或其他沉淀物.若不干凈,則必須重復清洗直到干凈為止.三、不足之處血細胞計數板在顯微鏡下直接進行測定。它觀察在一定的容積中的微生物的個體數目，然后推算出含菌數，簡便快捷。但是在計數時包括死活細胞均被計算在內，

5、還有微小雜物也被計算在內。這樣得出結果往往偏高，因此適用于對形態(tài)個體較大的菌體或孢子進行計數。四、相關練習：1在一定量的酵母菌培養(yǎng)液中放人活酵母菌若干，抽樣鏡檢，視野下如圖甲所示（圖中小點代表酵母菌）。將容器放在適宜溫度下恒溫培養(yǎng)5小時后，稀釋100倍，再抽樣鏡檢，視野下如乙圖所示。根據實驗結果判斷，以下敘述正確的是（ ）A培養(yǎng)5小時后，酵母菌種群密度增加200倍左右B探究酵母菌的種群數量變化可以用標志重捕法C用血細胞計數板計數酵母菌數量時只統(tǒng)計方格內菌體D培養(yǎng)5小時后，酵母菌種群數量已經達到K值解析：比較甲、乙兩圖中央兩格酵母菌數，乙是甲的兩倍，乙是稀釋100倍后的鏡檢結果，故培養(yǎng)5小時后，

6、酵母菌種群密度增加200倍左右。標志重捕法適用于活動能力強、體型較大的動物，酵母菌的種群數量計數不能用標志重捕法。用血細胞計數板計數酵母菌數量時應統(tǒng)計方格內和壓在相鄰兩邊上的菌體。培養(yǎng)5小時后，酵母菌種群數量并不能確定是否已經達到K值。答案：A2某研究性學習小組探究酵母菌種群在不同的培養(yǎng)液濃度和溫度條件下種群密度的動態(tài)變化，進行了如下實驗，實驗操作步驟如下：第一步：配制無菌馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)液和活化酵母菌液。第二步：利用相同多套裝置，按下表步驟操作。第三步：用血細胞計數板計數裝置中起始酵母菌數目，做好記錄。第四步：將各裝置放在其他條件相同且適宜的條件下培養(yǎng)第五步：連續(xù)7天，每天隨機抽時間取樣計數

7、，做好記錄?；卮鹣铝袉栴}：(1)改正實驗操作步驟中的一處錯誤： 。(2)某同學第5天在使用血細胞計數板計數時做法如下：振蕩搖勻試管，取1mL培養(yǎng)液并適當稀釋（稀釋樣液的無菌水中加入了幾滴臺盼藍染液）。先將 放在計數室上，用吸管吸取稀釋后的培養(yǎng)液滴于其邊緣，讓培養(yǎng)液自行滲入，多余培養(yǎng)液 ，制作好臨時裝片。顯微鏡下觀察計數：在觀察計數時只記 （填“被”或“不被”）染成藍色的酵母菌。(3)如所使用的血細胞計數板有16個中方格，每1個中方格中有25個小方格，每1個大方格容積為01mm3(1 mL=1000mm3)。請推導出1毫升培養(yǎng)液中酵母菌細胞的計算公式：酵母細胞個數mI= 。解析：(1)實驗中要注

8、意遵循單一變量和對照原則，該實驗中要注意在每天同一時間取樣，否則由于時間不同而影響結果的準確性。(2)計數室的刻度一般有兩種規(guī)格，一種是一個大方格分成16個中方格，而每個中方格又分成25個小方格，另一種是一個大方格分成25個中方格，而每個中方格又分成16個小方格。但無論是哪種規(guī)格的計數板，每一個大方格中的小方格數都是相同的，即16×25=400個小方格。每一個大方格邊長為1mm，則每一大方格的面積為1mm2，蓋上蓋玻片后，載玻片與蓋玻片之間的高度為01 mm，所以計數室的容積為01mm3。在計數時，通常數五個中方格的總菌數，然后求得每個中方格的平均值，再乘上16或25，就得出一個大方

9、格中的總菌數，然后再換算成1mL菌液中的總菌數。(3)計數時，如果使用16格×25格規(guī)格的計數室，要按對角線位，取左上、右上、左下、右下4個中格（即100個小格）的酵母菌數。如果規(guī)格為25格×16格的計數板，除了取其4個對角方位外，還需再數中央的一個中格（即80個小方格）的酵母菌數。對每個樣品計數三次，取其平均值，按下列公式計算每1毫升菌液中所含的酵母菌個數。16格×25格的血細胞計數板計算公式：酵母細胞數/mL=（100個小格內酵母細胞個數/100）×400×104×稀釋倍數。25格×16格的血細胞計數板計算公式：酵母細胞

10、數/mL=(80小格內酵母細胞個數80)×400×1 04×稀釋倍數。答案：(1)第五步中應每天同一時間（定時）取樣(2)蓋玻片 用濾紙（吸水紙）吸去 不被(3)平均每個小方格的酵母菌數×400×104×稀釋倍數3藍藻、綠藻和硅藻是湖泊中常見藻類。某課題組研究了不同pH對3種藻類的生長及光合作用的影響，實驗結果見圖1、圖2。請回答下列問題： (1)根據圖1和圖2分析：3種藻類中pH適應范圍最廣的是 ；在pH=80時，3種藻類中利用C02能力最強的是 。(2)在培養(yǎng)液中需加入緩沖劑以穩(wěn)定pH，其原因是 。(3)在實驗中需每天定時對藻細胞

11、進行取樣計數，請回答以下問題：取出的樣液中需立即加入固定液，其目的是 。在計數前通常需要將樣液稀釋，這是因為 。將樣液稀釋100倍，采用血細胞計數板（規(guī)格為1 mm x l mm x 0.1 mm)計數，觀察到的計數室中細胞分布見圖3，則培養(yǎng)液中藻細胞的密度是 個/mL。答案 (1)綠藻 藍藻 (2)藻類生長代謝會改變培養(yǎng)液pH (3)維持藻細胞數量不變 藻細胞密度過大1×l08解析 (1)比較圖1和圖2中的三條曲線，代表綠藻的曲線最平緩，變化幅度最小，說明pH對綠藻的生長和光合作用速的影響最小，綠藻對pH適應范圍最廣。比較圖2的三條曲線，pH為8.0時，藍藻的光合速率為4.0 um

12、olmg-1mln-1，為三種藻類中最大，C02是光合作用的原料之一，因此其吸收利用C02的能力也就最強。(2)由于三種藻類呼吸作用過程中會產生C02，光合作用過程中需要吸收C02，而C02會導致培養(yǎng)液的pH改變，從而影響三種藻類的生長速率和光合速率，影響實驗結果。因此，實驗前需要在培養(yǎng)液中加入pH緩沖液以維持反應溶液的pH穩(wěn)定。(3)由于上述藻類繁殖周期短，在取樣后到計數這段時間內有些個體很可能完成了增殖，從而影響計數結果，所以取樣后應立即進行殺死固定。利用血細胞計數板進行計數時，每個中格中的細胞數目不能太多，一般不超過5個，否則細胞可能有相互遮蓋現象。如果發(fā)現細胞數目過多，應對培養(yǎng)液進行以

13、1 0倍為單位的稀釋。從圖3知道，血細胞計數板的計數室體積為1 mm xl mm x0.1 mm =0.l(mm)3 = 10 4 mL。每個計數室包括25個中格，每個中格包括16個小格。這種規(guī)格的計數板在計數時，除了取其4個對角處的中格（左上、右上、左下、右下）外，還需再取中央的一個中格，即80個小方格。如果使用計數室為16中格×25小格規(guī)格的計數板，計數時只要取4個對角處的中格（即100個小格）。當遇到位于中格線上的細胞，一般只計數中格的上方和左方線上以及左角處的細胞，也可以只計數中格的下方和右方線上以及右角處的細胞，只要滿足兩線夾一角就行了。對每個樣品應計數三次，取其平均值。計數結果為：左上中格為5個（左線3+內部2），右上中格為4個（全部在內部），中央中格為3個(左線1+內部2