實(shí)驗(yàn)室常用溶液配制

1、實(shí)驗(yàn)室常用溶液的配置Amp +/Kan +:貯存液濃度為 50mg/mL稱取500mg于10mL超純水中溶解，抽濾后1mL分裝到離心管中，于-30°C 凍存X-gal :貯存濃度為20mg/mL稱取20mg X-gal溶于1mL二甲基甲酰胺中，-30C中用錫箔紙包裹后避光保 存，不需要過(guò)濾除菌IPTG :貯存濃度為 L稱取2g IPTG溶于8mL超純水中，用水定容到10mL，用的一次性濾過(guò)器過(guò) 濾除菌，1mL分裝到離心管中并于-30C保存CaCl2 :貯存濃度為1mol/L稱取 CaCl (或者CaCI:2H2O )溶于8mL超純水中，定容到10mL，用0,22um 的一次性濾過(guò)器過(guò)

2、濾除菌，1mL分裝到離心管中，并于-30C保存LB 培養(yǎng)基 :胰蛋白胨( Tyrtone)10g/L酵母提取物( Yeast Extraction)5g/L氯化鈉 10/L根據(jù)經(jīng)驗(yàn)用 NaOH 調(diào)節(jié) PH 為，然后高壓蒸汽滅菌，注意及時(shí)從滅菌鍋中取出 無(wú) DNA 酶的 RNA 酶:將胰 RNA 酶(RNA 酶 A)溶于 10mmoI/L Tris-CI ()、15mmoI/L NaCI 中, 配成10mg/mL的濃度，于100C加熱15min，緩慢冷卻至室溫，分裝成小份保 存于-20 CBradford 貯存液95%乙醇 100mL88%磷酸 200mLG 250室溫下可儲(chǔ)存，一般 4CBra

3、dford 工作液Bradford 貯存液 30mL 雙蒸水 425mL 95%乙醇 15mL 88%磷酸 30mL 儲(chǔ)存于 4C超聲破碎緩沖液KCI 300 mM gKH 2PO4 50 mMgEDTA 1 mMg(EDTA-2Na-2H 2O)g定容至1 L，調(diào)pH至包涵體洗滌液KCl 300 mMgKH 2PO4 50 mMgEDTA 5 mMg(EDTA-2Na-2H 2O)g尿素 2 M 120 gTriton X-100 % 5 ml 脫氧膽酸鈉鹽 % 1 g 定容到1 L 調(diào)pH至勻漿緩沖液( pH= )成分：20mM HEPES = 加入MgCl2 = 加入EDTA = 加入N

4、aCl =0. 58g 加入釩酸鈉 = 加入加 100mL 水進(jìn)行溶解， NaOH 調(diào) pH 至DTT 總體積500 Z加入PMSF 總體積500 Z加入20 yL1%SDS 力卩入 50 yL10% SDS其中DTT和PMSF勻漿之前加入，SDS勻漿之后離心之前加入DTT配成1M母液，溶于乙酸鈉(pH=)中，過(guò)濾除菌PMSF 配成 10mM 母液，溶于異丙醇10*PBSNaCl gKCl gNa2 H PO4gKH2PO4g水定容至1L，使用時(shí)稀釋10倍，用NaOH調(diào)pH至Start with 800 mL of distilled water to dissolve all salts.

5、Adjust the pH to with HCl. Add distilled water to a total volume of 1 liter. The resultant 1x PBS should have a 3?final concentration of 10 mM PO43?, 137 mM NaCl, and mM KClIf used in cell culturing, the solution can be dispensed into aliquots and sterilized by autoclaving (20 min, 121 °C, liqu

6、id cycle). Sterilization may not be necessary depending on its use. PBS can be stored at room temperature or in the fridge. However, concentrated stock solutions may precipitate when cooled and should be kept at room temperature until precipitate has completely dissolved before use.轉(zhuǎn)膜緩沖液（含有 SDS）1L 劑

7、量甘氨酸TrisSDS甲醇 200mL水 800mL 10Xg白電泳緩沖液1L 劑量Tris 堿（Mr甘氨酸（Mr 188gSDS （Mr 10 g加水至 1L用時(shí)稀釋 10 倍即可30丙稀酰胺1L 劑量丙烯酰胺 290gN,N'-亞甲基雙丙稀酰胺10g溶于600ml蒸餾水中，加熱至37C溶解，補(bǔ)足體積至1L,過(guò)濾，且pH不大于1 M Tris-Cl （）g Tris 堿溶解于 400ml 蒸餾水，溶解后調(diào) pH 值，總體積為 500mlM Tris-Cl （）Tris堿溶解于400ml蒸餾水，溶解后調(diào)pH值，總體積為500ml。加約濃鹽酸， 再調(diào)整到 500ml 體積1M DTT用2

8、0mL L乙酸鈉溶液（pH=）溶解DTT，過(guò)濾除菌后分裝考馬斯亮藍(lán) R-250 染液在90mL甲醇：水（1:1）和10mL冰乙酸混合液中溶解考馬斯亮藍(lán) R-250，過(guò)濾后室溫保存蛋白酶 K（20mg/mL）滅菌的 50 mM Tris（ pH ）， mM 乙酸鈣溶解， 配置成濃度為 20 mg/mL 的溶液，-20C保存流式緩沖液 PBS+5% FBS+% sodium azideWater 45 mL20%疊氮鈉 50 Z10*PBS 5 mLFBS mL文獻(xiàn)常見(jiàn)配方： PBS+% BSA(5-10% FBS)+% sodium azide酸酐稱取50 g重鉻酸鉀（KCrO4）溶于80mL雙

9、蒸水中，90C中溶解2h，每半小時(shí) 攪拌促進(jìn)溶解，溶解完成后，加入 1000mL 硫酸，分裝于 2 個(gè)瓶子中。注意使用 過(guò)程中，如果其中一瓶的效果不好，不要混合使用。使用 5次，就要重配。滴管酸酐中浸泡24h，自來(lái)水沖洗至無(wú)明顯可見(jiàn)顏色，自來(lái)水正反面各20遍，雙蒸水正反面各 20 遍，復(fù)印紙中包裹，烘干，加棉花塞和膠頭，單獨(dú)包裝，滅菌， 烘干。雙抗（青霉素和鏈霉素）g鏈霉素和80W U青霉素，一起溶于8ml PBS,單位分別為10A5 ug/ml和10A5 U/ml，然后稀釋10倍，分別為10A4 ug/ml和10八4 U/ml，使用時(shí)，按照1%加入， 分別為 100 ug/ml 與 100

10、U/ml嚴(yán)去甘 I培養(yǎng)基 I2% FCS， 1%雙抗， 128uL/40mL 肝素鈉， RPMI 1640嚴(yán)去甘 II培養(yǎng)基 II% FCS， 1%雙抗， 128uL/40mL 肝素鈉， RPMI 1640完全培養(yǎng)基10% FCS（5% FCS+5% 魚(yú)血清）， 1%雙抗LPS稱取2mg LPS溶于1mL PBS中，叩濾膜過(guò)濾，硅化離心管，-20C保存1*Turk 染液Gen tian Violer （結(jié)晶紫）50mgAcetic Acid （冰乙酸） 5mLWater 495mL1% 巴比妥鈉1g巴比妥鈉溶于100mL的PBS中，充分混勻，避光保存（80 ug/g用量）誘導(dǎo)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞所

11、需溶液硫代硫酸鹽肉湯培養(yǎng)基 （Thioglycollate broth） ：稱取3 g,加入到100 ml純水中，高溫121 C滅菌15 min,然后冷卻到室溫, 再重復(fù) 2 次，進(jìn)行老化操作。此時(shí)已經(jīng)溶解，呈現(xiàn)透明溶液。沖洗液：RPMI 1640 +1%雙抗培養(yǎng)基：RPMI 1640+10% FBS+1% 雙抗氯化銨紅細(xì)胞裂解液(10X的儲(chǔ)存液)參考流式中文網(wǎng)g NH4Cl M)g NaHCO3 (100 mM)g EDTA 二鈉 (10 mM)加水至900 ml,然后用1M的HCI或1M的NaOH調(diào)節(jié)pH值至。最后加水至1 升。該10*的儲(chǔ)存液可在4C保存6個(gè)月。工作液的配制：在使用前蒸餾

12、水稀釋 10 倍即可。(1 份儲(chǔ)存液加上 9 份水)。工 作液用來(lái)裂解紅細(xì)胞。不能以 <10*的濃度儲(chǔ)存,否則會(huì)形成碳酸銨而失效。ACK 裂解液參考文獻(xiàn) Dynamic variation in cycling of hematopoietic stem cells in steady state and inflammation, JEM, 2011ACK (Ammonium-Chloride-Potassium) Lysing BufferAmmonium Chloride 150 mM MwPotassium Bicarbonate 10 mM MwEDTA mM MwACK Ly

13、sis Buffer (1L)Component Amount Final ConcentrationNH4Cl gKHCO3 g 10mMEDTA 200 uladd ddH2O to 800 ml, adjust pH to - , finalize volume to 1L with ddH20Red Blood Cell Lysis Using ACK Lysing Buffer1) Collect whole blood by venipuncture in EDTA-treated collection tubes.2) Pipette 1mL EDTA-treated whole

14、 blood into a tube containing 10-20 mL of ACK Lysing Buffer at room temperature.3) Allow the blood sample plus ACK Lysing Buffer to incubate at room temperature for 3 5 minu tes. Lysis of the red cells should be evide nt duri ng this in cubati on.4) Collect the white blood cells by centrifugation at 300 x g for 5 minutes at room temperature.5) Aspirate the supernatant, leaving approximately 50 uL to avoid disturbing the pellet.6) Gently mix the cells and the remaining fluid, then add 5 mL cold phosphate buffered saline.7) Mix the cells and phosphate buffered saline, and then collect the cell