醫(yī)院環(huán)境衛(wèi)生學(xué)監(jiān)測制度及要求

1、為了合理規(guī)范我院消毒滅菌效果、環(huán)境衛(wèi)生學(xué)監(jiān)測工作，提高監(jiān)測結(jié)果的準(zhǔn)確性、真實(shí)性、可比性，特作如下規(guī)定及要求：一、各科室（部門）對此項(xiàng)監(jiān)測工作，按規(guī)定的要求開展監(jiān)測項(xiàng)目，嚴(yán)格遵守規(guī)定的監(jiān)測時(shí)限，真實(shí)規(guī)范采樣，完整填寫申請單。按時(shí)（每月底前）做好報(bào)表工作。二、各科室（部門）對每月監(jiān)測結(jié)果要進(jìn)行效果評價(jià)并將資料妥善保管。對不合格項(xiàng)目要進(jìn)行原因分析并制定改進(jìn)措施，達(dá)到不斷持續(xù)性改進(jìn)的目的。三、各科室（部門）對此項(xiàng)監(jiān)測工作，要?jiǎng)?wù)真求實(shí)，對不合格項(xiàng)目應(yīng)如實(shí)上報(bào)。避免單純追求合格率，而虛報(bào)、鬧假、走形式。經(jīng)核實(shí)將按獎(jiǎng)罰條例進(jìn)行重獎(jiǎng)、重罰。四、檢驗(yàn)科（細(xì)菌室）保證對全院各科室（部門），監(jiān)測所需合格采樣試管、培

2、養(yǎng)皿的供應(yīng)，并每月做無菌試驗(yàn)。按要求做到培養(yǎng)時(shí)限準(zhǔn)確、中和劑添加正確、報(bào)告結(jié)果規(guī)范。五、檢驗(yàn)科（細(xì)菌室）對各科室（部門）送檢的采樣標(biāo)本有不合格，采樣不規(guī)范，申請單填寫不符合要求的，有權(quán)拒絕出示報(bào)告結(jié)果。六、感染控制科對全院重點(diǎn)科室（部門）的消毒滅菌效果、環(huán)境衛(wèi)生學(xué)監(jiān)測工作負(fù)責(zé)監(jiān)督、并開展隨機(jī)抽查采樣監(jiān)測。各科室應(yīng)積極主動配合，對在隨機(jī)抽查采樣中態(tài)度不端正、找借口、推諉等影響工作正常進(jìn)行的，將按獎(jiǎng)罰條例進(jìn)行扣罰。七、各科室（部門）監(jiān)測時(shí)間具體安排重點(diǎn)科室（部門）：、類科室及相關(guān)科室手術(shù)室、新生兒里間、監(jiān)測時(shí)間：每周一次（周二）。內(nèi)鏡室1w、供應(yīng)室3w、產(chǎn)一科1w、產(chǎn)二科1w、母嬰同室1w、分娩室

3、2w、人流室1w等。監(jiān)測時(shí)間：每月一次。（第1w、2w、3w）、（3*、9*）普通科室（部門）：、類科室及相關(guān)科室外科（換藥室）3w、五官科1w、兒一科3w、兒二科3w、兒三科3w、新生兒科3w、婦一科2w、婦二科2w、檢驗(yàn)科3w、血庫3w、醫(yī)療廢物儲存室2w、放射科2w、病理室1w、外科3w、注射室2w、換藥室2w、泳吧1w、婦科門診1w、兒童樂園3w、兒科門診治療室3w、手足口病診室2w監(jiān)測時(shí)間：每月一次。（第1w、2w、3w）、（3*、9*） 注：有*號的月份加紫外線強(qiáng)度監(jiān)測。八、各科室（部門）監(jiān)測項(xiàng)目、監(jiān)測時(shí)限、采樣方法、評價(jià)（合格）標(biāo)準(zhǔn)，詳見附件。附件：1空氣消毒效果的監(jiān)測采樣時(shí)間：

4、在消毒處理后、操作前進(jìn)行采樣。(1) 采樣方法1)布點(diǎn)方法；室內(nèi)面積30Cm2，設(shè)內(nèi)、中、外對角線3點(diǎn)，內(nèi)、外點(diǎn)布點(diǎn)部位距墻壁IM處；室內(nèi)面積>30M2，設(shè)4角及中央5點(diǎn)，4角的布點(diǎn)部位距墻壁lm處。2)平板暴露法：將普通營養(yǎng)瓊脂平板(直徑為9CM)放在室內(nèi)各采樣點(diǎn)處，采樣高度為距地面1.5m，采樣時(shí)將平板蓋打開，扣放于平板旁，暴露5min，蓋好立即送檢。3) 檢測方法：將送檢的平板置37溫箱培養(yǎng)48h，計(jì)數(shù)菌落數(shù)，并分離致病菌。(2)結(jié)果判定類區(qū)域：細(xì)菌總數(shù)10cfu/m3，未檢出致病菌為消毒合格；類區(qū)域：細(xì)菌總數(shù)200 cfu/m3，未檢出致病菌為消毒合格；類區(qū)域：細(xì)菌總數(shù)500 c

5、fu/m3，未檢出致病菌為消毒合格。注意事項(xiàng)：采樣前，關(guān)閉門、窗，在無人走動的情況下，靜止10分鐘后進(jìn)行采樣。2物品和環(huán)境表面消毒效果監(jiān)測采樣時(shí)間：在消毒處理后進(jìn)行采樣。(1) 采樣方法：用5cm×5cmd 標(biāo)準(zhǔn)滅菌規(guī)格板，放在被檢問題表面，采樣面積100cm2，連續(xù)采樣4個(gè)，用浸有含有相應(yīng)中和劑的無菌洗脫液的棉拭子1支，在規(guī)格板內(nèi)橫豎往返均勻涂擦各5次，并隨之轉(zhuǎn)棉拭子，剪去手接觸部位后，將棉拭子投入10ml含有相應(yīng)中和劑的無菌洗脫液試管內(nèi)，立即送檢。門把手等不規(guī)則物體表面用棉拭子直接涂擦采樣。(2) 結(jié)果判定、類區(qū)域：細(xì)菌總數(shù)5CFU/cm3并未檢出致病菌為消毒合格。類區(qū)域：細(xì)菌總

6、數(shù)10CFU/cm3并未檢出致病菌為消毒合格。類區(qū)域：細(xì)菌總數(shù)15CFU/cm3并未檢出致病菌為消毒合格。母嬰同室、早產(chǎn)兒室、嬰兒室、新生兒室及兒科病房的物體表面不得檢出沙門氏3手的消毒效果監(jiān)測采樣時(shí)間:在消毒后立即采樣。（1）采樣方法1）手的采樣：被檢人五指并攏，用浸有含有相應(yīng)中和劑的無菌洗脫液的棉拭子在雙手指屈面從指根到指端往返涂擦2次（一只手涂擦面積約30 cm3），并隨之轉(zhuǎn)動采樣棉拭子，剪去操作者手接觸部位，將棉拭子投入10ml含有相應(yīng)中和劑的無菌洗脫液試管內(nèi)，立即送檢。2）結(jié)果判定、類區(qū)域工作人員：細(xì)菌總數(shù)5CFU/cm3，并未檢出金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、銅綠假單孢菌為消毒合格。類

7、區(qū)域工作人員：細(xì)菌總數(shù)10CFU/cm3并未檢出金黃色葡萄球菌、大腸桿菌為消毒合格。類區(qū)域工作人員：細(xì)菌總數(shù)15CFU/cm3并未檢出金黃色葡萄球菌、大腸桿菌為消毒合格。母嬰同室、嬰兒室、新生兒室及兒科病房的工作人員手上，不得檢出沙門菌、大腸桿菌、溶血性鏈球菌、金黃色葡萄球菌為消毒合格。4 壓力蒸汽滅菌效果監(jiān)測方法(1) 化學(xué)監(jiān)測法1)化學(xué)指示卡(管)監(jiān)測方法：將既能指示溫度，又能指示溫度持續(xù)時(shí)間的化學(xué)指示管(卡)放人每一待滅菌的物品包中央，經(jīng)一個(gè)滅菌周期后，取出指示管(卡)，根據(jù)其顏色及性狀的改變判斷是否達(dá)到滅菌條件。2)化學(xué)指示膠帶監(jiān)測法：將化學(xué)指示膠帶粘貼于每一待滅菌物品包外，經(jīng)一個(gè)滅菌

8、周期后，觀察其顏色的改變，以指示是否經(jīng)過滅菌處理。3)結(jié)果判定：檢測時(shí)，所放置的指示管(卡)的性狀或顏色均變至規(guī)定的條件，可認(rèn)為該包滅菌合格。4)注意事項(xiàng)：監(jiān)測所用化學(xué)指示劑須經(jīng)衛(wèi)生部批準(zhǔn)，并在有效期內(nèi)使用。(2)生物監(jiān)測法1)指示菌株：指示菌株為嗜熱脂肪桿菌芽胞(ATCC7953或SSIK31株)，菌片含菌量為5.0X105-5.0x106cfu/片，在121±0.5條件下，D值為13-1.9min，殺滅時(shí)間(KT值)19min，存活時(shí)間(ST值)為3.9min。2)培養(yǎng)基：試驗(yàn)用培養(yǎng)基為溴甲酚紫蛋白胨水培養(yǎng)基。3)檢測方法：將兩個(gè)嗜熱脂肪桿菌芽胞菌片分別裝人滅菌小紙袋內(nèi)，置于標(biāo)準(zhǔn)

9、試驗(yàn)包中心部位。滅菌柜室內(nèi),排氣口上方放置一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)包(由3件平紋長袖手術(shù)衣，4塊小手術(shù)巾，2塊中手術(shù)巾，1塊大手術(shù)中，3O塊10cm x 10cm8層紗布敷料包裹成25cm X 30cm x 30cm大小)。手提壓力蒸汽滅菌器用通氣貯物盒(22cm x 13cm x 6cm)代替標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)包，盒內(nèi)盛滿中試管，指示菌片放于中心部位的兩只滅菌試管內(nèi)(試管口用滅菌牛皮紙包封)，將貯物盒平放于手提壓力蒸汽滅菌器底部。經(jīng)一個(gè)滅菌周期后，在無菌條件下，取出標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)包或通氣貯物盒中的指示菌片，投人溴甲酚紫蛋白胨水培養(yǎng)基中，經(jīng)56培養(yǎng)7天(自含式生物指示物按說明書執(zhí)行)，觀察培養(yǎng)基顏色變化。檢測時(shí)設(shè)陰性對照

10、和陽性對照。(4)結(jié)果判定：每個(gè)指示菌片接種的溴甲酚紫蛋白胨水培養(yǎng)基都不變色，判定為滅菌合格；指示菌片之一接種的溴甲酚紫蛋白胨水培養(yǎng)基，由紫色變?yōu)辄S色時(shí)，則滅菌不合格。(5)注意事項(xiàng)：監(jiān)測所用菌片須經(jīng)衛(wèi)生部認(rèn)可，并在有效期內(nèi)使用。5 紫外線消毒效果的監(jiān)測(1 )紫外線燈管輻照度值的測定1)檢測方法：開啟紫外線燈5min后，將測定波長為254nm的紫外線輻照計(jì)探頭置于被檢紫外線燈下垂直距離1m的中央處，待儀表穩(wěn)定后，所示數(shù)據(jù)即為該紫外線燈管的輻照度值。2)結(jié)果判定：普通30w。直管型紫外線燈，新燈輻照強(qiáng)度90Uw/cm2為合格；使用中紫外線燈輻照強(qiáng)度70Uw/cm2對為合格；30W高強(qiáng)度紫外線新

11、燈的輻照強(qiáng)度180 Uw/cm2行為合格。3)注意事項(xiàng)：測定時(shí)電壓220v土5v，溫度20一25，相對濕度<60%，紫外線輻照計(jì)必須在計(jì)量部門檢定的有效期內(nèi)使用。6 醫(yī)療器械滅菌效果的監(jiān)測(1)采樣時(shí)間：在滅菌處理后，存放有效期內(nèi)采樣。 常規(guī)監(jiān)測1)檢測方法：用無菌的方法將擬檢縫合針、針頭、手術(shù)刀片等小件醫(yī)療器械各5支，分別投人5ml的無茵洗脫液中；注射器則取5副在5ml無菌肉湯中分別抽吸5次；手術(shù)鉗、鑷子等大的醫(yī)療器械在無菌操作下取2份以上用沾有無菌洗脫液的棉拭子反復(fù)涂擦采樣，并將棉拭子投入5ml無菌洗脫液中。將采樣管用力振打80次，用無菌吸管吸取lml待檢樣品放于滅菌平皿內(nèi)，加人已熔

12、化的45-48的營養(yǎng)瓊脂15-18ml，邊傾注邊搖勻，待瓊脂凝固，置37溫箱培養(yǎng)48h，計(jì)數(shù)菌落數(shù)。2)結(jié)果判定：平板上無菌生長為滅菌合格。3)注意事項(xiàng)：若消毒因子為化學(xué)消毒劑時(shí)，采樣液中應(yīng)加人相應(yīng)中和劑。7消毒液的監(jiān)測(1) 常用消毒液有效成分測定1)有效氯含量測定配制2mol/L硫酸、10%碘化鉀與0.5%淀粉等溶液。配制并標(biāo)定0.1mol/L硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液。對液體含氯消毒劑，吸取0.1ml放容量瓶中，加蒸餾水至刻度，混勻。對固體含氯消毒劑，稱取1g(精確至0.001g)，置研缽研磨后以蒸餾水溶解，轉(zhuǎn)人100ml容量瓶中(溶水中無殘?jiān)呖擅庋心?。稱量杯及研缽需用蒸餾水洗3次，洗液全部

13、轉(zhuǎn)人容量瓶。向 100ml碘量瓶中加 2mol/L硫酸 10ml，10%碘化鉀溶液 10ml和混勻的消毒劑稀釋液10.0ml。此時(shí)，溶液出現(xiàn)棕色。蓋上蓋并振搖混勻后加蒸餾水?dāng)?shù)滿于碘量瓶蓋緣，置暗處5min.打開蓋，讓蓋緣蒸餾水流人瓶內(nèi)。用硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液(裝于25ml滴定管中)滴定游離碘；邊滴邊搖勻。待溶液呈淡黃色時(shí)加人0.5%淀粉溶液10滴，溶液立即變藍(lán)色。繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失，記錄用去的硫代硫酸鈉溶液總量。重復(fù)測3次，取3次平均值進(jìn)行以下計(jì)算。因lmol/L硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液Iml相當(dāng)于0.03545g有效氯，故可按下式計(jì)算有效氯含量：有效氯含量二 C × V × 0.

14、03545/W × 100%C為硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液物質(zhì)的量濃度(MOL/L)V為滴定用去硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液毫升數(shù);w為碘量瓶中所含消毒劑原藥克數(shù)(液體消毒劑則為毫升數(shù))、2)有效碘含量的測定配制0.5%淀粉溶液。備36%醋酸溶液。配制并標(biāo)定0.1moL/L硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液。向ltolnl碘量瓶中精確加含碘消毒劑樣液50ml及醋酸1滴。用0.led/L硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定(通常用25ML滴定管，若預(yù)計(jì)有效碘濃度>5%時(shí)用50ml滴定管)，邊滴邊搖勻。待溶液呈淡黃色時(shí)加人0.5%淀粉溶液10滴(溶液立即變藍(lán)色)，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失，記錄用去的硫代硫酸鈉溶液總量。重復(fù)測3次，取3

15、次平均值進(jìn)行以下計(jì)算。由于 lmol/L硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液 lml相當(dāng)于 0.1269g有效碘，故可按下式計(jì)算有效碘含量：有效碘含量=C × V × 0.1269/W × 100%”“”“Wc為硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液物質(zhì)的量濃度(mol/L)v為滿定用去硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液毫升數(shù);W為碘量瓶中所含消毒劑原藥克數(shù)(液體消毒劑則為毫升數(shù))3) 戊二醛(C5h 8O2。)含量的測定配制6.5%三已醇胺溶液、0.04%澳酚藍(lán)乙醇溶液與鹽酸羥胺中性溶液(17.5g鹽酸羥胺加蒸餾水75ml溶解，并加異丙醇稀釋至500ml，搖勻。加0.04%澳酚藍(lán)乙醇溶液15rnl，用6.5%三乙醇

16、胺溶液滴定至溶液顯藍(lán)綠色)。配制并標(biāo)定0.25mol/L硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。取戊二醛消毒劑樣液10.0ml(非消毒濃度的濃溶液需用50ml容量瓶稀釋后取樣)置250ml碘量瓶中，精確加 6.5%三乙醇胺溶液 20.0ml與鹽酸羥胺中性溶液0.25ml，搖勻。靜量反應(yīng) lh后，用0.25mol/L硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定。待溶液顯藍(lán)綠色，記錄硫酸溶液用量。同時(shí)，以不含戊二醇的三乙醇胺、鹽酸羥胺中性溶液重復(fù)上述操作(空白對照)。重復(fù)測3次，取3次的平均值進(jìn)行以下計(jì)算。由于 lmol/L硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液 Iml相當(dāng)于 0.1001g戊二醛，因此可按下式計(jì)算成二醛含量：戊二醛含量(w/v)=C × (v2-v

17、1) × 0.1001/w × 100%c為硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液物質(zhì)的量濃度(mol/L);V1與V2分別為樣品與空白對照滴定中用去的硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液毫升數(shù);W為戊二醛樣品毫升數(shù)。4)過氧化氫(H2O2)濃度的測定配制2mol/L硫酸與10%硫酸錳等溶液。另外配制井標(biāo)定0.02rnol/L高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液。取1.0ml過氧化氫樣液，于100ml容量瓶中用蒸餾水稀釋至刻度，混勻。取過氧化氫稀釋液10.0ml，置100ml碘量瓶中，加人2mol/L硫酸20ml與10%硫酸錳3滴，搖勻。用0.02mol/L高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液(裝于25ml滴定管中)滴定至溶液呈粉紅色，記錄高錳酸鉀溶液用量。重復(fù)

18、測3次，取3次平均值進(jìn)行以下計(jì)算。因lmol/L高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液lml相當(dāng)于0.08505g過氧化氫，故可按下式計(jì)算過氧化氫含量：過氧化氫濃度(w/v)=C × V × 0.08505/w × 100%C與V分別為高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液物質(zhì)的量濃度(MOL/L)與滿定中用去的毫升數(shù)w為碘量瓶中所含過氧化氫樣液毫升數(shù)J(5)過氧乙酸(C2H4O3)濃度的測定配制以下溶液：2mol/L硫酸、10%碘化鉀、0.01mol/L高錳酸鉀、10%硫酸錳、3%鋁酸銨與0.5%淀粉。配制并標(biāo)定0.05mol/L硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液。取1.0ml過氧乙酸樣液，于100ml容量瓶中用蒸餾水稀

19、釋至8無菌檢驗(yàn)(1) 無菌檢驗(yàn)前準(zhǔn)備1)洗脫液與培養(yǎng)基無菌性試驗(yàn)：無菌試驗(yàn)前3天，于需一厭養(yǎng)培養(yǎng)基與霉菌培養(yǎng)基內(nèi)各接種Iml洗脫液，分別置30-35與20-25培養(yǎng)72h，應(yīng)無菌生長。2)陽性對照管菌液制備：在試驗(yàn)前一天取金黃色葡萄球菌(26003)的普通瓊脂斜面新鮮培養(yǎng)物，接種1環(huán)至需一厭氧培養(yǎng)基內(nèi)，在30-35培養(yǎng)16-18h備用。(2) 無菌操作：取縫合針、針頭、刀片等小件醫(yī)療器械5件直接浸人6管需一厭氧培養(yǎng)管(其中一管作陽性對照)與4管霉菌培養(yǎng)管C培養(yǎng)基用量為15ml/管。取5副注射器，在5ml洗脫液中反復(fù)抽吸5次，洗下管內(nèi)細(xì)菌，混和后接種需一厭養(yǎng)菌培養(yǎng)管(共6管，其中1管作陽性對照)

20、與霉菌培養(yǎng)管(共4管)。接種量：lml注射器為0.5ml，2ml注射器為Iml，5-10ml注射器為2ml，20-50ml注射器為5ml，培養(yǎng)基用量：接種量為2ml以下為15ml/管，接種量5ml為40ml/管。手術(shù)鉗、鑷子等大件醫(yī)療器械取2件用沾有無菌洗脫液的棉拭子反復(fù)涂抹采樣，將棉拭子投人sml無菌洗脫液中，將采樣液混勻，接種于需一厭氧培養(yǎng)管(共6管，其中1管作陽性對照)與霉菌培養(yǎng)基(共4管)。接種量為lml/管，培養(yǎng)基用量為15ml/管。(3) 培養(yǎng)：在待檢樣品的需一厭氧培養(yǎng)管中，接種預(yù)先準(zhǔn)備的金黃色葡萄球菌陽性對照管液1：1000稀釋1ml，將需一厭氧培養(yǎng)管以及陽性與陰性對照管均于30

21、-35培養(yǎng)5天，霉菌培養(yǎng)管與陰性對照管于20-25培養(yǎng)7天，培養(yǎng)期間逐日檢查是否有菌生長，如加人供試品后培養(yǎng)基出現(xiàn)混濁或沉淀，經(jīng)培養(yǎng)后不能從外觀上判斷時(shí)，可取培養(yǎng)液轉(zhuǎn)種人另一支相同的培養(yǎng)基中或斜面培養(yǎng)基上，培養(yǎng)48-72h后，觀察是否再現(xiàn)混濁或在外面上有無菌落生長，并在轉(zhuǎn)種的同時(shí)，取培養(yǎng)液少量，涂片染色，用顯微鏡觀察是否有菌生長。.(4) 結(jié)果判定：陽性對照在24h內(nèi)應(yīng)有菌生長，陰性對照在培養(yǎng)期間應(yīng)無菌生長，如需一厭氧菌及霉菌培養(yǎng)管內(nèi)均為澄清或更顯混濁但經(jīng)證明并非有菌生長，判為滅菌合格；如需一厭氧菌及霉菌培養(yǎng)管中任何1管顯混濁并證實(shí)有菌生長，應(yīng)重新取樣，分別同法復(fù)試2次，除陽性對照外，其他各管

22、均不得有菌生長，否則判為滅菌不合格。( 5)注意事項(xiàng)1)送檢時(shí)間不得超過6h，若樣品保存于0-4，則不超過24h。2)被采樣本表面積<100cm2取全部表面；被采樣本表面積 100Cm2，取 100cm2。3)若消毒因子為兒學(xué)消毒劑，采樣液中應(yīng)加人相應(yīng)中和劑。9熱原檢查法：.(1)鱟試驗(yàn)本法系利用鱟試劑與細(xì)菌內(nèi)毒素產(chǎn)生凝集反應(yīng)的機(jī)理，以判斷供試品中細(xì)菌內(nèi)毒素的限量是否符合規(guī)定的一種方法。內(nèi)毒素的量用內(nèi)毒素單位(EU)表示。細(xì)菌內(nèi)毒素國家標(biāo)準(zhǔn)品(以下簡稱RSE)系自大腸桿菌提取精致得到的內(nèi)毒素。以細(xì)菌內(nèi)毒素國際標(biāo)準(zhǔn)品為基準(zhǔn)，經(jīng)過協(xié)作標(biāo)定，使其與國際標(biāo)準(zhǔn)品單位含義一致.RSE用于標(biāo)定、復(fù)核、

23、仲裁鱟試劑靈敏度和標(biāo)定細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品(以下簡稱CSE)。CSE系經(jīng)RSE為基準(zhǔn)進(jìn)行標(biāo)定，確定其重量的相當(dāng)效價(jià)。每毫微克(Ing)CSE的效價(jià)應(yīng)不小于 2EU，不大于50EU，并具備均一性和穩(wěn)定性的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。CSE用于試驗(yàn)中空試劑靈敏度復(fù)核、干擾試驗(yàn)及設(shè)置的陽性對照。1)試驗(yàn)準(zhǔn)備：試驗(yàn)所用器皿，需經(jīng)處理，除去可能存在的外源性內(nèi)毒素，常用的方法是250于烤至少lh或180干烤至少2h，也可用其他適宜的方法。試驗(yàn)所用器皿應(yīng)確證無吸附細(xì)菌內(nèi)毒素的作用。試驗(yàn)操作過程應(yīng)防止微生物的污染。2)鱟試劑靈敏度復(fù)核：根據(jù)嘗試劑靈敏度的標(biāo)示值()，將RSE或CSE用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水(與批號鱟試劑24h不產(chǎn)生

24、凝集反應(yīng)的滅菌注射用水，以下簡稱BET水)溶解，在旋渦混合器上混合15min，然后制備成2.0、0.5A和0.25等4個(gè)濃度的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液，每稀釋一步均應(yīng)在旋渦混合器上混合30秒鐘，按“檢查法”項(xiàng)下試驗(yàn)，每一濃度平行做4管，同時(shí)用BET水做4管陰性對照，如最大濃度(2.0)4管為陽性，最低濃度(0.25)4管均為陰性，陰性對照4管均為陰性，按下式計(jì)算反應(yīng)終點(diǎn)濃度的幾何平均值即為鯊試劑靈敏度的測定值()。c=Lg-1(X/4)式中X為反應(yīng)終點(diǎn)濃度的對數(shù)值(Lg)。反應(yīng)終點(diǎn)濃度是系列濃度遞減的內(nèi)毒素溶液中最后一個(gè)呈陽性結(jié)果的濃度。當(dāng)c在0.5-2.0(包括0.5和2.0)時(shí)，方可用于細(xì)菌內(nèi)毒素檢

25、查，并以為該批空鱟劑的靈敏度。每批新的鯊試劑在用于試驗(yàn)前都要進(jìn)行靈敏度的復(fù)核。鱟試劑靈敏度定義為在本檢查法規(guī)定的條件下能檢測出標(biāo)準(zhǔn)溶液或供試品溶液中的最低內(nèi)毒素濃度，用EU/ml表示。3)供試品干擾試驗(yàn)：按“鱟試劑靈敏度復(fù)核”項(xiàng)下試驗(yàn)，用BET水和未檢出內(nèi)毒素的供試品溶液或其不超過最大有效稀釋倍數(shù)(MVD)的稀釋液分別制成合CSE2.0、0.5和0.25等4種濃度的內(nèi)毒素溶液。用BET水和供試品溶液或稀釋液制成的每一濃度平行做4管，另取BET水和供試品溶液或稀釋液各做4管陰性對照。如標(biāo)準(zhǔn)溶液最大濃度(2.0)4管均為陽性，最低濃度(0.25)4管均為陰性，兩種陰性對照8管均為陰性時(shí)，按下式計(jì)算

26、用BET水制成的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液的反應(yīng)終點(diǎn)濃度的幾何平均值(ES)和用供試品溶液或稀釋液制成的內(nèi)毒素溶液的反應(yīng)終點(diǎn)濃度的幾何平均值(ET)。 ES =ig-1(Xs/4) ET二ig-1(XT/4)式中Xs XT分別為用BET水和供試品溶液或稀釋液制成的內(nèi)毒素溶液的反應(yīng)終點(diǎn)濃度的對數(shù)值(Lg)。當(dāng)ET在0.5Es-2.0Es(包括0.5Es和2.0Es)時(shí)測認(rèn)為供武品在該濃度下不干擾試驗(yàn)，否則需進(jìn)行適當(dāng)處理后重復(fù)試驗(yàn)，或使用更靈敏的鱟試劑，對供試品進(jìn)行更大倍數(shù)稀釋，是排除干擾因素的簡單有效的方法。每個(gè)品種要求至少對三個(gè)批號的供試品進(jìn)行干擾試驗(yàn)，若鱟試劑的來源、供試品的配方或生產(chǎn)工藝有變化時(shí)，須重復(fù)進(jìn)行干擾試驗(yàn)。供試品的最大有效稀釋倍數(shù)(MVD)按下式計(jì)算：MVD二L/L為供試品的細(xì)菌內(nèi)毒素限值，以EU/ml表示，當(dāng)正文中的限值以EU/mg或EU/U表示時(shí)，應(yīng)乘以供試品溶液的濃度，再以所得值代人上式。4)檢查法：取裝有0.1ml鱟試劑溶液的10×75mm試管或0.1ml/支規(guī)格的鯊試劑原安瓿6支，其中2 支加人0.1ml或0.2ml供試品溶液(其稀釋倍數(shù)不得超過MVD)作為供試品管，2支分別加人0.1mll或 0.2