附錄一試驗室常用溶液配制

1、一、常用貯液與溶液 （一）常用緩沖液1磷酸緩沖液（1）25下0.1mol/L磷酸鉀緩沖液的配制pH1mol/L K2HPO4(mL)1mol/L KH2PO4(mL)5.88.591.56.013.286.86.219.280.86.427.872.26.638.161.96.849.750.37.061.538.57.271.728.37.480.219.87.686.613.47.890.89.28.094.06.2（2）25下0.1mol/L磷酸鈉緩沖液的配制pH1mol/L Na2HPO4(mL)1mol/L NaH2PO4(mL)5.87.992.16.012.088.06.217.

2、882.26.425.574.56.635.264.86.846.353.77.057.742.37.268.431.67.477.422.67.684.515.57.889.610.48.093.26.8:用蒸餾水將混合的兩種1mol/L貯存液稀釋至1000mL，根據(jù)Henderson-Hasselbalch方程計算其pH值：pH=pK+1g(質(zhì)子受體/質(zhì)子供體)在此，pK=6.86(25)。2電泳緩沖液常用的電泳緩沖液緩沖液使用液濃貯存液（每升）Tris-乙酸（TAE）1×：0.04mol/L Tris-乙酸50×：242g Tris堿0.001mol/L EDTA57

3、.1mL冰乙酸100mL 0.5mol/L EDTA(pH8.0)Tris-磷酸（TPE）1×:0.09mol/L Tris-磷酸10×:10g Tris堿0.002mol/L EDTA15.5mL85%磷酸（1.679g/mL）40mL 0.5mol/L EDTA(pH8.0)Tris-硼酸（TBE）a0.5×0.045mol/L Tris-硼酸5×：54g Tris堿0.001mol/L EDTA27.5硼酸20mL 0.5mol/L EDTA(pH8.0)堿性緩沖液b1×:50mmol/L NaOH1×:5mL 10mol/L

4、NaOH1mmol/L EDTA2mL 0.5mmol/L EDTA(pH8.0)Tris-甘氨酸c1×:25mmol/L Tris5×:15.1g Tris250mmol/L 甘氨酸94g 苷氨酸（電泳級）（pH8.3）0.1% SDS50mL 10% SDS(電泳級)說明：TBE溶液長時間存放后會形成沉淀物，為避免這一問題，可在室溫下用玻璃瓶保存5×溶液，出現(xiàn)沉淀后則予以廢棄。以片都以1×TBE作為使用液（即1：5稀釋濃貯液）進行瓊脂糖凝膠電泳。但0.5×的使用液已具備足夠的緩沖容量。目前幾乎所有的瓊脂糖膠電泳都以1：10稀釋的貯存液作為使

5、用液。進行聚丙烯酰胺凝膠垂直槽的緩沖液槽較小， 故通過緩沖液的電流量通常較大，需要使用1×TBE以提供足夠的緩沖容量。堿性電泳緩沖液應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)配。Tris-甘氨酸緩沖液用SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳。3凝膠加樣緩沖液緩沖液類型6×緩沖液貯存溫度0.25%溴酚藍(lán)40.25%二甲苯青FF40%（W/V）蔗糖水溶液0.25溴酚藍(lán)室溫0.25%二甲苯青FF15%聚蔗糖(Ficoll400)0.25%溴酚藍(lán)40.25%二甲苯青FF30%甘油水溶液0.25%溴酚藍(lán)440%(W/V)蔗糖水溶液堿性加樣緩沖液:300mmol/L NaOH6mmol/L EDTA18%聚蔗糖(Ficoll400)

6、40.15%溴甲酚綠0.25%二甲苯青FF使用以上凝膠加樣緩沖液的目的有三：增大樣品密度；以確保DNA均勻進入樣品孔內(nèi)；使樣品呈現(xiàn)顏色，從而使加樣操作更為便利，含有在電塊中能以可預(yù)知速率向陽極泳動的染料。溴酚藍(lán)在瓊脂糖中移動的速率約為二甲苯青FF的2.2倍，而與瓊脂糖濃度無關(guān)。以0.5×TBF作電泳液時，溴酚藍(lán)在瓊脂糖中的泳動速率約與長300bp的雙鏈線狀DNA相同，而二甲苯青FF的泳動則與長4kb的雙鏈線狀DNA相同。在瓊脂糖濃度為0.5%1.4%的范圍內(nèi)，這些對應(yīng)關(guān)系受凝膠濃度變化的影響并不顯著。選用哪一種加樣染料純屬個人喜惡。但是，對于堿性凝膠應(yīng)當(dāng)使用溴甲酚綠作為示蹤染料，因為

7、在堿性pH條件下其顯色較溴酚更藍(lán)為鮮明。4各種pH值的Tris緩沖液的配制各種pH值的Tris緩沖液的配制 所需pH值（25）0.1mol/L HCl的體積714577244773434744207540376385773667834579320802928.126.28.222.98.319.98.417.28.514.78.612.48.710.38.88.58.97.0某一特定pH值的0.05mol/L Tris緩沖液的配制：將50mL 0.1mol/L Tris堿溶液與上表所示相應(yīng)體積（單位：mL）的0.1mL/L HCl混合，加水將體積調(diào)至100mL（二）常用酶的配制1溶菌酶用水配制

8、成50mg/mL的溶菌酶溶液，分裝成小份并保存于-20。每一小份一經(jīng)使用后便予丟棄。2蛋白水解酶類貯存液貯存溫度反應(yīng)濃度反應(yīng)緩沖液溫度預(yù)處理0.01mol/L Tris(pH7.8)鏈霉蛋白酶a20mg/mL-20（溶于水）1mg/mL0.01mol/L EDTA37自消化b0.5% SDS0.01mol/L Tris(pH7.8)蛋白酶Kc20mg/mL-20（溶于水）50g/mL0.005mol/L EDTA3756無須預(yù)處理0.5% SDSa：鏈霉蛋白酶是從鏈球菌（Streptomyces griseus）中分離到的一種絲氨酸酶和酸性蛋白酶的混合物。b：自消化可消除DNA酶和RNA酶的污

9、染，經(jīng)自消化的鏈酶蛋白酶的配制方法如下：把該酶的粉末溶解于10mmol./L Tris·HCl(pH7.5)、10mmol/L NaCl中，配成20mg/mL濃度，于37溫育1h。經(jīng)消化的鏈霉蛋白酶分裝成小份放在密封試管中，保存-20。c：蛋白酶K是一種枯草蛋白酶類的高活性蛋白酶，從林伯氏白色念球菌（Tritirachium album Limber）中純化得到。該酶有兩個Ca2+結(jié)合位點，它們離酶的活性中心有一定距離，與催化機理并無直接關(guān)系。然而，如果從該酶中除去Ca2+，由于出現(xiàn)遠(yuǎn)程的結(jié)構(gòu)變化，催化活性將喪失80%左右，但其剩余活性通常已足以降解在一般情況下污染酸制品的蛋白質(zhì)。所

10、以，蛋白酶K消化過程中通常加入EDTA（以抑制依賴于Mg2+的核酸酶的作用）。但是，如果要消化對蛋白酶K具有較強耐性的蛋白，如角蛋白一類，則可能需要使用含有1mmol/L Ca2+而不含EDTA的緩沖液。在消化完畢后、純化核酸前要加入EGT（pH8.0）至終濃度為2mmol/L,以鰲合Ca2+。3無DNA酶的RNA酶將胰RNA酶（RNA酶A）溶于10mmol/L Tris·HCl(pH7.5)、15mmol/L NaCl中，配成10mg/mL的濃度，于100加熱15min，緩慢冷卻至室溫，分裝成小份保存于-20。（三）常用抗生素溶液抗生素貯存液a工作濃度濃度保存條件嚴(yán)緊型質(zhì)粒松弛型質(zhì)

11、粒氨芐青霉素50mg/mL(溶于水)-2020g/mL60g/mL羧芐青霉素50mg/mL(溶于水)-2020g/mL60g/mL氯霉素34mg/mL(溶于乙醇)-2025g/mL170g/mL卡那霉素10mg/mL(溶于水)-2010g/mL50g/mL鏈霉素10mg/mL(溶于水)-2010g/mL50g/mL四環(huán)素b5mg/mL(溶于乙醇)-2010g/mL50g/mLa：以水為溶劑的抗生素貯存液通過0.22m濾器過濾除菌。以乙醇為溶劑的抗生素溶液無須除菌處理。所有抗生素溶液均應(yīng)放于不透光的容器保存。b：鎂離子是四環(huán)素的拮抗劑，四環(huán)素抗性菌的篩選應(yīng)使用不含鎂鹽的培養(yǎng)基（如LB培養(yǎng)基）。（

12、四）常用貯存液的配制130%丙烯酰胺溶液【配制方法】將29g丙烯酰胺和1g N，N-亞甲雙丙烯酰胺溶于總體積為60mL的水中。加熱至37溶解之，補加水至終體積為100mL。用Nalgene濾器（0.45m孔徑）過濾除菌，查證該溶液的pH值應(yīng)不大于7.0，置棕色瓶中保存于室溫。【注意】丙烯酰胺具有很強的神經(jīng)毒性并可以通過皮膚吸收，其作用具累積性。稱量丙烯酰胺和亞甲雙丙烯酰胺時應(yīng)戴手套和面具?？烧J(rèn)為聚丙烯酰胺無毒，但也應(yīng)謹(jǐn)慎操作，因為它還可能會含有少量未聚合材料。一些價格較低的丙烯酰胺和雙丙烯酰胺通常含有一些金屬離子，在丙烯酰胺貯存液中加入大約0.2體積的單床混合樹脂（MB-1 Mallinckr

13、odt），攪拌過夜，然后用Whatman 1號濾紙過濾以純化之。在貯存期間，丙烯酰胺和雙丙烯酰胺會緩慢轉(zhuǎn)化成丙烯酰和雙丙烯酸。240%丙烯酰胺【配制方法】把380g丙烯酰胺（DNA測序級）和20g N，N-亞甲雙丙烯酰胺溶于總體積為600mL的蒸餾水中。繼續(xù)按上述配制30%丙烯酰胺溶液的方法處理，但加熱溶解后應(yīng)以蒸餾水補足至終體積為1L。【注意】見上述配制30%丙烯酰胺的說明，40%丙烯酰胺溶液用于DNA序列測定。3放線菌素D溶液【配制方法】把20mg放線菌素D溶解于4mL 100%乙醇中，1：10稀釋貯存液，用100%乙醇作空白對照讀取OD440值。放線菌素D（分子量為1255）純品在水溶液

14、中的摩爾消化系數(shù)為21，900，故而1mg/mL的放線菌素D溶液在440nm處的吸光值為0.182，放線菌素D的貯存液應(yīng)放在包有箔片的試管中，保存于-20?！咀⒁狻糠啪€菌素D是致畸劑和致癌劑，配制該溶液時必須戴手套并在通風(fēng)櫥內(nèi)操作，而不能在開放在實驗桌面上進行，謹(jǐn)防吸入藥粉或讓其接觸到眼睛或皮膚。藥廠提供的作治療用途的放線菌素D制品常含有糖或鹽等添加劑。只要通過測量貯存液在440nm波長處的光吸收確定放線菌素D的濃度，這類制品便可用于抑制自身引導(dǎo)作用。40.1mol/L腺苷三磷酸（ATP）溶液【配制方法】在0.8mL水中溶解60mg ATP,用0.1mol/L NaOH調(diào)至pH值至7.0，用蒸

15、餾水定容1mL，分裝成小份保存于-70510mol/L乙酸酰溶液【配制方法】把770g乙酸酰溶解于800mL水中，加水定容至1L后過濾除菌。610%過硫酸銨溶液【配制方法】把1g過硫酸銨溶解于終量為10mL的水溶液中，該溶液可在4保存數(shù)周。7BCIP溶液【配制方法】把0.5g的5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸二鈉鹽（BCIP）溶解于10mL 100%的二甲基甲酰胺中，保存于482×BES緩沖鹽溶液【配制方法】用總體積90mL的蒸餾水溶解1.07g鹽溶液BESN，N-雙（2-羥乙基）-2-氨基乙磺酸、1.6g NaCl和0.027g Na2HPO4，室溫下用HCl調(diào)節(jié) 該溶液的pH值至6.

16、96、然后加入蒸餾水定容至100mL，用0.22m濾器過濾除菌，分裝成小份，保存于-20。91mol/L CaCl2溶液【配制方法】在200mL蒸餾水中溶解54g CaCl2·6H2O，用0.22m濾器過濾除菌，分裝成10mL小份貯存于-20。【注意】制備感受態(tài)細(xì)胞時，取出一小份解凍并用蒸餾水稀釋至100mL，用Nalgene濾器（0.45m孔徑）過濾除菌，然后驟冷至0。102.5mol/L CaCl2溶液【配制方法】在20mL蒸餾水中溶解13.5g CaCl2·6H2O，用0.22m濾器過濾除菌，分裝成1mL小份貯存于-20。111mol/L二硫蘇糖醇（DTT）溶液【配制

17、方法】用20mL 0.01mol/L乙酸鈉溶液（pH5.2）溶解3.09g DTT，過濾除菌后分裝成1mL小份貯存于-20?！咀⒁狻緿TT或含有DTT的溶液不能進行高壓處理。12脫氧核苷三磷酸（dNTP）溶液【配制方法】把每一種dNTP溶解于水至濃度各為100mmol/L左右，用微量移液器吸取0.05mol/L Tris堿分別調(diào)節(jié) 每一dNTP溶液的pH值7.0（用pH試紙檢測），把中和后的每種dNTP溶液各取一份作適當(dāng)稀釋，在下表中給出的波長下讀取光密度計算出每種dNTP的實際濃度，然后用水稀釋成終濃度為50mmol/L的dNTP，分裝成小份貯存于-70。堿基波長（nm）消化系數(shù)（）L/（m

18、ol·cm）A2591.54×104G2531.37×104C2719.10×103T2607.40×103比色杯光徑為1cm時,吸光度=M130.5mol/L EDTA(pH8.0)溶液【配制方法】在800mL水中加入186.1g二水乙二胺四乙酸二鈉（EDTA-Na·2H2O），在磁力攪拌器上劇烈攪拌，用NaOH調(diào)節(jié) 溶液的pH值至8.0（約需20g NaOH顆粒）然后定容至1L，分裝后高壓滅菌備用。【注意】EDTA二鈉鹽需加入NaOH將溶液的pH值調(diào)至接近8.0，才能完全溶解。14溴化乙錠（10mg/mL溶液）【配制方法】在100

19、mL水中加入1g溴化乙錠，磁力攪拌數(shù)小時以確保其完全溶解，然后用鋁箔包裹容器或轉(zhuǎn)移至棕色瓶中，保存于室溫。【注意】小心：溴化乙錠是強誘變劑并有中度毒性，使用含有這種染料的溶液時務(wù)必戴上手套，稱量染料時要戴面罩。152×HEPES緩沖鹽溶液【配制方法】用總量為90mL的蒸餾水溶解1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g Na2PO4·2H2O、0.2g葡聚糖和1gHEPES，用0.5mol/L NaOH調(diào)節(jié) pH值至7.05，再用蒸餾水定容至100mL。用0.22m濾器過濾除菌，分裝成5mL小份，貯存于-20。16IPTG溶液【配制方法】IPTG為異丙基硫代-D

20、-半乳糖苷（分子量為238.3），在8mL蒸餾水中溶解2g IPTG后，用蒸餾水定容至10mL，用0.22m濾器過濾除菌，分裝成1mL小份貯存于-20。171mol/L乙酸鎂溶液【配制方法】在800mL水中溶解214.46g四水乙酸鎂，用水定容至1L過濾除菌。181mol/L MgCl2溶液【配制方法】在800mL水中溶解203.4g MgCl2·6H2O，用水定容至1L，分裝成小份并高壓滅菌備用?！咀⒁狻縈gCl2極易潮解，應(yīng)選購小瓶（如100g）試劑，啟用新瓶后勿長期存放。19-巰基乙醇（BME）溶液【配制方法】一般得到的是14.4mol/L溶液，應(yīng)裝在棕色瓶中保存于4?！咀⒁狻?/p>

21、BME或含有BME的溶液不能高壓處理。20NBT溶液【配制方法】把0.5g氯化氮藍(lán)四唑溶解于10mL 70%的二甲基甲酰胺中，保存于4。21酚/氯仿溶液【配制方法】把酚和氯仿等體積混合后用0.1mol/L Tris·HCl(pH7.6)抽提幾次以平衡這一混合物，置棕色玻璃瓶中，上面覆蓋等體積的0.01mol/L Tris·HCl(pH7.6)液層，保存于4?！咀⒁狻糠痈g性很強，并可引起嚴(yán)重灼傷，操作時應(yīng)戴手套及防護鏡，穿防護服。所有操作均應(yīng)在化學(xué)通風(fēng)櫥中進行。與酚接觸過的部位皮膚應(yīng)用大量的水清洗，并用肥皂和水洗滌，忌用乙醇。2210mmol/L苯甲基磺酰氟（PMSF）溶液

22、【配制方法】用異丙醇溶解PMSF成1.74mg/mL（10mmol/L），分裝成小份貯存于-20。如有必要可配成濃度高達(dá)17.4mg/mL的貯存液（100mmol/L）?！咀⒁狻縋MSF嚴(yán)重?fù)p害呼吸道粘膜、眼睛及皮膚，吸入、吞進或通過皮膚吸收后有致命危險。一旦眼睛或皮膚接觸了PMSF，應(yīng)立即用大量水沖洗之。凡被PMSF污染的衣物應(yīng)予丟棄。PMSF在水溶液中不穩(wěn)定。應(yīng)在使用前從貯存液中現(xiàn)用現(xiàn)加于裂解緩沖液中。PMSF在水溶液中的活性喪失速率隨pH值的升高而加快，且25的失活速率高于4。pH值為8.0時，20mmol/L PMSF水溶液的半壽期大約為85min，這表明將PMSF溶液調(diào)節(jié) 為堿性（p

23、H>8.6）并在室溫放置數(shù)小時后，可安全地予以丟棄。23磷酸鹽緩沖溶液（PBS）溶液【配制方法】在800mL蒸餾水中溶解8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,用HCl調(diào)節(jié) 溶液的pH值至7.4加水定容至1L，在15lbf/in2(1034×105Pa)高壓下蒸氣滅菌20min。保存于室溫。241mol/L乙酸鉀（pH7.5）溶液【配制方法】將9.82g乙酸鉀溶解于90mL純水中，用2mol/L乙酸調(diào)節(jié) pH值至7.5后加入純水定容到1L，保存于-20。25乙酸鉀溶液（用于堿裂解）【配制方法】在60mL 5mol/L乙酸鉀溶液中加

24、入11.5mL冰乙酸和28.5mL水，即成鉀濃度為3mol/L而乙酸根濃度為5mol/L的溶液。263mol/L乙酸鈉（pH5.2和pH7.0）溶液【配制方法】在80mL水中溶解408.1g三水乙酸鈉，用冰乙酸調(diào)節(jié) pH值至5.2或用稀乙酸調(diào)節(jié) pH值至7.0，加水定容到1L，分裝后高壓滅菌。275mol/L NaCl溶液【配制方法】在800mL水中溶解292.2g NaCl加水定容至1L，分裝后高壓滅菌。2810%十二烷基硫酸鈉（SDS）溶液【配制方法】在900mL水中溶解100g電泳級SDS，加熱至68助溶，加入幾滴濃鹽酸調(diào)節(jié) 溶液的pH值至7.2，加水定容至1L，分裝備用?！咀⒁狻縎DS

25、的微細(xì)晶粒易擴散，因此稱量時要戴面罩，稱量完畢后要清除殘留在稱量工作區(qū)和天平上的SDS，10% SDS溶液無須滅菌。2920×SSC溶液【配制方法】在800mL水中溶解175.3g NaCl和88.2g檸檬酸鈉，加入數(shù)滴10mol/L NaOH溶液調(diào)節(jié) pH值至7.0，加水定容至1L，分裝后高壓滅菌。3020×SSPE溶液【配制方法】在800mL水中溶解17.5g NaCl、27.6g NaH2PO4·H2O和7.4g EDTA，用NaOH溶液調(diào)節(jié) pH值至7.4（約需6.5mL 10mL/L NaOH），加水定容至1L，分裝后高壓滅菌。31100%三氯乙酸溶液【

26、配制方法】在裝有500g TCA的瓶中加入227mL水，形成的溶液含有100%（M/V）TCA。32Tris緩沖鹽溶液（TBS）（25mmol/L Tris）【配制方法】在800mL蒸餾水中溶解8g NaCl、0.2g KCl和3g Tris堿，加入0.015g酚并用HCl調(diào)至pH值至7.4，用蒸餾水定容至1L，分裝后在151bf/in2(1.034×105Pa)高壓下蒸汽滅菌20min，于室溫保存。33X-gal溶液【配制方法】X-gal為5-溴-4-氯-3-吲哚-D半乳糖苷。用二基甲酰胺溶解X-gal配制成的20mg/mL的貯存液。保存于一玻璃管或聚丙烯管中，裝有X-gal溶液的

27、試管須用鋁箔封裹以防因受光照而被破壞，并應(yīng)貯存于-20。X-gal溶液無須過濾除菌。34雜交試驗中用于降低背景的封閉劑試劑用途Denhardt試劑Northern雜交使用RNA探針的雜交單拷貝序列的Southern雜交將DNA固定于尼龍膜上的雜交Denhardt試劑通常配制50×貯存液，過濾后保存于-20?？蓪⒃撡A存液10倍稀釋于預(yù)雜交液（常為含有0.5%SDS和100g/mL經(jīng)變性被打斷的鮭精DNA的6×SSC或6×SSPE）中。50×Denhardt液中含5g聚蔗糖（Ficoll,400型，Pharmacia）、5g聚乙烯吡咯烷酮和5g牛血清白蛋白（

28、組分V”Sigmal），加水至終體積為500mL。BLOTTOGrunstein-Hogness雜交Benton-Davis雜交除單拷貝序列Southern雜交以外的所有Southern雜交斑點印跡1×BLOTT（牛乳轉(zhuǎn)移技術(shù)優(yōu)化液，Bovine Lacto Transfer Technique Optimizer）,是含5%膠脂奶粉和0.02%疊氮鈉的水溶液，應(yīng)保存于4。使用前可用預(yù)雜交液稀釋25倍。BLOTTO不應(yīng)與高濃度的SDS并用，因為后者會導(dǎo)致牛奶中蛋白質(zhì)析出。如果雜交背景不合要求，可在雜交液中加入NP-40至終濃度為1%。BLOTTO不能用作Northern雜交的封閉劑，

29、因為這一封閉劑中可能含有RNA酶，其活性之高使人無法接受。注意：疊氮鈉有毒性，取用時需戴手套小心操作。含疊氮鈉的溶液應(yīng)予明確標(biāo)記。肝素Southern雜交原位雜交肝素（Sigma H-7005，從豬中提取的二級產(chǎn)品或相當(dāng)?shù)燃壍漠a(chǎn)品）用4×SSPE或4×SSC溶解配制成50mg/mL的濃度，保存于4。肝素在含有葡聚糖硫酸酯的雜交液中用作封閉劑的濃度為500g/mL，在不含葡聚糖硫酸酯的雜交液中的濃度為50g/mL。經(jīng)變性并被打斷的鮭精DNAsouthern和Northern雜交把鮭魚精子DNA（Sigma,鹽鈉）溶解于水配制成10mg/mL的濃度，必要時于室溫磁力攪拌24h助

30、溶。把溶液中NaCl的濃度調(diào)至0.1mol/L，并用酚和酚/氯仿各抽提一次，回收水相。合DNA溶液快速通17號皮下注射針頭12次，以剪切DNA。加入2倍體積用冰預(yù)冷的乙醇沉淀DNA。離心回收DNA并重溶于水，配制成10mg/mL的濃度，測定溶液的OD260值并計算出精確的DNA濃度，然后煮沸10min，分裝成小份保存于-20。使用前置沸水浴中加熱5min，然后迅速在冰浴中驟冷。預(yù)雜交液中應(yīng)含有100g/mL經(jīng)變性并被打斷的鮭魚精子DNA354%多聚甲醛【配制方法】稱取40g多聚甲醛，加人800mL 0.2M PBS加熱溶解，并加人少量的NaOH助溶，待多聚甲醛完全溶解后用濃HC1調(diào)節(jié)pH至7.

31、3-7.4，定容至1000mL36熱修復(fù)液【配制方法】貯液：檸檬酸21.01g + 蒸餾水1000mL 檸檬酸三鈉 29.4g +蒸餾水1000mL工作液：取檸檬酸9mL +檸檬酸三鈉41 mL + 450 mL 蒸餾水, 調(diào)PH至6.037礦化誘導(dǎo)液【配制方法】Alpha-MEM 405 mL15% FCS 75mlP/S（雙抗） 5ml10mM AA 5mL L-ascorbic acid-phosphate (0.145g+50mLPBS)1M beta-GP 5mL beta-glucorophosphate (10.8g+50mLPBS)2mM Dexamethsone sodium

32、 phosphate 2.5L2mM L-glutamine 5mL1.8mM KH2PO4 2.5 ml (2.45g+50ml PBS)38500 mL 5X Mix （用于real-time PCR）【配制方法】5X 20mM TRIS 0.5 M TRIS 100 mL5X 50 mM KCl 1M KCl 125 ml5X 3 mM MgCl 1M MgCl2 7.5 ml5X 10 nM Fluorescein 10 uM Fluoresein 2.5 mL5X 5% DMSO DMSO 125 mL ddH2O 141 mLnaturalize mixture to PH 8.6

33、 by 10M NaOH, Then filter by 0.2 m filterBefore using the final 5X mix, 10 mL 5X Mix +50 L 500X SYBR rgreen (to 0.5X cybergreen)3910mg/mL牛血清蛋白(BSA）【配制方法】加100mg的牛血清蛋白（組分V或分子生物學(xué)試劑級，無DNA酶）于9.5mL水中（為減少變性， 須將蛋白加入水中，而不是將水加入蛋白），蓋好蓋后，輕輕搖動，直至牛血清蛋白完全溶解為止。不要渦旋混合。加水定容到10mL，然后分裝成小份貯存于-20。401mol/L二硫蘇糖醇（DTT）【配制方法】

34、在二硫蘇糖醇5g的原裝瓶中加32.4mL水，分成小份貯存于-20。或轉(zhuǎn)移100mg的二硫蘇糖醇至微量離心管，加0.65mL的水配制成1mol/L二硫蘇糖醇溶液411mol/L HEPES【配制方法】將23.8gHEPES溶于約90mL的水中，用NaOH調(diào)pH（6.8-8.2），然后用水定容至100mL。4225mg/mL IPTG【配制方法】溶解250mg的IPTG（異丙基硫代-D-半乳糖苷）于10mL水中，分成小份貯存于-20。 4310SDS（十二烷基硫酸鈉）【配制方法】稱取100gSDS慢慢轉(zhuǎn)移到約含0.9L的水的燒杯中，用磁力攪拌器攪拌直至完全溶解。用水定容至1L。

35、 442.5 Xgal（5-溴-4-氯-3-吲哚-半乳糖苷）【配制方法】溶解25mg的Xgal于1mL的二甲基甲酰胺（DMF）,用鋁箔包裹裝液管，貯存于-20。 45DEPC（焦碳酸二乙酯）處理水 【配制方法】加100L DEPC 于 100mL 水中，使DEPC的體積分?jǐn)?shù)為0.1。在37溫浴至少12h，然后在15 psi 條件下高壓滅菌20min，以使殘余的DEPC失活。DEPC會與胺起反應(yīng)，不可用DEPC處理Tris緩沖液。 46TE（用于懸浮和貯存DNA） 【配制方法】1mL 1mol/L Tris-HCl（pH7.4-8.0，25） 200L 0.5 mol/L EDTA（pH 8.0） 98.8mL  水 47TBS：2.1 Tris緩沖液配方：（0.5 M pH7.6）Tris（三羥甲基氨基甲烷）60.57g1N HCL約420mL雙蒸水加至1000mLTris緩沖液配制方法： 先以少量雙蒸水（300500mL）溶解Tris，加入HCl后，用HCl（1N）或NaOH（1N）將pH調(diào)至7.6， 最后雙蒸水加至1000m