二聚體測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)操作程序

1、文件編號(hào)制定日期文件版次正文頁數(shù)附件份數(shù)第一版5D-二聚體測(cè)定作業(yè)指導(dǎo)書修訂記錄修訂日期版次頁次修訂內(nèi)容第一版全部發(fā)行章批準(zhǔn)審核編制制定部門檢驗(yàn)科文件持有部門：檢驗(yàn)科臨檢室D-二聚體測(cè)定（分析儀器法）1 實(shí)驗(yàn)原理：免疫比濁法當(dāng)混合標(biāo)本中含有D-二聚體時(shí)，聚苯乙烯顆粒包被到單克隆抗體（DD5），與交聯(lián)纖維蛋白降解產(chǎn)物（D-二聚體）的交聯(lián)區(qū)域結(jié)合。交聯(lián)區(qū)域呈立體結(jié)構(gòu)，有兩個(gè)單克隆抗體表位?？傊?，一個(gè)單克隆抗體就能觸發(fā)凝集反應(yīng)，隨后檢測(cè)濁度的增加。儀器在575nm處通過對(duì)濁度改變的監(jiān)測(cè)，將吸光度轉(zhuǎn)換成濃度值，由此獲得樣本中D-二聚體的量。2 標(biāo)本采集2.1 早晨空腹采血(空腹12小時(shí)左右),靜脈采血

2、。2.2 3.8(w/v)枸椽酸鈉0.2ml+靜脈血1.8ml,混勻。3 標(biāo)本存放1小時(shí)內(nèi)(3000r/min15min)分離血漿,室溫放置不超過2小時(shí),28保存不超過4小時(shí)，長(zhǎng)時(shí)間保存需在冰凍條件下，（-70不超過6個(gè)月）,只能凍融1次，在37迅速解凍，以減低凝血因子的消耗，解凍后立即測(cè)試。4 標(biāo)本運(yùn)輸：低溫條件下運(yùn)輸。5 標(biāo)本拒收的標(biāo)準(zhǔn):抗凝劑不符合,采血量不準(zhǔn)確,凝固,溶血,脂血標(biāo)本不能作測(cè)定。6. 實(shí)驗(yàn)材料:6.1 德國(guó)Dade Behring Marburg 公司D-Dimer PLUS乳膠試劑, 用4mlD-二聚體PLUS復(fù)溶液溶解一瓶D二聚體PLUS試劑，室溫（1525）放置約5

3、分鐘，并不時(shí)混勻。將試劑放于儀器相應(yīng)的試劑位置上。未開封試劑28貯存到說明書上有效期，復(fù)溶試劑28保存不超過2天，室溫保存不超過5天。6.2 D-Dimer PLUS加速劑：用5ml蒸餾水溶解，室溫（1525）放置約15分鐘，并不時(shí)混勻。將試劑放于儀器相應(yīng)的試劑位置上。使用前，輕輕振蕩試劑。未開封試劑28貯存到說明書上有效期，復(fù)溶試劑28保存不超過5天。6.3 D-Dimer PLUS復(fù)溶液：液體。用于溶解D-二聚體PLUS 乳膠試劑。未開封試劑28貯存到說明書上有效期，開瓶后試劑28保存不超過12周。6.4 Dade D-二聚體質(zhì)控血漿I/II.用蒸鎦水1ml溶解后放置30分鐘,才能使用或分

4、裝。復(fù)溶后,室溫保存2小時(shí),284小時(shí)。7. 儀器設(shè)備:7.1 儀器名稱: Sysmex CA-1500全自動(dòng)血液凝固分析儀7.2 儀器廠家:日本Sysmex公司7.3 儀器型號(hào):Sysmex CA-15007.4 儀器技術(shù)參數(shù): 速度: 最快檢測(cè)速度180測(cè)試/小時(shí),組合檢測(cè)約140測(cè)試/小時(shí) 試劑位:36個(gè),具冷藏功能。 樣本位:50個(gè),可自動(dòng)連續(xù)添加。7.5 儀器校準(zhǔn)程序: 校準(zhǔn)頻率:當(dāng)方法改變,試劑廠家或試劑批號(hào)改變,儀器維修影響測(cè)定結(jié)果等情況時(shí),必須進(jìn)行校準(zhǔn)。 校準(zhǔn)操作:設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)曲線分析(由儀器提供商指定工程師執(zhí)行)8. 操作步驟:8.1 檢查前準(zhǔn)備: 清空廢液瓶,清空反應(yīng)杯拋棄槽。

5、 添加足夠反應(yīng)杯(不能超過警告線)。 添加清潔液試劑,清洗用蒸餾水等。8.2 開機(jī)先開打印機(jī)再開主機(jī),開機(jī)后儀器自檢,約15分鐘,屏幕上方“Not Ready”變?yōu)椤癛eady”,表示儀器預(yù)熱完成,進(jìn)入系統(tǒng)準(zhǔn)備工作狀態(tài),可進(jìn)行測(cè)定。8.3 輸入工作清單:從主菜單選Work List出現(xiàn)第一架樣本工作清單輸入畫面,選ID No Entry輸入第一個(gè)樣本號(hào)按相應(yīng)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目名稱鍵D-D,并同時(shí)輸入此標(biāo)本的其他測(cè)試項(xiàng)目,若選“凝血四項(xiàng)（PT、APTT、Fbg、TT）”，可按Profile #1組合選項(xiàng)選擇，選中項(xiàng)目相應(yīng)位置標(biāo)記為“”，選完項(xiàng)目后按ENTER確認(rèn)，要?jiǎng)h除某項(xiàng)目時(shí)只需按該項(xiàng)目（按鍵如PT變?yōu)?/p>

6、PT-）即可，用鍵，同樣輸入其他標(biāo)本編號(hào)項(xiàng)目。（快速輸入可用Repeat鍵，輸入重復(fù)標(biāo)本數(shù)，復(fù)制同樣項(xiàng)目的輸入。8.4 放置樣本按8.3所設(shè)好的工作清單順序?qū)㈦x心分離好的樣本放置于樣本架上,并按順序把樣本架排列于Sampler進(jìn)樣器右邊位置(最多同時(shí)放5架共50個(gè)樣本)8.5 按Start鍵開始測(cè)定.蓋好遮光蓋,確認(rèn)儀器為準(zhǔn)備狀態(tài)(顯示屏正上方顯示“Ready”)按Start鍵,進(jìn)樣開始,測(cè)定進(jìn)行,儀器顯示為“Analying”(被選擇項(xiàng)目背景變?yōu)椤啊保藭r(shí)可重復(fù)8.3,8.4,繼續(xù)輸入其他架樣本工作清單,按Rigester,繼續(xù)確認(rèn)測(cè)試任務(wù),添加樣本架繼續(xù)測(cè)試,測(cè)定完成,測(cè)定項(xiàng)目背景變?yōu)椤啊?/p>

7、，打印機(jī)打印出測(cè)定結(jié)果，所有測(cè)定清單完成，系統(tǒng)恢復(fù)“Ready”狀態(tài)。8.6 每日維護(hù):（完成每日的測(cè)定后,關(guān)機(jī)前維護(hù)。） 沖冼針Rinse Probe 清空廢液瓶,和已使用過的反應(yīng)杯。 將試劑架連用試劑放入冰箱。8.7 關(guān)機(jī):先關(guān)主機(jī),再關(guān)打印機(jī)。9檢驗(yàn)結(jié)果的判斷與分析:9.1 儀器測(cè)定D-Dimer的線性范圍在40-2000ug/L,測(cè)定完成后儀器顯示D-D含量等參數(shù)。若不能對(duì)參數(shù)進(jìn)行正確計(jì)算,將出現(xiàn)下列信息:.出現(xiàn)錯(cuò)誤,不能得到分析數(shù)據(jù).不能計(jì)算參數(shù).數(shù)值超出線性范圍.9.2 儀器設(shè)定D-D參考范圍在40-2000ug/L,如果得不到一個(gè)正常數(shù)值,在數(shù)據(jù)的左側(cè)將出現(xiàn)下列標(biāo)記: 出現(xiàn)錯(cuò)誤信

8、息 數(shù)據(jù)高于可報(bào)告的高限10. 質(zhì)量控制:每批樣本同時(shí)測(cè)定兩個(gè)濃度水平(高值和正常值)的質(zhì)控品,以2S為警告限,3S為失控限,繪制質(zhì)控圖,判斷是否在控。質(zhì)控規(guī)則詳見室內(nèi)質(zhì)控作業(yè)指導(dǎo)書。11 臨床意義：檢測(cè)D二聚體交聯(lián)降解產(chǎn)物，即可反映纖溶作用。11.1參考范圍： 500ug/L11.2 D二聚體濃度增加見于各種局灶性、彌漫性、年齡性的血栓性疾病。因此，D二聚體濃度基礎(chǔ)值超出健康人群的范圍，不能排除血栓性疾病。D二聚體檢測(cè)結(jié)果應(yīng)結(jié)合其他實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果和臨床數(shù)據(jù)。D二聚體升高提示出現(xiàn)凝塊，報(bào)告有深靜脈血栓，肺栓塞和彌漫性血管內(nèi)凝血。11.3若D二聚體結(jié)果低于決定水平，可以用陰性預(yù)示值排除血栓可能。

9、12 變異的潛在來源12.1 抗凝劑：草酸鹽、EDTA、肝素不適用于PT檢查12.2 標(biāo)本采集處理不當(dāng),如血與抗凝劑未充分混勻，出現(xiàn)凝塊，混勻時(shí)過分用力，使標(biāo)本溶血，造成結(jié)果變異。12.3 纖溶藥物的影響，如雙香豆素、鏈激酶、尿酶等。12.4 超劑量使用肝素使凝固時(shí)間延長(zhǎng)。12.5 FDP增加使凝固時(shí)間延長(zhǎng)。12.6 某些藥物，如口服避孕藥、雌激素、無門冬跣胺酶、鈉絡(luò)酮等影響測(cè)試結(jié)果。13. 操作注意事項(xiàng):（干粉試劑及質(zhì)控血漿溶解）13.1 確認(rèn)溶劑類型，一般溶解液包括：蒸餾水、生理鹽水、緩沖液、廠家特定溶解液，必須按說明書要求使用。13.2 溶解時(shí)，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)容器，保證干粉完全溶解，避免劇烈振

10、蕩。13.3 復(fù)溶后，室溫放置15-30分鐘方可使用。14. 儀器維護(hù)與保養(yǎng)14.1 日常維護(hù)（見8.6）14.2 每周維護(hù) 液路沖洗：儀器在“Ready”狀態(tài)下，從主菜單按 Special Menu按Maintain按RinsePrepare 按 Execute 鍵運(yùn)行此程序完成后按 Return 返回。 清潔儀器：定期用擦布擦干凈儀器內(nèi)外，包括試劑槽。14.3 需要時(shí)維護(hù)： 調(diào)整壓力：儀器在“Ready”狀態(tài)下，以主菜單按Special Menu按Maintain 按Pressure Adjust 鍵，顯示壓力是否在其調(diào)整范圍內(nèi)？若不在，則打開儀器右側(cè)相應(yīng)壓力調(diào)整旋鈕，旋動(dòng)調(diào)整好壓力，再鎖緊旋鈕。 更換燈泡：關(guān)機(jī)從儀器右側(cè)取下燈泡外蓋及內(nèi)蓋換上好的燈泡裝上內(nèi)外蓋從主菜單按Special Menu再按Maintain按 Calib lamp確認(rèn)關(guān)上遮光蓋，按Execute運(yùn)行調(diào)整程序。 更換保險(xiǎn)管：關(guān)機(jī)從儀器左側(cè)旋下保險(xiǎn)蓋更換上好的保險(xiǎn)管裝上保險(xiǎn)管蓋。1