1型原膠原氨基末端前肽

1、文件已閱聲明表«Procedurecirculationform»文件名稱：總1型膠原氨基端延長(zhǎng)肽檢測(cè)作業(yè)指導(dǎo)書表號(hào):KM-MP03?02?02已閱聲明：本人承諾已了解此文件中的相關(guān)內(nèi)容，今后的工作中將嚴(yán)格按照此文件執(zhí)行，不隨意對(duì)外傳閱此文件，如有因與文件不相符的操作，責(zé)任由本人承擔(dān)。（Ihaveunderstoodtherelevantcontentofthedocument.!willkeepthedocumentsecretandberesponsibletoproperlyperformprocedure）閱讀人簽名表姓名（NAME）職務(wù)(POSITION)簽名(S

2、IGNATURE)簽名日期（DATE）文件修改記錄頁(yè)«Procedureamendmentform»表號(hào):KM-MP03.02.03頂俏內(nèi)容更改說(shuō)明（Descriptionof審批人批準(zhǔn)生效日期NO.(PageModifiedcontents)(Approv(Approved)edby)date)1換版文件信息表(Procedureinformationform)表號(hào)：KM-MP03?02?04文件名稱(Titleofdocument)(Doc.Code)總1型膠原氨基端延長(zhǎng)肽檢測(cè)作業(yè)指導(dǎo)書(KM-SOP-0300?363)版本號(hào)(EditionNo.)Edition3.0

3、生效日期(Operativedate)2008-03-13文控部門(Doc.ControlDept.)頭驗(yàn)至義控至回顧日期/簽名(Reviewdate/signature)回顧日期(Reviewdate)回顧人員簽名(Signature)替代文件（Replaces）總1型膠原氨基端延長(zhǎng)肽檢測(cè)作業(yè)指導(dǎo)書（Edition2.0)存放地點(diǎn)（Location）/持有人（Holder）No.Location（Holder）1實(shí)驗(yàn)室文控室（陳彬）2化學(xué)發(fā)光室（段學(xué)成）No.Location(Holder)作者簽名/日期(Authorsignature/date)付正乾審批人簽名/日期(Authorized

4、by:Signature/Date)陳建波接收人簽名/日期（Receiptor/Date）副本數(shù)(CopyNo.)八件是第個(gè)文件拷貝/共發(fā)放2個(gè)文件拷貝。總1型膠原氨基端延長(zhǎng)肽檢測(cè)檢測(cè)作業(yè)指導(dǎo)書(Totalprocollagentype1amino-terminalpropeptide(t-p1np)byRochecobase601)原理(Testprinciple)“三明治”法，總檢測(cè)時(shí)間：18分鐘。第一次孵育：20M標(biāo)本和一份生物素抗P1NP特異性單克隆抗體一起孵育。第二次孵育：在加入鏈親和素包被的微粒和一份釘復(fù)合體標(biāo)記的P1NP特異性單克隆抗體后，反應(yīng)形成一“三明治”樣抗原-抗體復(fù)合體，

5、復(fù)合體在鏈親和素和生物素相互作用下形成固相。將反應(yīng)液吸入檢池中，檢測(cè)池中的微粒通過(guò)電磁作用吸附在電極表面。未結(jié)合的物質(zhì)通過(guò)ProCell除去。在電極上加以一定的電壓，使復(fù)合體化學(xué)發(fā)光，用光電倍增器檢測(cè)發(fā)光的強(qiáng)度。1 樣本收集和儲(chǔ)存(SpecimenCollectionandStorage):樣本類型(sampletype):血活(serum)必須用標(biāo)準(zhǔn)試管或內(nèi)有分離膠的試管收集。使用肝素鋰和EDTA-K3血漿(plasma)。拒收標(biāo)本(Specimenrejection)：嚴(yán)重溶血、脂血、或用疊氮鈉防腐標(biāo)本。標(biāo)本用量(volume):200uL血活/血漿儲(chǔ)存條件(samplestorageco

6、nditions):在15-25°C可保存24小時(shí)；在2-80可保存5天，C在-20°C可保存6個(gè)月。樣品最多可以凍融5次。2 試劑(Reagent):2.1 Rochecobase601原裝試劑。2.1.1 試劑內(nèi)組份(components):I鏈霉親和素包被的微粒nR1生物素化的抗totalP1NP抗體mR2三聯(lián)毗噬釘標(biāo)記的抗totalP1NP抗體IV使用說(shuō)明書，分英語(yǔ)、法語(yǔ)、德語(yǔ)、葡萄牙語(yǔ)、西班牙語(yǔ)各一份。3.1.2未隨試劑盒提供的組分-ElecsystotalP1NP定標(biāo)液(P1NPCalSet)-Elecsys骨標(biāo)志物質(zhì)控品(PreciControlBone)-E

7、lecsys系統(tǒng)緩沖液(ProCellM)-Elecsys測(cè)量池活洗液(CleanCellM)-Elecsys系統(tǒng)緩沖液/測(cè)量池活洗液預(yù)熱杯(PC/CC-Cup)-Elecsys反應(yīng)杯/吸樣頭盒(AssayCups/AssayTipsCombimagazineM)-Elecsys廢物盒(wasteliner)-Elecsys系統(tǒng)活洗液支架(SysCleanAdapterM)-Elecsys系統(tǒng)活洗液(SysClean)3.2試劑準(zhǔn)備：將試劑從冰箱中取出并平衡至室溫；不同批號(hào)的試劑不能混用；新試劑與前一批號(hào)試劑不同，則需做樣本結(jié)果的比對(duì)，并記錄，差異在允許范圍內(nèi)方可使用oPutreagentfr

8、omrefregeratorytoroomtemperatureforpropertime;Newreagentlotsmustbetestedinparallelwitholdlotsbeforeorconcurrentlywithbeingplacedinservicetoensurethatthecalibrationofthenewlotofreagenthasmaintainedconsistentresultsforpatientspecimens.Recodtheresults.3 儀器(Instrument):Rochecobase601。3.1 儀器準(zhǔn)備(prepareapp

9、aratus)：使用前確保儀器水通道、液體垃圾通道暢通，保證系統(tǒng)活洗液(SysClean)、測(cè)量池活洗液(CleanCellM)、反應(yīng)杯/吸樣頭盒(AssayCups/AssayTipsCombimagazineM)、廢物盒(wasteliner)、系統(tǒng)緩沖液(ProCellM)的足夠。然后開(kāi)機(jī)，在儀器的試劑盤中加入所需的試劑。4 安全防范(SafetyPrecautions):操作時(shí)必須穿戴手套和工作服；工作后的臺(tái)面應(yīng)消蠹擦洗；用過(guò)的加樣槍頭等耗材應(yīng)作為醫(yī)用垃圾處理；為了避免形成氣溶膠，所有樣品盡可能不要在空氣當(dāng)中暴露太長(zhǎng)時(shí)間；遇到樣本灑出，被污染的區(qū)域應(yīng)立即用次氯酸鈉溶液活洗，擦拭用的物品

10、應(yīng)丟棄在標(biāo)有生物污染的垃圾筒中。5 校準(zhǔn)(CalibrationifApplicable):校準(zhǔn)品儲(chǔ)存和使用(calibrationmaterialstorageandusage):Rochecobase601原裝校準(zhǔn)品。要求在有效期內(nèi)使用，過(guò)期的校準(zhǔn)液應(yīng)停止使用，保存丁2-8C可穩(wěn)定至U有效期。Stopusingoverduecalibrationmaterial.useitwithinexpirationdate,storagein2-8C配制(calibrationmaterialredissolve):用復(fù)溶專用加樣槍準(zhǔn)確吸取1mL去離子水丁瓶中，溶解靜置3小時(shí)，混勻并用有蓋小子彈頭分

11、裝200此/個(gè)，標(biāo)明配制日期，校準(zhǔn)品批號(hào)，配制人以及有效日期，丁20C凍存?zhèn)溆谩abelconfectingdate,calibrationlot,personwhoconfected,expirationdate.then復(fù)溶后校準(zhǔn)品成分的穩(wěn)定性：保存丁(-20)C,可穩(wěn)定2個(gè)月。6.2每批試劑必須用新鮮試劑(試劑經(jīng)儀器注冊(cè)24小時(shí)以內(nèi))標(biāo)定一次，如再次標(biāo)定即根據(jù)下列要求：試劑批號(hào)改變(Reagentlotchanges)同一批號(hào)的試劑盒在分析儀上使用超過(guò)1個(gè)月(28天)同一試劑盒在分析儀上使用超過(guò)7天根據(jù)需要：如質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)超過(guò)額定的限度。Recalibrationbasedonqualit

12、ycontrolproblem6.3步驟：當(dāng)使用新批號(hào)試劑之前，都需要對(duì)試劑盒進(jìn)行校準(zhǔn)。在校準(zhǔn)(clibration)菜單中編輯校準(zhǔn)液的資料，在兩個(gè)樣本管中分別加入至少200ul的1,2校準(zhǔn)品并放到已指定位置的校準(zhǔn)架中，放入樣本通道中。然后在計(jì)算機(jī)屏幕上選擇START項(xiàng)，再次點(diǎn)擊START界面中的綠色START健。6.4結(jié)果判斷：儀器會(huì)自動(dòng)提示是否通過(guò)校準(zhǔn)。如果未通過(guò)會(huì)有相應(yīng)的原因解釋以及解決方法的指導(dǎo)。校準(zhǔn)后必須及時(shí)做質(zhì)控且須獲得通過(guò)6.5校準(zhǔn)周期：質(zhì)控在控的情況下一個(gè)月內(nèi)對(duì)同批號(hào)試劑有效。如果質(zhì)控值提示有需要校準(zhǔn)時(shí)，應(yīng)重新校準(zhǔn)。6 操作過(guò)程(ProceduralSteps):7.1樣本準(zhǔn)備

13、：先檢查標(biāo)本是否合格(標(biāo)本與作業(yè)指導(dǎo)書上標(biāo)本要求是否一致)，核對(duì)驗(yàn)單上的條碼和標(biāo)本上的條碼是否一致，按樣本每天唯一號(hào)原則進(jìn)行編號(hào)。將帶有編號(hào)的標(biāo)本離心取血活/血漿，將待測(cè)物加入相應(yīng)的樣本管。7.2取出空樣本架，將含有血活/血漿樣本管按先后順序加入樣品架中，將樣品架推入樣品槽中。因需要一定量樣本做底，每個(gè)樣品管至少加入樣品200ul(樣本用量75ul)。7.3在WORKLIST界面中輸入實(shí)驗(yàn)號(hào)，指定totalP1NP項(xiàng)目。結(jié)果出來(lái)后，在WORKLIST菜單中選擇需要打印的結(jié)果，打印后作為原始記錄加以保留，并且操作者要簽上名字及操作日期。7.4數(shù)據(jù)聯(lián)機(jī)入系統(tǒng)(senddatatoLIS):計(jì)算機(jī)：

14、設(shè)備管理T接口管理T點(diǎn)擊羅氏全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光儀T點(diǎn)擊開(kāi)始，出現(xiàn)預(yù)處理窗口t儀器：選擇需要傳送結(jié)果TSEND傳送T回到計(jì)算機(jī)預(yù)處理窗口T傳送。7.5數(shù)據(jù)審核(datacheckup):在確保儀器與電腦數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)正常聯(lián)機(jī)的情況下(即數(shù)據(jù)傳送和接收無(wú)中斷)，仔細(xì)核對(duì)每一個(gè)數(shù)據(jù)有無(wú)錯(cuò)誤(如：誤傳、漏傳)，是否與臨床診斷相吻合，如發(fā)現(xiàn)異常情況，應(yīng)仔細(xì)核對(duì)實(shí)驗(yàn)號(hào)與樣本架號(hào)，原始導(dǎo)出結(jié)果與系統(tǒng)結(jié)果是否對(duì)應(yīng)等，如有必要，復(fù)查該結(jié)果。7 質(zhì)量控制（Qualitycontrol）:室內(nèi)質(zhì)控：使用羅氏骨代謝通用質(zhì)控品（PCBONE）做質(zhì)控，每天至少做兩個(gè)濃度的值。兩個(gè)濃度要求符合本項(xiàng)目要求。當(dāng)質(zhì)控達(dá)不到要求時(shí)，分析

15、原因，或重新定標(biāo)；仍不能滿足要求時(shí)，則做期間核查，檢查儀器是否正常。室內(nèi)質(zhì)控操作過(guò)程。提前在儀器內(nèi)設(shè)定好質(zhì)控的靶值，SD值，在CONTROL菜單中指定質(zhì)控架號(hào)、申請(qǐng)質(zhì)控項(xiàng)目，質(zhì)控品每管至少200ul質(zhì)控品。拒絕標(biāo)準(zhǔn)：P1NP最大允許誤差A(yù)LE為25%,室內(nèi)質(zhì)控CV為2.09%（低值），2.13%（高值），偏移為（低值）SD=1.52g/L高值）SD=18.42g/L根據(jù)公式計(jì)算SEc=（ALE-Bias）/CV-1.65，選擇的質(zhì)控規(guī)則為1-3s,2-2s,R4s,10x,當(dāng)質(zhì)控失控時(shí)，應(yīng)按照室內(nèi)質(zhì)量控制程序處理。9.1 9線性范圍分析測(cè)試范圍（AMR）:5-1200g/L-51200g/L）

16、病人結(jié)果報(bào)告范圍（CRR）:5-6000g/L-6000g/L）當(dāng)結(jié)果超過(guò)AMR時(shí)，需要稀釋，稀釋材料（dilutionmaterial）:采用羅氏通用稀釋液最大稀釋倍數(shù)（dilutiontimes）:1:5超出檢測(cè)限度需要稀釋的樣品，要重新申請(qǐng)?jiān)擁?xiàng)目在Dilution中指定并指定稀釋倍數(shù)（最大1:5）,.儀器會(huì)自動(dòng)稀釋檢測(cè)按項(xiàng)目打出結(jié)果，作為原始記錄加以保留。10 計(jì)算(CalculationsifApplicable)：無(wú)需人工計(jì)算。11 參考范圍(ExpectValues):12 絕經(jīng)前：15.1358.59pg/ml絕經(jīng)后：所有女性：16.2773.87g/L接受HRT治療：14.28

17、58.92g/L未接受HRT治療：20.2576.31g/L結(jié)果解釋(InterpretationofResults):可以直接報(bào)告所檢測(cè)結(jié)果，無(wú)須進(jìn)行結(jié)果解釋。13 方法的局限性(MethodLimitations):接受過(guò)小鼠單抗治療或體內(nèi)診斷的病人會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性反應(yīng)。檢測(cè)結(jié)果可能與一些影響骨吸收的臨床狀況相混淆，如甲狀旁腺功能亢進(jìn)或甲狀腺功能亢進(jìn)。在預(yù)測(cè)骨質(zhì)疏松進(jìn)程、骨折危險(xiǎn)度、甲狀旁腺功能亢進(jìn)或甲狀腺功能亢進(jìn)等方面，本試驗(yàn)的應(yīng)用尚待證實(shí)。13.1 精密度(Precision)：批內(nèi)精密度CV%<2.67、批問(wèn)精密度CV%<2.130(批內(nèi)精密度CV%<2.9、批間精密度

18、CV%<3.7)靈敏度(Sensitivity):<5.00ng/ml(<5.00ng/ml)13.3特異性(Specificity):所使用的單克隆抗體與如下項(xiàng)目交義反應(yīng)均<1%：6-CrossLaps,N-MID?Osteocalcin,parathyroidhormone(PTH),and25-OHvitaminD。13.4 分析測(cè)試范圍(AMR):5-1200g/(5-1200g/L)病人結(jié)果報(bào)告范圍(CRR):5-6000g/L四000g/L)干擾物質(zhì)(InterferingSubstances):膽紅素影響(bilirubin):樣本中膽紅素的濃度小丁650mg/L,在實(shí)驗(yàn)允許的精密度范圍內(nèi)對(duì)結(jié)果沒(méi)有影響。溶血影響(hemolysis):樣本中血紅蛋白的濃度小丁1.8g/dl,在檢測(cè)允許的精密度范圍內(nèi)對(duì)結(jié)果沒(méi)有影響。脂血影響(Lipemia):樣本中內(nèi)脂的濃度小丁2000mg/dL,在檢測(cè)允許的精密度范圍內(nèi)對(duì)結(jié)果沒(méi)有影響生物素影響(biotin):樣本中生物素的濃度小丁50ng/ml,在檢測(cè)允許的精密度范圍內(nèi)對(duì)結(jié)果沒(méi)有影響13.5 注意事項(xiàng)(Notices):僅供體外診斷使用(useonlyforinvitrodiagnosis)試劑：28