醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)--微生物的種類

1、一.微生物的種類1 .非細(xì)胞型微生物：無典型細(xì)胞結(jié)構(gòu),無產(chǎn)生能量的酶系統(tǒng),只能在細(xì)胞內(nèi)生長,NC為DNA/RNAEX:virus2 .原核細(xì)胞型微生物：原始核呈環(huán)狀裸露DNA無核膜核仁,細(xì)胞器只有核糖體.DNARNA同時(shí)存在分古生菌EX:產(chǎn)甲烷菌,嗜熱嗜酸菌細(xì)菌EX:細(xì),螺旋,線,立克,支,毛衣3 .真核細(xì)胞型微生物：細(xì)胞核分化程度高,有核膜核仁.細(xì)胞器完整EX:真菌二,格蘭染色的細(xì)菌細(xì)胞壁比擬細(xì)胞壁G+紫色G-紅色強(qiáng)度較堅(jiān)韌較吮松厚度厚20-80nm薄,10-15nm肽聚糖層數(shù)多,可達(dá)50層少,1-2層肽聚糖含量多,占細(xì)胞壁干重50%-80%少,占細(xì)胞壁干重5%-20%糖類含量多,約45%少

2、,15%-20%脂類含量少,1%-4%多,11%-22%磷壁酸+-外膜一+對PENICILLIN的敏感性敏感不敏感三.格蘭染色法1 .標(biāo)本固定2 .先用堿性染料結(jié)晶紫初染3 .再加碘液媒染,使之生成結(jié)晶紫-碘復(fù)合物此時(shí)細(xì)菌均染成深紫色4 .用95%乙醇脫色,有些細(xì)菌被脫色,有些不能.5 .最后用稀釋復(fù)紅或沙皇復(fù)染.不被乙醇脫色仍保存為紫色的為G+菌,被乙醇脫色,復(fù)染成紅色的為G-菌,革蘭染色法在鑒別細(xì)菌,選擇抗菌藥物,研究細(xì)菌致病性等方面有重要意義.四.細(xì)菌生長繁殖條件一,營養(yǎng)物質(zhì)1 .水,需營養(yǎng)物質(zhì)必須先溶于水2 .碳源,合成菌體組分以及獲得能量的主要來源,病菌主要從糖獲得碳源.3 .氮源,

3、作為菌體成分的原料.4 .無機(jī)鹽,1.構(gòu)成有機(jī)化合物,成為菌體的成分2.作為酶的組成局部,維持酶的活性3.參與能量的儲存和轉(zhuǎn)運(yùn)4.調(diào)節(jié)菌體內(nèi)外滲透壓5.某些元素與細(xì)菌的生長繁殖和治病作用密切相關(guān).5 .生長因子,許多細(xì)菌需要自身不能合成的生長因子.二,氫離子濃度PH三,溫度37四,氣體五,滲透壓五.細(xì)菌合成代謝產(chǎn)物1.熱源質(zhì)2.毒素與侵襲性酶3.色素4.抗生素5.細(xì)菌素6.維生素6 .常用濕熱滅菌法1 .巴氏消毒法2.煮沸法3.流動蒸汽消毒法4.間歇蒸汽滅菌法5.壓力蒸汽滅菌法7 .正常菌群與時(shí)機(jī)致病菌1 .正常菌群：正常寄居在宿主體內(nèi),對宿主無害而有利的微生物群的總稱.2 .正常菌群的生理作

4、用：1.生物拮抗2.營養(yǎng)作用3.免疫作用4.抗衰老作用.3 .時(shí)機(jī)致病菌：當(dāng)正常菌群與宿主間生態(tài)平衡失調(diào)時(shí),一些正常菌群會成為機(jī)會致病菌而引起宿主發(fā)病.4 .時(shí)機(jī)致病條件：1.正常菌群寄居部位改變2.宿主免疫功能低下3.菌群失調(diào)八.內(nèi)外毒素區(qū)別區(qū)別要點(diǎn)外毒素內(nèi)毒素來源G+與局部G-G-編他基因質(zhì)粒,前噬菌體,染色體基因染色體基因存在部位活菌分泌,少數(shù)崩解后釋出細(xì)胞壁成分,菌裂解后釋出化學(xué)成分蛋白質(zhì)脂多糖穩(wěn)定性60-80,30min破壞160,2-4h破壞毒性作用強(qiáng),對組織器官有選擇性毒害效應(yīng),引起特殊臨床表現(xiàn)較弱,毒效應(yīng)大致相同,發(fā)熱,白細(xì)胞增多,微循環(huán)障礙,休克,DIC抗原性強(qiáng),刺激機(jī)體產(chǎn)生

5、抗毒素,甲醛液脫毒形成類毒素弱,刺激機(jī)體產(chǎn)生的中和抗體作用弱,甲醛脫毒不產(chǎn)生類毒素九.致病性葡萄球菌的鑒定1.能產(chǎn)生金黃色色素2.有溶血性3.凝固酶試驗(yàn)陽性4.耐熱核酸酶試驗(yàn)陽性5.能分解甘露醇產(chǎn)酸十.致病性葡萄球菌致病物質(zhì)及所致疾病毒力因子生物學(xué)活性一.細(xì)胞外表結(jié)構(gòu)莢膜/粘液層抑制吞噬和單核細(xì)胞增殖,促進(jìn)粘附肽聚糖抑制炎性應(yīng)答,抑制吞噬,啟毒素樣性磷壁酸與纖連蛋白結(jié)合,介導(dǎo)粘附蛋白A與IgG的Fc區(qū)反響,抑制吞噬,抗補(bǔ)體.系溶素溶解細(xì)胞膜,有細(xì)胞毒作用表皮溶解素引起皮膚剝脫性皮炎殺白細(xì)胞素PV破壞吞噬細(xì)胞,增強(qiáng)侵襲力腸毒素引起嘔吐,腹瀉,超抗原作用毒素休克綜合征毒素引起多器官,多系統(tǒng)的功能紊

6、亂,超抗原作用三.酶類凝固酶使血漿纖維蛋白原轉(zhuǎn)為纖維蛋白,使血漿凝固透明質(zhì)酸降解結(jié)締組織的透明質(zhì)酸葡激酶水解纖維素脂酶水解脂肪DNA酶水解DNA觸酶分解過氧化氫所致疾?。? .侵襲性疾病化膿性感染：1.皮膚化膿性感染EX:毛囊炎等臨床表現(xiàn)：膿汁金黃,病灶界限清楚,多為局限性2.各種器官的化膿性感染EX:氣管炎,肺炎3.全身感染EX:敗血癥,膿毒血癥.2 .毒素性疾?。?.食物中毒2.燙傷樣皮膚綜合征3.毒素休克綜合征H一.鏈球菌致病物質(zhì)及其所致疾病A群鏈球菌1 .致病物質(zhì)：細(xì)胞壁成分1.粘附素.包括脂磷壁酸及F蛋白一定植與繁殖2.M蛋白.抗吞噬與反抗吞噬細(xì)胞胞內(nèi)殺傷作用,與超敏反響有關(guān)3.肽聚

7、糖.致熱,溶解血小板,提升血管通透性,誘發(fā)試驗(yàn)性關(guān)節(jié)炎外毒素類：1.致熱外毒素：又稱紅疹毒素或猩紅熱毒素,人類猩紅熱,具有超抗原作用2.鏈球菌溶素：活動性風(fēng)濕熱,SLS對白細(xì)胞和多種組織細(xì)胞有破壞作用.3.侵襲性酶類：1透明質(zhì)酸酶一分解細(xì)胞間質(zhì)透明質(zhì)酸,便于細(xì)菌擴(kuò)散2鏈激酶一或溶纖維蛋白酶一溶解血塊或阻止血漿凝固,有利于細(xì)菌擴(kuò)散3鏈道酶一降解膿汁中粘稠的DNA,使膿液變稀薄2 .所致疾?。?.化膿性感染：1.皮膚和皮下組織感染2.其他系統(tǒng)感染2中毒性疾?。盒杉t熱,鏈球菌毒素休克綜合征3 .超敏反響性疾病：風(fēng)濕熱,急性腎小球腎炎十二.破傷風(fēng)防治原那么1 .非特異性防治舉措：正確處理傷口,及時(shí)清創(chuàng)

8、擴(kuò)創(chuàng),預(yù)防厭氧微環(huán)境產(chǎn)生；應(yīng)用抗生素殺滅破傷風(fēng)梭菌,以消除毒素的產(chǎn)生2 .特異性預(yù)防舉措：3-6M兒童接種百白破三聯(lián)疫苗一嬰兒出生后3.4.5個(gè)月連續(xù)免疫三次,2.7Y各增強(qiáng)一次建立根底免疫.今后有可能引發(fā)破傷風(fēng)時(shí)立即接種一針類毒素.未經(jīng)根底免疫者,立即注射破傷風(fēng)抗毒素以獲得被動免疫3 .特異性治療：已發(fā)病者早期足量使用破傷風(fēng)抗毒素,先皮試,必要時(shí)可脫敏注射法或用人破傷風(fēng)免疫球蛋白.抗菌治療可用紅霉素.十三.結(jié)核菌素試驗(yàn)原理和試劑：人感染結(jié)核分枝桿菌后,產(chǎn)生免疫力的同時(shí)會有四型超敏反響,再次注射觀察有無四型反響炎癥,可用于檢測可疑患者及疫苗接種效果試劑OT含有結(jié)核分枝桿菌的肉湯培養(yǎng)物加熱過濾液

9、,主要成分是結(jié)合蛋白,PPD純蛋白衍生物是OT經(jīng)三氯醋酸處理后的純化物分PPDC-人結(jié)核分枝桿菌提取以及BCGPPD-卡介苗制成方法：PPDC&BCGPPD各5單位,兩臂掌側(cè)皮內(nèi)注射,48-72H后紅腫硬結(jié)小于5mm為陰性,大于為陽性,大于15mm為強(qiáng)陽性.PPDC側(cè)大于BCGPPD為感染,反之為接種卡介苗所致結(jié)果分析：陽性一一疫苗接種成功,有特異性免疫力強(qiáng)陽性一一活動性結(jié)核病,尤其嬰兒,陰性未感染過結(jié)核分枝桿菌或接種過卡介苗原發(fā)感染早期,正患嚴(yán)重結(jié)核病如全身粟粒樣結(jié)核和結(jié)核腦膜炎無反響水平,或細(xì)胞免疫功能低下也可以為陰性.應(yīng)用：1.診斷嬰幼兒結(jié)核病2.測定接種卡介苗后效果3.在未接種

10、卡介苗的人群中進(jìn)行結(jié)核分枝桿菌的流行病調(diào)查4.測定腫瘤患者的細(xì)胞免疫功能.十四、病毒的增殖過程以dsDNA為例1 .吸附：主要通過病毒外表的吸附蛋白與易感細(xì)胞外表的特異性受體相結(jié)合2 .穿入：1.吞飲-無包膜病毒2.融合-有包膜病毒3 .脫殼：在細(xì)胞的溶酶體酶的作用下脫殼釋放出核酸4 .生物合成：dsDNA細(xì)胞核內(nèi)合成DNA,細(xì)胞質(zhì)內(nèi)合成病毒蛋白.痘病毒例外因其本身攜帶DNA聚合酶,故都在胞質(zhì)內(nèi)合成.1利用細(xì)胞核內(nèi)依賴DNA的RNA聚合酶轉(zhuǎn)錄出早期mRNA2 .于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)用核糖體譯成早期蛋白一非結(jié)構(gòu)蛋白,DNA多聚酶等3 .利用子代DNA分子為模板大量轉(zhuǎn)錄晚期mRNA4 .繼而譯出晚期蛋白一結(jié)

11、構(gòu)蛋白,主要為衣殼蛋白.5 .裝配與釋放：除痘病毒外DNA病毒均在核內(nèi)組裝,除正黏病毒外,大多數(shù)RNA病毒在胞質(zhì)內(nèi)組裝.裝配完后,裸露病毒隨宿主細(xì)胞破裂而釋放,有包膜的DNA&RNA病毒以出芽的方式釋放到胞外.十五.持續(xù)性感染病毒在機(jī)體持續(xù)存在數(shù)月至數(shù)年,可出現(xiàn)病癥,也可不出現(xiàn)病癥而長期攜帶病毒,成為重要的傳染源.原因：1.機(jī)體免疫功能弱,無法徹底去除病毒2.病毒存在于受保護(hù)部位,逃預(yù)防疫作用3.某些病毒抗原性差,機(jī)體難以產(chǎn)生免疫應(yīng)答完全5.去除4.有些病毒產(chǎn)生缺損性干擾顆粒,改變了病毒增殖過程,形成持續(xù)性感染病毒基因整合到宿主細(xì)胞基因中,長期與宿主細(xì)胞共存.常見類型：1.潛伏感染,唇

12、皰疹2.慢性感染,HBV,HCV3.慢發(fā)病毒感染,HIV.十六.IFN干擾素：病毒或其他干擾素誘生劑刺激人或動物細(xì)胞所產(chǎn)生的一種糖蛋白,具有抗病毒,抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)等多種生物學(xué)活性.IFN具有廣譜抗病毒的作用,但是只能抑制而無法殺滅病毒.具有相對的種屬特異性,同種細(xì)胞活性最高,異種細(xì)胞無活性.種類：一型干擾素,第9對染色體短臂上基因編碼,抗病毒作用強(qiáng)于免疫調(diào)節(jié)作用：IFN-%一人白細(xì)胞產(chǎn)生IFN-3人成纖維細(xì)胞產(chǎn)生.二型干擾素,第12對染色體長臂上基因編碼免疫調(diào)節(jié)作用強(qiáng)于抗病毒作用：IFN-丫-T細(xì)胞以及NK細(xì)胞產(chǎn)生.抗病毒活性：IFN不直接滅活病毒,而是通過誘導(dǎo)細(xì)胞合成抗病毒蛋白AVP發(fā)揮效

13、應(yīng).作用機(jī)制：25-A合成酶途徑：25'-A合成酶可導(dǎo)致病毒mRNA的降解機(jī)制1.由dsRNA激?S25'-A合成酶,使ATP多聚化,形成不定長度的寡聚腺甘酸25'-A225'-A再活化RNA酶LRNaseL3活化的RNaseL可切斷病毒mRNA.PKR途徑：PKR使蛋白譯起始因子eIF磷酸化失去活性機(jī)制1.PKR在dsRNA存在下產(chǎn)生自身磷酸化而被激活2.活化的PKR作用于譯起始因子eIF的亞基,使之磷酸化3.磷酸化后的eIF失去啟動蛋白質(zhì)譯的水平,病毒多肽鏈的合成受阻.免疫調(diào)節(jié)及抗腫瘤活性：IFN具有免疫調(diào)節(jié)的功能,上調(diào)細(xì)胞免疫,下調(diào)體液免疫,尤其以IFN-

14、丫為重要.激活巨噬細(xì)胞,活化NK細(xì)胞,促進(jìn)細(xì)胞MHC抗原的表達(dá),增強(qiáng)淋巴細(xì)胞對靶細(xì)胞的殺傷作用,直接抑制腫瘤細(xì)胞的生長.但是IFN有流感樣副作用,譬如冷戰(zhàn),發(fā)熱和疲勞.十七.HBV傳染源HBV患者或無病癥HBV攜帶者.傳播途徑：1.血液或血制品傳播2.母-嬰傳播3.性接觸及密切接觸傳播HBV抗原,抗體檢測用ELISA法主要檢測HBsAg抗一HBs,HBeAg抗一Hbe及抗一HBc兩對半必要日t也可檢測PreSIAg和PreS2Ag和相應(yīng)抗體.HBsAg抗一HBs：是感染HBV后最早出現(xiàn)的血清學(xué)標(biāo)志.HBsAg陽性是HBV感染標(biāo)志之一,也是篩選獻(xiàn)血員的必檢指標(biāo).HBsAg陰性并不能完全排除HBV

15、感染,由于S基因變異或低水平表達(dá)會使其難以檢出.抗一HBs出現(xiàn)表示機(jī)體對HBV有免疫力.見于HBV恢復(fù)期,既往感染或接種疫苗后.HBcAg抗一HBc:HBcAg陽性說明病毒顆粒存在,但僅存在于肝細(xì)胞內(nèi),不易在血清中檢測出.抗一HBc產(chǎn)生早,陽性提示HBV正處于復(fù)制狀態(tài),具有極強(qiáng)的傳染性.抗一HBcIgG是感染過HBV的標(biāo)志,檢出低滴度提示既往感染,滴度高提示急性感染.HBeAg抗一Hbe：HBeAg與HBV的DNA多聚酶消長一致,陽性提示HBV在體內(nèi)復(fù)制活潑,傳染性強(qiáng),轉(zhuǎn)為陰性表示病毒復(fù)制減弱或停止,持續(xù)陽性有開展為慢性肝炎的可能.抗一Hbe陽性表示有一定免疫力,復(fù)制水平減弱,傳染性降低,但對

16、抗一Hbe陽性還應(yīng)該檢測血液中HBV的DNA以全面了解病毒的復(fù)制情況.PreSIAg和PreS2Ag：與病毒活動性復(fù)制有關(guān),且與血中HBVDNA勺含量成正比,故可作為病毒復(fù)制的指標(biāo).抗一PreSI及抗一PreS2見于急性乙肝恢復(fù)期的早期,檢出提示病毒正在或已經(jīng)被去除,預(yù)后良好.HBsAgHBeAg抗-HBs抗-HBe抗-HBcigM抗-HBcigGAnti-HBc結(jié)果分析+一一一一-HBV染者或無病癥攜帶者+一一+-+急性或慢性乙肝傳染性強(qiáng),俗稱-大三陽+-+-+急性感染趨向恢復(fù)俗稱-小三陽+-+-急性或慢性乙肝或無病癥攜一一+一+-既往感染一一一一一+既往感染或窗口期-+-既往感染或接種過疫苗+-+急性感染+一+一一一+亞臨床HBV染早期+-+-亞臨床型或非典型感染一+一+一一+急性HBV感染中期一+一一一一+非典型急性感染實(shí)際用途1 .乙肝的診斷2 .判斷傳染性及HBM染的預(yù)后及轉(zhuǎn)歸.3 .篩選獻(xiàn)血員4 .判斷疫苗接種效果5 .流行病學(xué)調(diào)查血清HBV-DN能測一一病毒存在和復(fù)制最可靠的指標(biāo)應(yīng)用核酸雜交技術(shù)和常規(guī)PCR技術(shù)或熒光定量PCR技術(shù)直接檢測血清中的HBV-DNA可測出極微量的