設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)報(bào)告植物可溶性蛋白質(zhì)和糖含量的測定

1、設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)報(bào)告題目植物可溶性蛋白質(zhì)和糖含量的測定課程名稱：基礎(chǔ)生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)學(xué)期：2011至2012學(xué)年第一學(xué)植物組織中可溶性蛋白質(zhì)和糖含量的測定摘要本文以生菜、蘋果為材料，采用考馬斯亮藍(lán)法（蛋白質(zhì)）、慈酮法（糖）、分光光度計(jì)法進(jìn)行了可溶性糖和可溶性蛋白含量的測定。結(jié)果表明：生菜的蛋白質(zhì)含量為（mg/g）,糖含量為100g;蘋果中蛋白質(zhì)含量為（mg/g）,糖含量為100go即說明：生菜中蛋白質(zhì)含量高于蘋果，但蘋果中的糖含量更高。關(guān)鍵詞可溶性蛋白、可溶性糖，考馬斯亮藍(lán)G-250染色法，意酮法，含量測定1、材料與方法蛋白質(zhì)含量測定標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液、考馬斯亮藍(lán)試劑、生菜、蘋果分光光度計(jì)、離心機(jī)、研缽

2、、燒杯、電子秤、移液管、試管等糖含量測定200ug/ml標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖、慈酮試劑、濃硫酸、生菜、蘋果試管、水浴鍋、分光光度計(jì)、研缽、電子秤、移液管、量筒、試管架2、實(shí)驗(yàn)步驟蛋白質(zhì)含量的測定（考馬斯亮藍(lán)G-250染色法）標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制取六只試管，按下表加入試劑，搖勻，向個(gè)管加入5ml考馬斯亮藍(lán)試劑，搖勻，并放置5min左右，以0號(hào)試管為空白對(duì)照，在595nm下比色測定吸光度。以蛋白質(zhì)含量為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。試齊I2口呂勺012345標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)（ml）0蒸儲(chǔ)水量（ml）0蛋白質(zhì)含量（ug）020406080100樣品測定樣品提取分別秤取生菜、蘋果鮮樣，用5ml蒸儲(chǔ)水或緩沖液研磨成勻

3、漿后，3000r/min離心10min,上清液備用。吸取樣品提取液（蛋白質(zhì)含量適當(dāng)稀釋），放入試管中，加入5ml考馬斯亮藍(lán)試劑，搖勻，放置2min后在595nm下比色，測定吸光度，并通過標(biāo)準(zhǔn)曲線查得蛋白質(zhì)含量。糖含量測定.葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作取6支20ml具寒試管，編號(hào)，按下表數(shù)據(jù)配制一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液。在每管中均加入慈酮試劑，再緩慢地加入5ml濃H2SO,搖勻后，打開試管塞，置沸水浴中煮沸10分鐘，取出冷卻至室溫，在620nm波長下比色，測各管溶液的光密度值（OD）,以標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖含量為橫坐標(biāo)，光密度值為縱坐標(biāo)，作出標(biāo)準(zhǔn)曲線。管號(hào)1十456卜；準(zhǔn)缸心MpnJ00.204060$IO

4、然恨水2.01.8161.41.210葡駕就備酬tug）040SO12C160200.可溶性糖的提取稱取1克生菜葉和蘋果，剪碎，置于研缽中，加入少量蒸儲(chǔ)水，研磨成勻漿，然后轉(zhuǎn)入20ml刻度試管中，用10ml蒸儲(chǔ)水分次洗滌研缽，洗液一并轉(zhuǎn)入刻度試管中。置沸水浴中加蓋煮沸10分鐘，冷卻后3000r/min離心10min,濾液收集于100ml容量瓶中，用蒸儲(chǔ)水定容至刻度，搖勻備用。.糖含量測定用移液管吸收1ml提取液于20ml具塞刻度試管中，加1ml水和慈酮試劑。再緩慢加入5ml濃H2SO（注意：濃硫酸遇水會(huì)產(chǎn)生大量的熱?。?，蓋上試管塞后，輕輕搖勻，再置沸水浴中10分鐘（比色空白用2ml蒸儲(chǔ)水與慈酮

5、試劑混合，并一同于沸水浴保溫10分鐘）。冷卻至室溫后，在波長620nm下比色，記錄光密度值。查標(biāo)準(zhǔn)曲線上得知對(duì)應(yīng)的葡萄糖含量（科g）。3、結(jié)果記錄及處理（蛋白質(zhì)）管號(hào)012345生菜蘋果蛋白質(zhì)含量（ug、x）020406080100Y1Y2吸光度（nmy）0散點(diǎn)圖表示:標(biāo)準(zhǔn)曲線蛋白質(zhì)含量度 光 吸通過計(jì)算上表可用y=+表示樣品中蛋白質(zhì)的含量=(C*V/(Vs*W*1000)(mg/g)式中：C查標(biāo)準(zhǔn)曲線值，ugVt提取液總體積，mlWf樣品鮮重，gVs測量時(shí)加樣量，ml所以生菜中蛋白質(zhì)的含量=(mg/g)蘋果中蛋白質(zhì)的含量=(mg/g)（糖）管號(hào)123456生菜蘋果葡錮糖含量（ug、x）040

6、80120160200YiY2吸光度（nmy）0散點(diǎn)圖表示糖含量標(biāo)準(zhǔn)曲線0.80.70.6度0.5先0.4吸0.30.20.10通過計(jì)算上表可用y=+表示樣品中糖含量（g/100g鮮重）（計(jì)算所得糖含量（ug）*稀釋倍數(shù)）/（樣品重（g）*106）*100則生菜樣品中糖含量=100g蘋果樣品中糖含量=100g4、結(jié)果討論結(jié)果表示生菜的蛋白質(zhì)含量為（mg/g）,糖含量為100g;蘋果中蛋白質(zhì)含量為（mg/g）,糖含量為100g。即說明：生菜中蛋白質(zhì)含量高于蘋果，但蘋果中的糖含量高于生菜。5、收獲體會(huì)生物學(xué)是一門以實(shí)驗(yàn)為基礎(chǔ)的自然科學(xué)，現(xiàn)代生物科學(xué)的發(fā)展尤其依賴科學(xué)實(shí)驗(yàn)。在生物教學(xué)中，實(shí)驗(yàn)、學(xué)習(xí)和觀察等實(shí)踐環(huán)節(jié)對(duì)我們掌握生物學(xué)知識(shí)、科學(xué)方法、培養(yǎng)我們的動(dòng)手能力和形成科學(xué)素質(zhì)都起到了至關(guān)重要的作用。正是因此，從我們開始接觸生物這門學(xué)科開始，就不斷有生物實(shí)驗(yàn)課程，鍛煉我們各式各樣的能力。生物化學(xué)是一門嚴(yán)密的課程，對(duì)于其每一步，都需要我們認(rèn)真操作好每一步，認(rèn)真讀取數(shù)據(jù)并按照其規(guī)則準(zhǔn)確計(jì)算。對(duì)待這樣一門學(xué)科，我們必須嚴(yán)謹(jǐn)認(rèn)真