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文檔簡(jiǎn)介
1、實(shí)驗(yàn)二十水果中維生素c的測(cè)定一、目的與要求:1、掌握2.6-二氯酚靛酚測(cè)定維生毒C的原理和方法。二、原理:還原型抗壞血酸能還原染料2.6-二氯酚靛酚,該染料在酸性中呈紅色,被還原后紅色消失。還原型抗壞血酸還原2.6-二氯酚靛酚后,本身被氧化成脫氫抗壞血酸。在沒(méi)有雜質(zhì)干擾時(shí),一定量的樣品提取液還原標(biāo)準(zhǔn)2.6-二氯酚靛酚的量與樣品中所含維生素C的量成正比。反應(yīng)式如下:0=01301還原型抗壞血酸染料(粉紅色)脫輒型抗壞血酸案付(無(wú)色)還原型抗壞血酸染料(粉紅色)脫氫型抗壞血酸染料(無(wú)色)三、試劑:(1)2%草酸溶液:溶解20克草酸結(jié)晶于200毫升水中,然后稀釋至1000ml。(2)1%草酸溶液:取
2、上述2%草酸溶液500ml,用水稀釋至1000m1。(3)抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)溶液:準(zhǔn)確稱取20mg抗壞血酸,溶于1%草酸溶液中,移入lOml量瓶中,并用1%草酸溶液稀釋至100毫升,混勻,置冰箱中保存。使用時(shí)吸取上述抗壞血酸5ml,置于50毫升容量瓶中,用1%草酸溶液定容之。此標(biāo)準(zhǔn)使用液每毫升含0.02mg維生素Co標(biāo)定:吸取標(biāo)準(zhǔn)使用液5m1于三角燒瓶中,加入6%碘化鉀溶液0.5ml,1%淀粉溶液3滴,再以0.001N碘酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定,終點(diǎn)為淡藍(lán)色。計(jì)算如下:V1X0.088抗壞血酸濃度(mg/ml)=V2Vi:滴定時(shí)所耗0.001N碘酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液的量(ml)V2:所取抗壞血酸的量(ml)0.08
3、8:lmlO.0001N碘酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液相當(dāng)于抗壞血酸的量(mg/m1)(4)2.6:二氯靛酚溶液:稱取碳酸氫鈉52mg,溶于200ml沸水中,然后稱取2.6-二氯靛酚50mg,溶解在上述碳酸氫鈉的溶液中,待冷,置于冰箱中過(guò)夜,次日過(guò)濾置于250ml量瓶中,用水稀釋至刻度,搖勻。此液應(yīng)貯于棕色瓶中并冷藏,每星期至少標(biāo)定1次。標(biāo)定方法:取5m1已知濃度的抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)溶液,加入1%草酸溶液5ml,搖勻,用上述配制的染料溶液滴定至溶液呈粉紅色于15秒不褪色為止每毫升染料溶液相當(dāng)于Vc的毫克數(shù)=滴定度(T)CXV1V2式中:C;抗壞血酸(V)的濃度(mg/m1)Vl:抗壞血酸的量(m1)V2:消耗染料溶
4、液量(m1)(5)0.1N碘酸鉀溶液:精確取干燥的碘酸鉀0.100ml。0.3567克用水稀釋至100ml.(6)0.001N碘酸鉀溶液:吸取0.1N碘酸鉀溶液1ml,用水稀釋至100毫升。此溶液1ml相當(dāng)于抗壞血酸0.088mg。(7)1%淀粉溶液。(8)6%碘化鉀溶液。四、操作方法:1、稱取適量(50.0-100.0克)樣品,加等量的2%草酸溶液,倒入組織搗碎機(jī)中搗成勻漿。稱取10.00-30.00克漿狀樣品(使其含有抗壞血酸1-5mg),置于小燒杯中,用1%草酸溶液將樣品移入100毫升容量瓶中,并稀釋至刻度,搖勻2、將樣液過(guò)濾,棄去最初毫升濾液。若樣液具有顏色,用白陶土(應(yīng)選擇脫色力強(qiáng)但
5、對(duì)抗壞血酸無(wú)損失的白陶土)去色,然后迅速吸取5-lOml濾液,置于50ml三角燒瓶中,用標(biāo)定的2.6-二氯靛酚染料溶液滴定之,直至溶液呈粉紅色于15秒內(nèi)不褪色為止。計(jì)算:V.T每百克樣品中抗壞血酸毫克數(shù)=x100WV:滴定時(shí)所耗去染料溶液的量(ml);T:lml染料溶液相當(dāng)于抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的量(mg)W:滴定時(shí)所取的濾液中含樣品量(g).五、說(shuō)明:(1)所有試劑配制最好用重蒸儲(chǔ)水。(2)樣品取樣后,應(yīng)浸泡在已知量2%草酸溶液中使抗壞血酸受損失。以免發(fā)生氧化,使抗壞血酸受損失。(3)對(duì)動(dòng)性的樣品可用10%三氯醋酸代替2%草酸溶液提取;對(duì)含有大量Fe的樣品,如儲(chǔ)藏過(guò)久的罐頭食品可用8%醋酸溶液代
6、替草酸溶液提取。(4)整個(gè)操作過(guò)程要迅速,防止還原型抗壞血酸被氧化。(5)若樣品濾液無(wú)色,可不加色陶土。須加白陶土的,要對(duì)每批新的白陶土測(cè)定回收率。加白陶土脫色過(guò)濾后,樣品要迅速滴定。(6)滴定開(kāi)始時(shí),染料溶液要迅速加入,直至紅色不立即消失而后盡可能一滴一滴地加入,并要不斷振動(dòng)三角燒瓶,直至呈粉紅色于15秒內(nèi)不消失為止。樣品中可能有其他雜質(zhì)也能還原2.6-二氯靛酚,但一般雜質(zhì)還原該染料的速度均較抗壞血酸慢,所以滴定時(shí)以15秒鐘紅色不褪為終點(diǎn)。(7)測(cè)定樣品溶液時(shí)必須同時(shí)作一空白對(duì)照,樣品溶液滴定的毫升數(shù)須扣除空白液滴定的毫升數(shù)。實(shí)驗(yàn)法(二)2.4-二硝基苯肌法一、原理:用酸處理過(guò)的活性炭把還原
7、型的抗壞血酸氧化為脫氫型抗壞血酸再繼續(xù)氧化為二酮古樂(lè)糖酸。二酮古樂(lè)糖酸與2.4-二硝基苯肥偶聯(lián)生成紅色的絡(luò)合物。具呈色的強(qiáng)度與二酮古樂(lè)糖酸濃度成正比,可以比色定量。二、試劑:(1) 1%草酸溶液。(2) 2%草酸溶液。(3)酸處理過(guò)的活性炭:取200克活性炭,加入10%鹽酸1000ml,煮沸后,抽氣過(guò)濾,再用沸水1000ml煮沸,過(guò)濾,重復(fù)用水洗至濾液中無(wú)高價(jià)鐵離子(即用1%硫氟化鉀溶液試驗(yàn)不呈紅色為止),于100-120C烘干。(4) 2%2.4-二硝基苯肌溶液:取2克2.4-二硝基苯肌溶液溶解于lOOml9N硫酸中。(5) 9N硫酸溶液:量取濃硫酸250ml,慢慢地倒入750m1水中,加水
8、邊攪拌。(6) 10%硫酸溶液:稱取5克硫酸,溶解于50ml50%酒精中。(7) 85%硫酸溶液:精確稱取20mg抗壞血酸,溶解在1%草酸中,溶液稀釋至lOOml。吸取此液50ml,加入0.1克活性炭,振搖1分鐘,過(guò)濾吸取上述濾液5ml,用1%草酸稀釋到100毫升(此標(biāo)準(zhǔn)使用液每亳升含lOug抗壞血酸)。三、操作方法:(1)樣品的處理和分析:稱取適量樣品加等量的2%草酸溶液于組織搗碎機(jī)中打成勻漿。取勻漿20克用1%草酸稀釋至lOOml,搖勻,過(guò)濾。取濾液lOml,加入1%草酸10ml(取濾液的量視抗壞血酸含量而定,一般控制每毫升抗壞血酸的濃度為1-lOug),力口l勺活性炭,搖1分鐘,靜置過(guò)濾
9、。各取濾液2毫升于樣品管和樣品空白管中,各管加1滴硫酸溶液。于樣品管中加入2.4-二硝基苯肌0.5ml,樣品管,樣品空白管加蓋,置于37c保溫箱中保溫3小時(shí)。后取出樣品管放人冰水中,樣品管和樣品空白管置于冰浴中,從滴點(diǎn)管中滴加85%硫酸2ml于各管中,邊滴邊搖試管(為防止溶液溫度升高,溶液中糖炭化而轉(zhuǎn)黑色)。將各管于冰浴中取出,在室溫下放置30分鐘后,立即在分光光度計(jì)波長(zhǎng)540nm處讀取光密度。根據(jù)測(cè)得的光密度,從標(biāo)準(zhǔn)曲線中查出相應(yīng)的含量。(2)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:分別吸取抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)工作液10、20、30、40、50ml,稀釋至50ml,這些標(biāo)準(zhǔn)液每毫升含有2、4、6、8、lOug抗壞血酸。各取2ml,置于各標(biāo)準(zhǔn)管中,加硫酸溶液1滴和2.4-二硝基苯肥溶液0.5ml,置各管于30c保溫箱中保溫34小時(shí),取出,放在冰浴中,于各管中滴加85%硫酸2.5ml邊滴邊搖試管,然后取出,放置30分鐘,于分光光度計(jì)540nm波長(zhǎng)條件下測(cè)定光密度。根據(jù)測(cè)得的光密度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。同時(shí)作一試劑空白,于一試劑空白管中加入1%草酸溶液2m1,操作同標(biāo)準(zhǔn)管。C計(jì)算:每百克食品中含抗壞血酸的毫
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