淀粉酶的專一性和溫度、pH、激活劑

1、實(shí)驗(yàn)九 淀粉酶的專一性和溫度、pH、激活劑及抑制劑對酶活性的影響實(shí)驗(yàn)類型：驗(yàn)證型目的和要求1.通過本實(shí)驗(yàn)觀察、驗(yàn)證酶的專一性和溫度、pH、激動(dòng)劑及抑制劑對酶活性的影響。2.熟悉淀粉及其酶解產(chǎn)物的特殊顯色方法；電熱恒溫水浴的使用。 3.了解唾液淀粉酶的收集與預(yù)處理。原理酶具有高度專一性，一種酶只能催化一種或一類底物發(fā)生反應(yīng)，如淀粉酶只能水解淀粉，不能水解蔗糖。當(dāng)?shù)矸郾坏矸勖笍氐姿鉃檫€原性麥芽糖和葡萄糖時(shí)，能使班氏試劑的Cu2+還原成Cu1+，生成磚紅色Cu2O沉淀。淀粉酶的活性受溫度、pH、激動(dòng)劑及抑制劑、酶濃度以及作用時(shí)間等多種因素影響，因而水解淀粉生成一系列分子大小不同的糊精。不同程度的水

2、解糊精可與碘反應(yīng)生成紫色、棕色或紅色絡(luò)合物。通過上述特征性反應(yīng)，并以蔗糖等作對照，便可觀察、驗(yàn)證淀粉酶是否具有專一性以及它的催化活性是否受到影響。操作方法一、唾液淀粉酶的收集與處理1.制備唾液實(shí)驗(yàn)者先將痰咳盡，用自來水漱口，以清除口腔內(nèi)食物殘?jiān)僭诳谇粌?nèi)含蒸餾水約15ml，并作咀嚼咕漱運(yùn)動(dòng)，3分鐘后吐入墊有兩層經(jīng)潤濕處理的脫脂紗布的漏斗內(nèi)，過濾于小燒杯中備用，為與下面稀釋唾液相區(qū)別，此稱制備唾液。2.煮沸唾液取上述唾液約2ml，盛入1中號試管中,置沸水浴煮沸5分鐘備用。3.稀釋唾液調(diào)整唾液淀粉酶活性，使之在pH6.8、37和既無激動(dòng)劑又無抑制劑條件下，作用5min，水解淀粉至紅色糊精為宜。具

3、體做法是取12凹白瓷反應(yīng)板一塊，按下列步驟操作：第1排每凹各加1滴制備唾液，12、13、14凹分別加生理鹽水1、2、3滴，用滴管采用抽吸法，由稀到濃（1412）小心混勻各凹，勿使濺入相鄰凹中。每混勻一凹便取其1滴放入同列的2排凹中，剩余稀釋唾液應(yīng)全部放回原凹中。在盛有不同稀釋度唾液的第2排各凹中，均加入4滴緩沖液（pH6.8），2滴1%的淀粉液和2滴蒸餾水，用混勻法充分混勻，置37下5min。在第2排各凹中加I液一滴，混勻，觀察比較各凹顏色，以淺棕-紅色對應(yīng)的稀釋倍數(shù)，用生理鹽水稀釋3ml制備唾液備用。二、唾液淀粉酶的專一性以及溫度、pH、激活劑和抑制劑對唾液淀粉酶活性影響的觀察（一）取試管3

4、支編號，按下表1操作 表1  唾液淀粉酶專一性的實(shí)驗(yàn)觀察    試劑   試管pH6.8緩沖液1淀粉溶液1蔗糖溶液制備唾液煮沸唾液120滴10滴5滴220滴10滴5滴320滴10滴5滴將上述各管混勻后，置37水浴中保溫10分鐘，然后每管加入班氏試劑20滴，再放入沸水浴中煮沸約15分鐘，觀察各管顏色反應(yīng)，并說明原因。（二）溫度影響酶促反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)觀察1.取試管3支編號，按下表2操作：表2  溫度影響酶促反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)觀察管號試劑1231.pH6.8緩沖液20滴20滴20滴2.1淀粉溶液10滴10滴10滴3.預(yù)熱5min 37水浴沸水

5、浴冰浴4.直接加入稀釋唾液，立即混勻、計(jì)時(shí)5滴5滴5滴5.保溫10min37水浴沸水浴冰浴2.將一、二管移入冰水浴中，待各管溫度一致后速向各管加入碘液1滴，混勻后觀察各管顏色的區(qū)別，并說明溫度對酶促反應(yīng)的影響。四、pH影響酶促反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)觀察1. 取試管3支編號，按下表3操作：表3  pH影響酶促反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)觀察 pH4.0緩沖液pH6.8緩沖液pH8.0緩沖液1淀粉溶液稀釋唾液試管120滴10滴5滴試管220滴10滴5滴試管320滴10滴5滴2.將上述各管混勻后，置37水浴中保溫10分鐘，然后每管加入碘液1滴，混勻后觀察各管顏色的區(qū)別，并說明pH對酶促反應(yīng)的影響。五、激動(dòng)劑和

6、抑制劑影響酶活性的實(shí)驗(yàn)觀察1. 取試管4支編號，按下操作：表4  激動(dòng)劑和抑制劑影響酶活性的實(shí)驗(yàn)觀察 pH 6.8緩沖液1淀粉溶液蒸餾水0.9NaCl1CuSO41Na2SO4稀釋唾液120滴10滴10滴5滴220滴10滴10滴5滴320滴10滴10滴5滴420滴10滴10滴5滴2. 將上述各管放入37水浴中保溫10分鐘怎么減肚子，然后每管加入碘液1滴，混勻后觀各管顏色的區(qū)別，并說明激動(dòng)劑和抑制劑對酶促反應(yīng)的影響。注意事項(xiàng)1.反應(yīng)試管應(yīng)清洗干凈，不同酶液、試劑及其滴管不能交叉混用；2.使用混合唾液，或通過預(yù)試選出合適的唾液稀釋度，效果更為顯著。試劑和器材一、器材1.滴管、燒

7、杯、試管（架）及試管夾 。2.恒溫水浴箱與水浴鍋。3.脫脂棉、漏斗及紗布。4.白瓷反應(yīng)盤二、試劑1.1淀粉  稱取淀粉1g，岳陽家政加少量水調(diào)成糊狀，加入煮沸的0.3NaCl溶液至100m1。2.1蔗糖溶液3.班氏試劑  A液：取檸檬酸鈉173，無水碳酸鈉100，加水600ml，加熱溶解，冷卻后稀釋至850ml；B液：取結(jié)晶硫酸銅（CuSO4·5H2O）17.3溶于100ml預(yù)熱的蒸餾水中，冷卻后加水至150ml。將A液緩慢倒入B液中混勻置試劑瓶備用。4.碘液：稱取碘4g、碘化鉀6g溶于l000ml蒸餾水中，置棕色瓶內(nèi)貯存?zhèn)溆谩?.各種pH緩沖液pH6.8緩沖液：取0.2mol/LNa2HPO4溶液772ml，0.1mol/L怎么減肚子檸檬酸溶液228ml混合即成。 pH4.0緩沖液：取0.2mol/LNa2HPO4溶液385.5ml，0.1mol/L檸檬酸溶液614.5ml混合即成。 pH8.0緩沖液：取0.2mol/LNa2HPO4溶液972ml，0.1mol/L檸檬酸溶液28ml混合即成。 NaCl 溶液7.1CuSO4 溶液            &