益生菌檢測方法

1、附錄A（規(guī)范性附錄）測定用培養(yǎng)基A.1 生化試驗培養(yǎng)基蛋白胨 10g； 牛肉膏 10g；酵母膏 3g； 葡萄糖 10g；KH2PO4 2g； NaCl 1g；瓊脂 20g； 蒸餾水 1000ml；PH值 6.6-6.8。 A.2 麥芽汁瓊脂培養(yǎng)基12°Be麥芽汁 1000ml；KH2PO4 2g；瓊脂 15g。A.3 MRS瓊脂培養(yǎng)基：酪蛋白胨 10.0g； 牛肉浸膏 10.0g；酵母浸膏 5.0g； 葡萄糖 5.0g；乙酸鈉 5.0g； 檸檬酸二胺 2.0g；Tween80 1.0g； K2HPO4 2.0g；MgSO4·7H2O 0.2g； MnSO4·H2O

2、 0.05g；CaCO3 20.0g； 瓊脂 15.0g；蒸餾水 1000ml； PH 6.8。A.4 LB培養(yǎng)基：胰蛋白胨 10g； 葡萄糖 5g； 酵母浸出物 5g； 氯化鈉 10g； 瓊脂 20g； 蒸餾水 1000ml； pH 7.0。附錄B（規(guī)范性附錄）嗜酸乳酸菌活菌檢測方法B.1 材料B.1.1 儀器恒溫培養(yǎng)箱、厭氧罐、超凈工作臺、分析天平、恒溫水浴鍋、勻漿器、可調(diào)式移液器、便攜式高壓滅菌鍋、pH電極、酒精燈及常規(guī)玻璃儀器B.1.2培養(yǎng)基：MRS瓊脂培養(yǎng)基（A.3）B.2 方法：采用活菌平板計數(shù)法B.2.1樣品處理：稱取1ml樣品溶于99ml滅菌生理鹽水中，充分震蕩搖勻，搖勻后依次

3、稀釋至一定濃度B2.2平板制備與培養(yǎng)：將附錄A的培養(yǎng)基于三角瓶中滅菌（15磅、15分鐘）,培養(yǎng)基冷卻至50左右，取0.1ml稀釋好的樣品于滅菌平皿中，傾注培養(yǎng)基，搖勻，凝固后置于厭氧罐。每個樣品應不少于3個平板，于恒溫培養(yǎng)箱中37培養(yǎng)72小時。B2.4計數(shù)：用計數(shù)器計算菌落數(shù)，有效計數(shù)范圍30-300個菌落。每ml樣品中含乳酸菌數(shù)量=每個平板平均菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)×10(cfu)B2.5菌落形態(tài)：菌落圓形、白色、周圍有透明圈。B2.6 不符合上述形態(tài)特征的為雜菌并計數(shù)。B2.7判定標準：每個稀釋樣至少3個平板，每個平板中菌落均勻，有效計數(shù)范圍為30-300個。B2.8 雜菌計

4、數(shù)雜菌率按公式（1）計算：M1 = （1）式中：M1樣品雜菌率，%；雜菌數(shù)，億/g；功能微生物的有效活菌數(shù)，億/g。附錄C（規(guī)范性附錄）產(chǎn)朊假絲酵母菌檢測方法C.1 材料： C1.1儀器恒溫培養(yǎng)箱、超凈工作臺、分析天平、恒溫水浴鍋、勻漿器、可調(diào)式移液器、便攜式高壓滅菌鍋、pH電極、接種針、涂布棒、酒精燈及常規(guī)玻璃儀器C1.2培養(yǎng)基：麥芽汁瓊脂（A.2）C.2 方法：采用活菌平板計數(shù)法C2.1平板制備：將上述培養(yǎng)基于三角瓶中滅菌（10磅、20分鐘）,倒于滅菌平皿中，凝固后備用C2.2樣品處理：稱取1ml樣品溶于99ml滅菌生理鹽水中，充分震蕩搖勻，搖勻后依次稀釋至一定濃度。C2.3涂布平板：取0.1ml稀釋好的樣品均勻涂布于平板中，每個樣品應不少于3個平板，于恒溫培養(yǎng)箱中30培養(yǎng)24-48小時。C2.4計數(shù)：用計數(shù)器計算菌落數(shù)，有效計數(shù)范圍30-300個菌落。每克樣品中含芽孢桿菌數(shù)量=每個平板平均菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)×10(cfu)C2.5菌落形態(tài)：菌落圓形、白色或灰白色、表面濕潤C2.6不符合上述形態(tài)特征的為雜菌并計數(shù)。C2.7判定標準：每個稀釋樣至少3個平板，每個平板中菌落均勻，有效計數(shù)范圍為30-