復(fù)方當歸提取物對皮膚抗氧化作用實驗研究

1、西安源森生物實驗室：復(fù)方當歸提取物對D-半乳糖衰老模型小鼠皮膚的抗氧化作用最新調(diào)查結(jié)果顯示，在具有抗氧化作用的化妝品中，含復(fù)方當歸提取物的產(chǎn)品明顯更受女性消費者的歡迎，其原因在于，當歸本身所具有的除皺、祛斑和美白功效在傳統(tǒng)中醫(yī)藥領(lǐng)域已深受認同。然而，復(fù)方當歸提取物可用作皮膚抗氧化的具體原理是什么呢？本次實驗，西安源森生物實驗室將針對此疑問，選用優(yōu)質(zhì)的含復(fù)方當歸提取物乳、面膜等多種類型護膚品，共同作用于D-半乳糖衰老模型小鼠皮膚，測定其對小鼠皮膚的超氧化物和含水量的影響。一、實驗?zāi)康?、材料和方法【實驗?zāi)康摹浚汉瑥?fù)方當歸提取物的護膚品對皮膚的抗氧化作用。【實驗方法】：測試含復(fù)方當歸提取物護膚品對

2、D- 半乳糖衰老模型小鼠皮膚羥脯氨酸（ Hyp）、超氧化物歧化酶（ SOD）以及皮膚含水量的影響?！緦嶒瀸ο蟆浚篒CR 3 月齡小鼠 30 只?！緦嶒瀮x器】：FA/JA型電子天平，DY89-1 型電動玻璃勻漿機，752N 型紫外分光光度計?！緦嶒炗迷噭浚撼趸锲缁福⊿OD）試劑盒，羥脯氨酸（ Hyp）試劑盒，考馬斯亮藍蛋白測試盒，D- 半乳糖?！臼茉囁幬铩浚簭?fù)方當歸提取物由西安源森生物制劑中心制備。DGCC為清潔乳、按摩霜、成型面膜及滋潤霜，由西安源森廣州產(chǎn)品研究中心監(jiān)制。【實驗步驟】：1. 動物分組、造模及給藥：將30只小鼠隨即分為三組，每組10只。正常對照組：每天小鼠頸背部皮下注射等

3、容量生理鹽水；D-半乳糖組：每天給小鼠頸背部皮下注射12.5% D- 半乳糖（1 000mg/kg）； DGCC 組：每天小鼠頸背部皮下注射12.5%的 D- 半乳糖（1000mg/kg），并用剃毛器剃去背部被毛，暴露大小約2cm3cm 的皮膚，用 DGCC 清潔乳涂抹和清水清洗，再用DGCC面膜敷貼于暴露部位 30min，然后用DGCC 按摩膏按摩 1min，最后外涂 DGCC 滋潤霜。2. 衰老小鼠皮膚 SOD 活力和皮膚總羥脯氨酸含量測定：42天后，將各組小鼠同時處死，取背部脫毛部位的皮膚組織塊，經(jīng)預(yù)冷生理鹽水漂洗，除去皮下脂肪及結(jié)締組織，用濾紙拭干，取0.5g置10ml 燒杯，加預(yù)冷生

4、理鹽水，眼科剪剪碎組織塊后，倒入勻漿管中，加預(yù)冷生理鹽水至 5ml，用電動玻璃勻漿機制成10%組織勻漿（ 在冰水中進行），然后反復(fù)凍融 3 次，其完全破碎，細胞內(nèi)容物完全游離液相中。制備組織勻漿采用 SOD 試劑盒和羥脯氨酸試劑盒，并按說明書方法測定。3. 衰老小鼠皮膚含水量測定：用打孔器取下脫毛后皮膚組織 0.5g，精密稱皮膚濕重。放置 80干燥箱中 48h，稱皮膚干重。并按下列公式測量含水百分率：【統(tǒng)計學(xué)方法】：本研究中所有資料均采用 Spssfor window10.0 統(tǒng)計軟件進行分析，行方差分析及2檢驗。二、實驗結(jié)果1. DGCC 對衰老小鼠皮膚 SOD 活力和總羥脯氨酸含量的影響：

5、見表 1。以上實驗結(jié)果顯示：DGCC 組小鼠皮膚SOD活力和總羥脯氨酸含量明顯增高，與正常組相比沒有明顯差別；而D-半乳糖組小鼠皮膚SOD活力和總羥脯氨酸含量較之正常組與DGCC組小鼠都明顯降低。2. DGCC 對衰老小鼠皮膚含水量的影響：見表 2。以上實驗結(jié)果顯示：與正常組比較，DGCC 組小鼠皮膚含水量與 D- 半乳糖組對比沒有統(tǒng)計學(xué)意義，但有升高趨勢；而D- 半乳糖組小鼠皮膚含水量則明顯降低。3. 西安源森生物實驗室的本次實驗結(jié)果與討論：3.1西安源森生物本次實驗結(jié)果：- 半乳糖衰老模型小鼠皮膚Hyp、SOD 明顯低于正常組。（1）皮膚水含量降低表明，D-半乳糖衰老模型小鼠皮膚呈現(xiàn)漸進性

6、老化，角質(zhì)層變薄，皮膚水合能力降低，水分喪失增加。（2）DGCC 共同使用 42 天后，與 - 半乳糖組相比，DGCC 組Hyp含量和SOD 活性具有顯著性差異。DGCC可顯著增高D-半乳糖衰老模型小鼠皮膚 Hyp 含量(P0 05)，這表明其可通過刺激衰老皮膚成纖維細胞活性，增強膠原蛋白合成能力；而對 D- 半乳糖衰老模型小鼠皮膚含水量有增高趨勢，但沒有統(tǒng)計學(xué)意義，表明 DGCC對皮膚抗氧化作用優(yōu)于提高皮膚含水量；同時能夠顯著增強D- 半乳糖衰老模型小鼠皮膚SOD活性(P0 05)，這表明其可有效防止自由基反應(yīng)的連續(xù)發(fā)生和有害代謝產(chǎn)物的積累，對提高皮膚細胞自身防御能力，改善皮膚細胞營養(yǎng)狀況，

7、有效拮抗具有積極意義。綜上，DGCC 共同使用可通過刺激成纖維細胞活力、增強膠原蛋白合成能力、提高抗氧化酶的活性等，延緩皮膚衰老過程，發(fā)揮其抗氧化作用。DGCC對衰老動物某些指標具有很好的改善作用，同中醫(yī)美容中所強調(diào)的容貌肌膚與氣血盛衰的密切關(guān)系相一致。3.2西安源森生物實驗室對本次實驗結(jié)果的討論： 目前的研究普遍認為，皮膚衰老損傷的重要原因是自由基的積累： 自由基積累會使生物膜中的不飽和脂類發(fā)生過氧化，形成過氧化脂質(zhì)，其最終產(chǎn)物MDA是強交聯(lián)劑，可與核酸、蛋白質(zhì)或脂類結(jié)成難溶性物質(zhì)，導(dǎo)致生物膜硬化從而降低通透性，影響細胞物質(zhì)交換，繼而使其破裂、死亡。 在正常生理條件下，機體抗氧化防護機制與S

8、OD能有效清除自由基，對抗自由基對皮膚的損害。 隨著年齡的增長，體內(nèi)抗氧化酶類不斷減少，機體抗氧化防護功能逐漸減退，因此測定皮膚抗氧化劑活性可以作為判定受試動物皮膚衰老程度的指標。羥脯氨酸為膠原蛋白特有的氨基酸，而膠原蛋白是動物皮膚組織的組成成分，因而測定皮膚羥脯氨酸含量可反映皮膚中膠原蛋白含量。在機體老化的過程中：成纖維細胞氧氣供應(yīng)不足直接影響脯氨酸羥化產(chǎn)生羥脯氨酸膠原蛋白合成減少膠原纖維形成不良出現(xiàn)皮膚彈性降低和皺紋增加。故，測定皮膚羥脯氨酸含量可作為判定受試動物衰老程度的指標。由于老齡動物飼養(yǎng)周期較長，個體差異大，不易獲得。因此，本次試驗，西安源森生物實驗室采用D-半乳糖所致的小鼠衰老模型。- 半乳糖擬衰老模型原理：- 半乳糖在體內(nèi)引發(fā)非酶糖基化反應(yīng)，損傷生物大分子正常生理功能，同時由反應(yīng)產(chǎn)物晚期糖基化終產(chǎn)物(AGEs)誘導(dǎo)自由基損傷，進