分子醫(yī)學(xué)技能實驗設(shè)計

1、討論與交流討論與交流n幾個基本概念幾個基本概念 分子識別與靶分子、特異性、細(xì)胞周期、分子識別與靶分子、特異性、細(xì)胞周期、探針探針n標(biāo)記標(biāo)記 DNA、RNA、蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)n幾個問題的思考幾個問題的思考關(guān)于分子識別與靶分子關(guān)于分子識別與靶分子n受體與配體的分子識別（高親和力，高特異性）受體與配體的分子識別（高親和力，高特異性）n抗原與抗體的分子識別（高特異性）抗原與抗體的分子識別（高特異性）n酶與底物的分子識別酶與底物的分子識別( (專一性，信號放大）專一性，信號放大）n特異蛋白之間的分子識別（特異性）特異蛋白之間的分子識別（特異性）n核苷酸鏈之間的分子識別核苷酸鏈之間的分子識別（單鏈反義核糖核

2、酸（單鏈反義核糖核酸（RNA）與細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的）與細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的mRNA）n蛋白質(zhì)與核酸分子的分子識別蛋白質(zhì)與核酸分子的分子識別（激素受體復(fù)合物，通過特異的序列激（激素受體復(fù)合物，通過特異的序列激素反應(yīng)元件識別、結(jié)合基因調(diào)控序列）素反應(yīng)元件識別、結(jié)合基因調(diào)控序列）分子靶向分子靶向（molecular targeting）n各種分子（顯像或治療藥物）通過與在各種分子（顯像或治療藥物）通過與在疾病狀態(tài)下明顯高表達(dá)或缺失的靶分子疾病狀態(tài)下明顯高表達(dá)或缺失的靶分子的相互作用而特異性濃集。的相互作用而特異性濃集。n反映的是反映的是特異性特異性作用，而不是擴(kuò)散、膜作用，而不是擴(kuò)散、膜通透性等非特異性作用。通透性等

3、非特異性作用。細(xì)胞周期示意圖細(xì)胞周期示意圖 n探針探針(probe)，一般指能與特定核苷酸序，一般指能與特定核苷酸序列或基因序列的列或基因序列的DNA片段或片段或RNA片段發(fā)片段發(fā)生特異性互補(bǔ)的核苷酸片段，可用于檢生特異性互補(bǔ)的核苷酸片段，可用于檢測待測物中的核苷酸序列或基因序列。測待測物中的核苷酸序列或基因序列。 實際應(yīng)用的探針必須使實際應(yīng)用的探針必須使DNA或或RNA分子分子上帶有可被探測的信號，即標(biāo)記物上帶有可被探測的信號，即標(biāo)記物 。n根據(jù)核酸分子探針的性質(zhì)和來源可分為根據(jù)核酸分子探針的性質(zhì)和來源可分為 基因組基因組DNA探針、探針、 cDNA探針、探針、 RNA探針探針 人工合成的寡

4、核苷酸人工合成的寡核苷酸 根據(jù)實驗?zāi)康暮鸵蟮牟煌右赃x擇。根據(jù)實驗?zāi)康暮鸵蟮牟煌右赃x擇。 題目：肝癌患者和正常人血清蛋白質(zhì)分布的初步比較題目：肝癌患者和正常人血清蛋白質(zhì)分布的初步比較1.1.研究目的與意義研究目的與意義 通過比較肝癌患者和正常人血清中蛋白質(zhì)的種類通過比較肝癌患者和正常人血清中蛋白質(zhì)的種類與數(shù)量的不同，了解肝癌患者血清中出現(xiàn)的異常蛋與數(shù)量的不同，了解肝癌患者血清中出現(xiàn)的異常蛋白和正常蛋白質(zhì)的改變，初步探討這種改變對肝癌白和正常蛋白質(zhì)的改變，初步探討這種改變對肝癌診斷和判斷病情的作用。診斷和判斷病情的作用。2.2.材料與試劑材料與試劑 標(biāo)本：正常人血清、不同病程肝癌患者血清（

5、早、標(biāo)本：正常人血清、不同病程肝癌患者血清（早、中、晚期）、蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)對照中、晚期）、蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)對照 試劑：不連續(xù)聚丙烯酰胺凝膠電泳所用試劑試劑：不連續(xù)聚丙烯酰胺凝膠電泳所用試劑 儀器與設(shè)備：電泳儀、電泳槽、染色缸、漂洗缸、儀器與設(shè)備：電泳儀、電泳槽、染色缸、漂洗缸、燒杯、吸管、微量移液器燒杯、吸管、微量移液器3.實驗方法和步驟實驗方法和步驟 方法：不連續(xù)聚丙烯酰胺凝膠電泳方法：不連續(xù)聚丙烯酰胺凝膠電泳 步驟：步驟： 試劑準(zhǔn)備試劑準(zhǔn)備 制膠制膠 樣品處理樣品處理 電泳電泳 染色與脫色染色與脫色 4.實驗觀察指標(biāo)實驗觀察指標(biāo) 聚丙烯酰胺凝膠上電泳區(qū)帶的分布聚丙烯酰胺凝膠上電泳區(qū)帶的分布 電泳區(qū)帶

6、顏色深淺電泳區(qū)帶顏色深淺 5.實驗預(yù)期結(jié)果的描述實驗預(yù)期結(jié)果的描述 電泳顯示與正常人相比肝癌患者血清在分子量電泳顯示與正常人相比肝癌患者血清在分子量40Kd處有異常電泳區(qū)帶出現(xiàn)，該區(qū)帶的顏色在早處有異常電泳區(qū)帶出現(xiàn)，該區(qū)帶的顏色在早期肝癌患者較淺，隨肝癌病程呈進(jìn)行性增加，在期肝癌患者較淺，隨肝癌病程呈進(jìn)行性增加，在肝癌廣泛轉(zhuǎn)移時表現(xiàn)顏色最深，經(jīng)電泳圖譜掃描肝癌廣泛轉(zhuǎn)移時表現(xiàn)顏色最深，經(jīng)電泳圖譜掃描顯示，分別為？顯示，分別為？%，同時肝癌患者的清蛋白顏色，同時肝癌患者的清蛋白顏色變淺，定量顯示為正常人的？變淺，定量顯示為正常人的？%。6.實驗結(jié)果的分析及說明的問題實驗結(jié)果的分析及說明的問題 異常

7、蛋白的出現(xiàn)異常蛋白的出現(xiàn)診斷診斷 異常蛋白的變化異常蛋白的變化病情判斷與預(yù)后病情判斷與預(yù)后 清蛋白的減少清蛋白的減少肝癌時肝功能下降肝癌時肝功能下降 題目：應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)（題目：應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)（PCRPCR）分析）分析HBVHBV感染者病毒感染者病毒DNADNA的整合狀態(tài)的整合狀態(tài) 研究目的與意義研究目的與意義 實驗材料和試劑實驗材料和試劑 實驗方法和步驟實驗方法和步驟 實驗指標(biāo)實驗指標(biāo) 實驗預(yù)期結(jié)果的描述實驗預(yù)期結(jié)果的描述問題問題1n食物中有兩種含甲基的化合物食物中有兩種含甲基的化合物 膽膽堿和蛋氨酸，其甲基部分可相互轉(zhuǎn)堿和蛋氨酸，其甲基部分可相互轉(zhuǎn)移，彼此代替，并供給肌酸與腎上移，彼此

8、代替，并供給肌酸與腎上腺素合成的需要。腺素合成的需要。 其轉(zhuǎn)移過程是以甲基作為完整基團(tuán)直其轉(zhuǎn)移過程是以甲基作為完整基團(tuán)直接轉(zhuǎn)移，還是分解后重新形成？接轉(zhuǎn)移，還是分解后重新形成？問題問題2 3-羥羥-3-甲基戊二酰輔酶甲基戊二酰輔酶A還原酶主要存在細(xì)還原酶主要存在細(xì)胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，能催化胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，能催化HMG-CoA MVAn 該酶是膽固醇生物合成關(guān)鍵限速酶該酶是膽固醇生物合成關(guān)鍵限速酶n 有多種因素有多種因素(藥物、激素、代謝物）主要藥物、激素、代謝物）主要通過調(diào)節(jié)此酶活性影響膽固醇合成通過調(diào)節(jié)此酶活性影響膽固醇合成 如何測定其活性如何測定其活性?問題問題3n從某中藥中提取得某單體，可能對瘤細(xì)從某中藥中提取得某單體，可能對瘤細(xì)胞胞DNA合成有抑制作用合成有抑制作用 如何設(shè)計一體外實驗驗證