貼壁培養(yǎng)與懸浮培養(yǎng)的區(qū)別

1、貼壁細(xì)胞培養(yǎng)與懸浮細(xì)胞培養(yǎng)的區(qū)別蔓荊子2013.11.08 1. 概念概念2. 細(xì)胞類型細(xì)胞類型3. 接種方式接種方式4. 培養(yǎng)條件培養(yǎng)條件5. 細(xì)胞形態(tài)細(xì)胞形態(tài)6. 生長過程生長過程7. 傳代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)1.貼壁細(xì)胞培養(yǎng)：細(xì)胞貼附在一定的固相表面進行的培養(yǎng)。2.懸浮細(xì)胞培養(yǎng)：細(xì)胞生長不依賴于支持物表面，在培養(yǎng)液中呈懸浮狀態(tài)生長。1 概念概念2 細(xì)胞類型細(xì)胞類型 適合貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞：包括原代細(xì)胞在內(nèi)的大多數(shù)細(xì)胞類型。主要包括正常細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞，比如成纖維細(xì)胞，骨骼組織（骨及軟骨），心肌與平滑肌、肝、肺、腎、乳腺皮膚神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞，內(nèi)分泌細(xì)胞，黑色素細(xì)胞及各種腫瘤細(xì)胞等 適合懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞：適應(yīng)懸

2、浮培養(yǎng)的細(xì)胞及無粘附的細(xì)胞。一些取自血、脾或骨髓的培養(yǎng)細(xì)胞，尤其是血液白細(xì)胞，淋巴細(xì)胞。植物細(xì)胞。3 接種方式接種方式 貼壁培養(yǎng) PBS沖洗血液，去掉脂肪組織，切成小塊，消化液消化，培養(yǎng)液培養(yǎng)。 植物細(xì)胞的懸浮培養(yǎng) 由完整的植物器官分離單細(xì)胞 機械法 酶解法 由愈傷組織分離單細(xì)胞水曲柳懸浮細(xì)胞系的建立1 丁小萌，閆俊崎，周 博，齊鳳慧。水曲柳愈傷組織誘導(dǎo)及懸浮細(xì)胞系的建立。中國農(nóng)學(xué)通報，2013,29（25）:21-25香花槐愈傷組織及懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞1胡海英，趙亞美，閻曉磊，王華芳。香花槐愈傷組織及細(xì)胞懸浮培養(yǎng)技術(shù)。北京林業(yè)大學(xué)學(xué)報，2007,29（5）:26-304 培養(yǎng)條件培養(yǎng)條件貼壁細(xì)胞

3、培養(yǎng)貼壁細(xì)胞培養(yǎng)懸浮細(xì)胞培養(yǎng)懸浮細(xì)胞培養(yǎng)容器需要使用經(jīng)過組織培養(yǎng)處理的容器使用未經(jīng)過組織培養(yǎng)處理的容器，但需攪拌或搖晃設(shè)備貼壁細(xì)胞培養(yǎng)貼壁細(xì)胞培養(yǎng)懸浮細(xì)胞培養(yǎng)懸浮細(xì)胞培養(yǎng)溫度人和哺乳動物細(xì)胞系：36-37昆蟲細(xì)胞系：27禽類細(xì)胞系：38.5冷血動物：15-26植物懸浮細(xì)胞系：23-27pH哺乳動物系：7.0-7.4成纖維細(xì)胞系：7.4-7.7植物細(xì)胞：5.6-6.0培養(yǎng)基需血清懸浮培養(yǎng)基可不需血清5 細(xì)胞形態(tài)細(xì)胞形態(tài)貼壁培養(yǎng)細(xì)胞：成纖維細(xì)胞型 上皮細(xì)胞型 游走細(xì)胞型 多型細(xì)胞型懸浮培養(yǎng)細(xì)胞：懸浮型 成纖維細(xì)胞型成纖維細(xì)胞型 名稱名稱：凡在培養(yǎng)中形態(tài)與成纖維細(xì)胞類似的。來源來源：由中胚層間充質(zhì)組

4、織起源的組織如：真正的成纖維細(xì)胞，心肌，平滑肌，成骨細(xì)胞，血管內(nèi)皮。形態(tài)形態(tài)：似體內(nèi)成纖維細(xì)胞的形態(tài)，胞體梭形或不規(guī)則三角形，胞質(zhì)向外伸出23個長短不等的突起，中有卵圓形核。生長特點生長特點：排列成放射狀，漩渦狀，并不緊靠連成片，細(xì)胞細(xì)胞接觸易斷開而單獨行動，游離的單獨的成纖維樣細(xì)胞，常有幾個伸長的細(xì)胞突起。人心肌細(xì)胞人絨毛間充質(zhì)成纖維細(xì)胞上皮細(xì)胞型上皮細(xì)胞型 名稱名稱：僅形態(tài)上似體內(nèi)，實際上不完全相同。來源來源：來源于外胚層、內(nèi)胚層細(xì)胞, 如：皮膚及其衍生物,消化道，乳腺，肺泡, 上皮性腫瘤。形態(tài)形態(tài)：類似體內(nèi)的上皮細(xì)胞扁平，不規(guī)則多角形，中有圓形核。生長特點生長特點：易相連成片，相靠緊密相

5、連成薄層鋪石狀生長時呈膜狀移動，很少脫離細(xì)胞群而單個活動。人大腸上皮粘膜癌細(xì)胞人小氣道上皮細(xì)胞游走細(xì)胞型游走細(xì)胞型生長特點生長特點：呈散在生長，一般不連成片，胞質(zhì)常突起，呈活躍游走或變形運動，方向不規(guī)則。此型細(xì)胞不穩(wěn)定，有時難以和其他細(xì)胞相區(qū)別。小鼠腹腔分離的單核巨噬細(xì)胞多型細(xì)胞型多型細(xì)胞型生長特點生長特點：有一些細(xì)胞，如神經(jīng)細(xì)胞難以確定其規(guī)律和穩(wěn)定的形態(tài)，可統(tǒng)歸于此類。大鼠皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞胎鼠神經(jīng)干細(xì)胞皮層神經(jīng)細(xì)胞人PBMC細(xì)胞懸浮培養(yǎng)細(xì)胞淋巴母細(xì)胞T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞岷江百合細(xì)胞繼代4次后的文冠果細(xì)胞懸浮培養(yǎng)初期的棉花細(xì)胞分裂旺盛的胡蘿卜細(xì)胞1 姜新超，劉春。岷江百合懸浮細(xì)胞系的建立及植株再生

6、。園藝學(xué)報，2011,38（2）:327-3342 劉磊，顧玉紅。文冠果懸浮細(xì)胞系建立及細(xì)胞生長特性。林業(yè)科學(xué)，2011,46（9）：79-836 生長過程生長過程潛伏期潛伏期：懸浮,胞質(zhì)回縮, 全部細(xì)胞變?yōu)閳A球形。貼附底物。有運動活動,基本無增殖, 少見分裂相。指數(shù)增長期指數(shù)增長期：是細(xì)胞增生最活躍、活力最旺盛的階段培養(yǎng)物中細(xì)胞數(shù)量呈指數(shù)增長,細(xì)胞群體均一。停滯期停滯期：細(xì)胞數(shù)量達飽和密度后，細(xì)胞遂停止增殖，進入停滯期。7 傳代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)貼壁細(xì)胞貼壁細(xì)胞酶消化法傳代：棄去培養(yǎng)液，加胰酶消化，加培養(yǎng)液終止胰酶作用，離心，去上清，吹打成懸液，分裝傳代。懸浮細(xì)胞懸浮細(xì)胞離心法傳代：離心，棄上清液，加新鮮培養(yǎng)基，分裝傳代。直接傳代法：待細(xì)胞沉淀，傾去1/3-2/3培養(yǎng)液，用吸管吹打形成細(xì)胞懸液再傳代。貼壁培養(yǎng)貼壁培養(yǎng)懸浮培養(yǎng)懸浮培養(yǎng)適合包括原代細(xì)胞在內(nèi)的大多數(shù)細(xì)胞類型適合已適應(yīng)懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞以及其他一些無粘附性的細(xì)胞需要定期傳代，但是易于通過倒置顯微鏡觀察。顯微鏡下觀察形態(tài)多種。晃動培養(yǎng)液時，細(xì)胞不動較易傳代，但是需要每天進行細(xì)胞計數(shù)和存活率測定。顯微鏡下觀察呈圓形?；蝿优囵B(yǎng)液時，細(xì)胞也隨著漂動利用酶或機械方法解離細(xì)胞無需通過酶或機械方法解離細(xì)胞需要使用經(jīng)過組織培養(yǎng)處