重組長(zhǎng)效GLP-1受體激動(dòng)劑E4-Fc融合蛋白項(xiàng)目建議書(shū)

1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上重組長(zhǎng)效GLP-1受體激動(dòng)劑E4-Fc融合蛋白(rE4-Fc)項(xiàng)目建議書(shū)Tel：2014年6月目 錄8概 要 項(xiàng)目概述胰高血糖素樣肽-1受體激動(dòng)劑Exendin-4（簡(jiǎn)稱E4）分離自希拉毒蜥唾液,是由39個(gè)氨基酸殘基組成的生物活性多肽，結(jié)構(gòu)上有53%氨基酸序列與哺乳動(dòng)物胰高血糖素樣肽-1受體（glucagon-like-peptide GLP-1）氨基酸序列相同，但不是GLP-1的類似物，其對(duì)人體胰島細(xì)胞胰高血糖素樣肽-1（GLP-1）受體具有極高的親和力，通過(guò)與該受體的特異性結(jié)合，產(chǎn)生受體激動(dòng)作用，在動(dòng)物和人體內(nèi)產(chǎn)生與GLP-1相似的生物學(xué)活性。主要用于改善型糖尿病

2、患者血糖的控制，特別針對(duì)使用二甲雙胍、磺脲類藥物等合用口服降糖藥物仍然不能有效控制血糖的型糖尿病患者，克服了現(xiàn)有糖尿病治療藥物的缺點(diǎn)。國(guó)內(nèi)外進(jìn)展目前，已經(jīng)上市的該類產(chǎn)品為美國(guó)Eli Lilly公司和Amylin制藥公司合作開(kāi)發(fā)化學(xué)合成的exenatide，F(xiàn)DA于2005年批準(zhǔn)其上市，2009年進(jìn)入中國(guó)市場(chǎng)。AstraZeneca研制開(kāi)發(fā)的長(zhǎng)效制劑Bydureon于2012年獲FDA批準(zhǔn)。2014年AstraZeneca改進(jìn)了給藥方式的Bydureon Pen也獲得FDA的批準(zhǔn)，但還沒(méi)有進(jìn)入中國(guó)市場(chǎng)。目前，國(guó)內(nèi)沒(méi)有國(guó)產(chǎn)的長(zhǎng)效艾塞那肽相關(guān)制劑上市。2009年，丹麥諾和諾德生產(chǎn)的GPL-1類似物利

3、拉魯肽被批準(zhǔn)在歐洲上市，次年在美國(guó)上市，2011年正式進(jìn)入中國(guó)市場(chǎng)，利拉魯肽是在GLP-1上連接了一個(gè)脂肪酸側(cè)鏈，增加了半衰期。Lilly公司正在開(kāi)發(fā)長(zhǎng)效的GLP-1-Fc（Dulaglutide）已完成期臨床試驗(yàn)，正在申請(qǐng)F(tuán)DA的批準(zhǔn)。GSK公司研制的GLP-1與人血清白蛋白(HSA)融合蛋白Albiglutide已經(jīng)獲得批準(zhǔn)上市。市場(chǎng)分析據(jù)統(tǒng)計(jì)，2011年，全球糖尿病藥物的銷售總額高達(dá)260億美元，據(jù)國(guó)外分析家最新的報(bào)告顯示，進(jìn)入21世紀(jì)，世界糖尿病用藥市場(chǎng)總值將達(dá)357億美元。中國(guó)目前每年大約花費(fèi)120-130億元人民幣，預(yù)計(jì)到2025年，我國(guó)糖尿病治療的費(fèi)用將達(dá)到630億人民幣。根據(jù)國(guó)

4、家衛(wèi)生統(tǒng)計(jì)資料統(tǒng)計(jì)，1979年我國(guó)成人的糖尿病患病率不足1%， 2000年已達(dá)25003000萬(wàn)人，2012年我國(guó)糖尿病發(fā)病人數(shù)已達(dá)到9200萬(wàn)人。但令人憂慮的是，糖尿病不再只是中老年人病，有向青少年擴(kuò)大的趨勢(shì)。因此，開(kāi)發(fā)針對(duì)型糖尿病具有良好治療效果的藥物具有廣闊的市場(chǎng)前景。合作方式技術(shù)轉(zhuǎn)讓或合作開(kāi)發(fā)一、項(xiàng)目介紹目前在中國(guó)已大約有5000萬(wàn)糖尿病患者，并以每年150-200萬(wàn)人增長(zhǎng)，并呈現(xiàn)患者人群年輕化趨勢(shì)。糖尿病確證患者中90%以上屬于型糖尿病患者。其發(fā)病機(jī)理主要是胰島素ß-細(xì)胞功能的漸進(jìn)性衰竭，最后導(dǎo)致胰島素分泌的不足。胰高血糖素樣肽-1受體激動(dòng)劑Exendin-4(簡(jiǎn)稱E4）分

5、離自南非大毒蜥唾液,是由39個(gè)氨基酸殘基組成的生物活性多肽，結(jié)構(gòu)上有53%氨基酸序列與哺乳動(dòng)物胰高血糖素樣肽-1受體（glucagon-like-peptide GLP-1）氨基酸序列相同，其對(duì)人體胰島細(xì)胞胰高血糖素樣肽-1（GLP-1）受體具有極高的親和力，通過(guò)與該受體的特異性結(jié)合，產(chǎn)生受體激動(dòng)作用，在動(dòng)物和人體內(nèi)產(chǎn)生與GLP-1相似的生物學(xué)活性，但生物學(xué)活性為GLP-1的1000倍。本項(xiàng)目利用創(chuàng)新技術(shù)和手段，率先采用以哺乳動(dòng)物細(xì)胞CHO細(xì)胞為載體的基因重組技術(shù)生產(chǎn)制備重組長(zhǎng)效胰高血糖素樣肽-1受體激動(dòng)劑融合蛋白（即rE4-Fc），主要用于控制型糖尿病患者血糖，特別針對(duì)使用二甲雙胍、磺脲類藥

6、物等合用口服降糖藥物仍然不能有效控制血糖的型糖尿病患者，克服了現(xiàn)有糖尿病治療藥物的缺點(diǎn)。人IgGFc為抗體重鏈的鉸鏈區(qū)（Hinge）和補(bǔ)體結(jié)合區(qū)（CH2、CH3），在重組藥品的開(kāi)發(fā)中，通常將其與目的蛋白融合以增加目的蛋白的半衰期。本項(xiàng)目采用CHO表達(dá)的重組長(zhǎng)效胰高血糖素樣肽-1受體激動(dòng)劑rE4-Fc融合蛋白與艾塞那肽相比，具有分子量大，體內(nèi)半衰期長(zhǎng)，患者對(duì)藥物的依從性好，不需要像艾塞那肽那樣每天注射兩次，更是顯著降低藥物的免疫原性。（一） 適應(yīng)癥目前常用胰島素、磺酰脲類和二甲雙胍類等藥物對(duì)患者血糖控制情況并不理想，用藥患者的糖化血紅蛋白（Hbalc）的平均值都8%，從而增加糖尿病患者發(fā)生腎病、

7、致盲和心臟病等并發(fā)癥的危險(xiǎn)；且伴有體重增加、低血糖癥、水腫等副作用。重組長(zhǎng)效胰高血糖素樣肽-1受體激動(dòng)劑rE4-Fc融合蛋白主要用于型糖尿病的治療，特別針對(duì)使用二甲雙胍、磺脲類藥物等合用口服降糖藥物仍然不能有效控制血糖的型糖尿病患者。（二）、作用機(jī)理艾塞那肽(exenatide ，商品名Byetta)是首個(gè)通過(guò)美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)的GLP-1受體激動(dòng)劑，能持續(xù)有效地控制型糖尿病患者的血糖，改善細(xì)胞功能，并減輕患者體重。1. 保護(hù)胰島細(xì)胞功能研究顯示，艾塞那肽可能通過(guò)降低內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)基因，如X-盒結(jié)合蛋白1、活性轉(zhuǎn)綠因子(ATF)-4、ATF6及轉(zhuǎn)錄因子CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白(C/EB

8、P)同源蛋白的表達(dá)，促進(jìn)細(xì)胞增殖與新生，減少細(xì)胞的凋亡，從而增加細(xì)胞的數(shù)量。艾塞那肽也可以防止氧化應(yīng)激引起的細(xì)胞凋亡，同時(shí)可以降低糖原合成酶激酶-3(GSK-3)活性、c-Jun氨基末端激酶（JNK）磷酸化與caspase活性，恢復(fù)胰島素mRNA在細(xì)胞中的表達(dá)及胰島素的分泌。2. 改善胰島素抵抗在骨骼肌和脂肪中，艾塞那肽能夠通過(guò)激活磷脂酰肌醇3激酶途徑，促進(jìn)葡萄糖依賴的促胰島素分泌，改善外周組織對(duì)胰島素的敏感性。研究顯示，艾塞那肽預(yù)防了肝臟氧化應(yīng)激的發(fā)生，逆轉(zhuǎn)了體內(nèi)胰島素信號(hào)缺陷，繼而預(yù)防了肝臟胰島素抵抗的發(fā)生。同時(shí)，抑制胰高血糖素的分泌，減慢胃排空運(yùn)動(dòng)，減少食物攝入，降低糖尿病患者體重。3.

9、 促進(jìn)葡萄糖依賴的胰島素分泌與合成艾塞那肽具有雙向調(diào)節(jié)血糖濃度的作用，其促進(jìn)胰島素分泌的作用呈葡萄糖依賴性。血糖濃度高時(shí)刺激胰島素分泌，血糖濃度低時(shí)不刺激胰島素分泌，臨床上有效防止低血糖發(fā)生，同時(shí)良好控制血糖濃度。在正?；虻脱撬较拢请呐c細(xì)胞上的G蛋白偶聯(lián)受體特異性結(jié)合后，僅引起鈣離子少量?jī)?nèi)流和胰島素微量釋放；而血糖濃度高時(shí)，細(xì)胞內(nèi)的ATP/ADP比值升高，ATP依賴的鉀通道開(kāi)發(fā)使細(xì)胞恢復(fù)極化延遲，艾塞那肽與其受體結(jié)合后可引起鈣離子長(zhǎng)時(shí)間的內(nèi)流，并導(dǎo)致較多的胰島素釋放。艾塞那肽通過(guò)與GLP-1受體結(jié)合激活腺苷酸環(huán)化酶，導(dǎo)致胞內(nèi)的cAMP增加和蛋白激酶A(PKA)激活，直接通過(guò)cAMP-

10、PKA通路增加L-型電壓門控鈣離子通道的鈣離子內(nèi)流和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣離子釋放而活化鈣調(diào)蛋白，最終是胰島素出胞作用增強(qiáng)。研究也發(fā)現(xiàn)，艾塞那肽能通過(guò)激活鈣離子-鈣調(diào)蛋白依賴的蛋白激酶(CaMKK/CaMKIV)級(jí)聯(lián)反應(yīng)刺激ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1基因轉(zhuǎn)錄或調(diào)控葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2的基因轉(zhuǎn)錄，從而刺激胰島素的分泌。（三）、國(guó)內(nèi)外進(jìn)展糖尿病治療藥物的研究是目前國(guó)際藥物研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)，在最新生命科學(xué)研究的基礎(chǔ)上，針對(duì)一些新的藥物靶點(diǎn)，正進(jìn)行大量的藥物研究。目前在糖尿病的治療中，主要根據(jù)糖尿病的不同階段，采用抑制糖吸收、促進(jìn)糖代謝的藥物進(jìn)行治療，但是目前常用胰島素、磺酰脲類和二甲雙胍類等藥物對(duì)患者血糖控制情況并不理想，

11、用藥患者的糖化血紅蛋白（Hbalc）的平均值都8%，從而增加糖尿病患者發(fā)生腎病、致盲和心臟病等并發(fā)癥的危險(xiǎn)；且伴有體重增加、低血糖癥、水腫等副作用。2005年，美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)Lilly公司開(kāi)發(fā)化學(xué)合成的exenatide，商品名Byetta，通用名Exenatide Injection。2009年進(jìn)入中國(guó)市場(chǎng)，中文商品名為百泌達(dá)，通用名為艾塞那肽注射液，它是國(guó)內(nèi)已經(jīng)上市的唯一的短效人胰高糖素樣肽-1（GLP-1）受體激動(dòng)劑，用于改善型糖尿病患者的血糖控制。百泌達(dá)擁有10年以上的臨床和實(shí)際使用經(jīng)驗(yàn)，累計(jì)使用量每年超過(guò)百萬(wàn)患者，良好的療效獲得了國(guó)內(nèi)外的一致認(rèn)可。艾塞那肽長(zhǎng)效制劑有Ast

12、raZeneca研制開(kāi)發(fā)的Bydureon（exenatide，艾塞那肽長(zhǎng)效緩釋注射懸液），是用于型糖尿病治療的首個(gè)也是唯一一種每周一次的藥物，于2012年獲FDA批準(zhǔn)。2014年AstraZeneca改進(jìn)了給藥方式的Bydureon Pen也獲得FDA的批準(zhǔn)。目前，國(guó)內(nèi)沒(méi)有國(guó)產(chǎn)的長(zhǎng)效艾塞那肽相關(guān)制劑上市，Bydureon Pen也沒(méi)有進(jìn)入中國(guó)市場(chǎng)。2009年，丹麥諾和諾德生產(chǎn)的利拉魯肽被批準(zhǔn)在歐洲上市，次年在美國(guó)上市，2011年正式進(jìn)入中國(guó)市場(chǎng)，利拉魯肽是一種人胰高糖素樣肽-1（GLP-1）類似物，與人GLP-1具有97%的序列同源性，其特點(diǎn)將GLP-1第20位的賴氨酸換成谷氨酸，并在此谷氨

13、酸殘基處接上1分子十六脘酸：棕櫚酰(軟脂酰)，從而增加半衰期。目前，Lilly公司正在開(kāi)發(fā)長(zhǎng)效的GLP-1（Dulaglutide），其特點(diǎn)是將GLP-1通過(guò)linker與抗體的Fc融合，采用中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞（CHO）表達(dá)，現(xiàn)已完成期臨床試驗(yàn)，正在申請(qǐng)F(tuán)DA的批準(zhǔn)。GSK公司研制的GLP-1與人血清白蛋白(HSA)融合蛋白Albiglutide已經(jīng)獲得批準(zhǔn)上市。國(guó)內(nèi)外其他一些制藥公司也在開(kāi)發(fā)不同形式的長(zhǎng)效GLP-1或者長(zhǎng)效Exendin-4。（四）、項(xiàng)目技術(shù)創(chuàng)新本項(xiàng)目采用基因工程技術(shù)將編碼胰高血糖素樣肽-1受體激動(dòng)劑艾塞那肽（Exendin-4）與人免疫球蛋白IgG4的Fc段基因進(jìn)行融合，構(gòu)建

14、高效的哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)載體。將構(gòu)建的表達(dá)載體轉(zhuǎn)染二氫葉酸還原酶缺陷型CHO細(xì)胞，再通過(guò)甲氨蝶呤(MTX)篩選并擴(kuò)增目的基因，從而建立可穩(wěn)定表達(dá)rExendin4-Fc蛋白的工程細(xì)胞株。對(duì)CHO工程細(xì)胞的進(jìn)行大規(guī)模培養(yǎng)，上游培養(yǎng)采用批次流加培養(yǎng)工藝，經(jīng)Protein A親和層析可以獲得純度超過(guò)98%的目的蛋白，經(jīng)過(guò)進(jìn)一步的精細(xì)純化以及病毒去除步驟，建立了非常簡(jiǎn)單有效的純化工藝。人IgGFc為抗體重鏈的鉸鏈區(qū)（Hinge）和補(bǔ)體結(jié)合區(qū)（CH2、CH3），在重組藥品的開(kāi)發(fā)中，通常將其與目的蛋白融合以增加目的蛋白的半衰期。本項(xiàng)目采用CHO表達(dá)的重組長(zhǎng)效胰高血糖素樣肽-1受體激動(dòng)劑融合蛋白（即rE4-F

15、c）與艾塞那肽相比，具有分子量大，體內(nèi)半衰期長(zhǎng)，患者對(duì)藥物的依從性好，不需要像艾塞那肽注射液那樣每天注射兩次，更是顯著降低藥物的免疫原性。目前，不管是Lilly公司與Amylin制藥公司合作開(kāi)發(fā)的Byetta還是AstraZeneca研制開(kāi)發(fā)的Bydureon(或Bydureon Pen)均為化學(xué)合成產(chǎn)品，化學(xué)合成法成本高，產(chǎn)量低，不利于大規(guī)模生產(chǎn)。諾和諾德生產(chǎn)的利拉魯肽為通過(guò)重組技術(shù)，利用生產(chǎn)的人胰高糖素樣肽-1（GLP-1）類似物。Lilly公司開(kāi)發(fā)的長(zhǎng)效GLP-1 為CHO表達(dá)產(chǎn)品。因此，開(kāi)發(fā)重組長(zhǎng)效胰高血糖素樣肽-1受體激動(dòng)劑艾塞那肽融合蛋白（即rE4-Fc）完全是一個(gè)技術(shù)創(chuàng)新項(xiàng)目。（

16、五）、市場(chǎng)需求根據(jù)國(guó)家衛(wèi)生統(tǒng)計(jì)資料統(tǒng)計(jì)，1979年我國(guó)成人的糖尿病患病率不足1%， 2000年已達(dá)25003000萬(wàn)人，2012年我國(guó)糖尿病發(fā)病人數(shù)已超過(guò)9200萬(wàn)人，至少90%是型糖尿病。但令人憂慮的是，糖尿病不再只是中老年人病，有向青少年擴(kuò)大的趨勢(shì)。據(jù)統(tǒng)計(jì)，2011年，全球糖尿病藥物的銷售總額高達(dá)260億美元，據(jù)國(guó)外分析家最新的報(bào)告顯示，進(jìn)入21世紀(jì)，世界糖尿病用藥市場(chǎng)總值將達(dá)357億美元。中國(guó)目前每年大約花費(fèi)120-130億元人民幣，預(yù)計(jì)到2025年，我國(guó)糖尿病治療的費(fèi)用將達(dá)到630億人民幣。（六）工藝情況1、細(xì)胞培養(yǎng)工藝簡(jiǎn)介工藝：種子復(fù)蘇目的：復(fù)蘇種子細(xì)胞，調(diào)整好細(xì)胞狀態(tài)，種子擴(kuò)增備用

17、操作：37水浴快速解凍，1000rpm離心，重懸細(xì)胞，方瓶培養(yǎng)工藝：種子擴(kuò)增目的：種子細(xì)胞擴(kuò)大培養(yǎng)，為生產(chǎn)細(xì)胞提供種子細(xì)胞操作：方瓶三角搖瓶種子細(xì)胞罐，逐級(jí)擴(kuò)大培養(yǎng)工藝：生產(chǎn)細(xì)胞培養(yǎng)目的：培養(yǎng)細(xì)胞，收獲細(xì)胞培養(yǎng)液操作：接種細(xì)胞到生產(chǎn)細(xì)胞罐，流加濃縮培養(yǎng)基和植物水解蛋白，37培養(yǎng)，收獲培養(yǎng)液目前，該項(xiàng)目經(jīng)過(guò)培基礎(chǔ)養(yǎng)基篩選、流加組分篩選以及搖瓶培養(yǎng)工藝優(yōu)化，5L生物反應(yīng)器培養(yǎng)工藝的優(yōu)化，已經(jīng)初步形成了穩(wěn)定的5L反應(yīng)器培養(yǎng)工藝，已做的關(guān)鍵指標(biāo)的檢測(cè)所用樣品均來(lái)自5L反應(yīng)器的樣品。2、主要技術(shù)特點(diǎn)與技術(shù)指標(biāo)：1）技術(shù)特點(diǎn)本項(xiàng)目采用基因工程技術(shù)將編碼胰高血糖素樣肽-1受體激動(dòng)劑Exendin-4與人免疫

18、球蛋白IgG4的Fc段基因進(jìn)行融合，構(gòu)建高效的哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)載體。Exendin-4只有39個(gè)氨基酸，分子量相對(duì)較小，單獨(dú)表達(dá)的難度非常大，表達(dá)量低，采用融合方式表達(dá)在目前的5L反應(yīng)器條件下可以達(dá)到500800mg/L，進(jìn)一步優(yōu)化培養(yǎng)工藝還有繼續(xù)提升表達(dá)量的空間；融合IgG4的Fc有利于下游純化，同時(shí)Fc也不會(huì)產(chǎn)生ADCC功能，培養(yǎng)上清經(jīng)過(guò)Protein A純化純度就可達(dá)到98%，后續(xù)的純化壓力非常??；融合Fc表達(dá)顯著增加藥物蛋白在體內(nèi)的半衰期，減輕了患者的痛苦，增加了依從性；Exendin-4基因與人的GLP-1基因只有53%的序列同源，在使用Byetta或Bydureon后不可避免的會(huì)產(chǎn)

19、生抗體，融合Fc會(huì)顯著降低蛋白藥物的免疫原性。采用CHO表達(dá)E4-Fc融合蛋白培養(yǎng)工藝和純化工藝相對(duì)簡(jiǎn)單，容易實(shí)現(xiàn)放大，Lilly公司GLP-1-Fc臨床用量為1.6mg/次/周，以保守的表達(dá)量計(jì)算每1000L規(guī)?？梢陨a(chǎn)20萬(wàn)支，而1000L規(guī)模的培養(yǎng)直接成本不及50萬(wàn)人民幣，從而大大提高產(chǎn)品得率，降低生產(chǎn)成本。2）技術(shù)指標(biāo)(1).建立了穩(wěn)定表達(dá)rE-4-Fc的CHO工程細(xì)胞株。(2).建立了的5L反應(yīng)器培養(yǎng)工藝，表達(dá)量穩(wěn)定在500800mg/L，進(jìn)一步優(yōu)化還有提升空間。(3).建立了體外生物學(xué)活性測(cè)定方法。3、現(xiàn)有工作基礎(chǔ)(1) 已成功構(gòu)建了rE4-Fc高效的真核表達(dá)質(zhì)粒。(2) 經(jīng)過(guò)細(xì)胞

20、轉(zhuǎn)染、篩選已經(jīng)獲得了穩(wěn)定表達(dá)rE4-Fc的工程細(xì)胞株。(3) 經(jīng)過(guò)搖瓶工藝條件的初步摸索，初步建立了7.5L生物反應(yīng)器培養(yǎng)工藝，工程細(xì)胞株的目的蛋白表達(dá)水平至少可以達(dá)到500mg/L左右，如果進(jìn)一步的工藝優(yōu)化表達(dá)水平還能有較大提升的空間。(4) 體外生物學(xué)活性測(cè)定方法已建立，并對(duì)7.5L反應(yīng)器制備的樣品進(jìn)行了測(cè)定，生物學(xué)活性非常明顯。(5) 目的蛋白的DNA和氨基酸序列已經(jīng)得到驗(yàn)證，與設(shè)計(jì)一致。4、預(yù)計(jì)完成工作(1) 項(xiàng)目啟動(dòng)后810個(gè)月完成質(zhì)量研究和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立，并制備足夠的合格樣品用于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和穩(wěn)定性考察試驗(yàn)；(2) 618個(gè)月完成藥理藥效試驗(yàn)和安全性試驗(yàn)，制備合格的樣品送中檢院復(fù)核，啟

21、動(dòng)臨床申報(bào)工作。(3) 復(fù)核通過(guò)后1224個(gè)月力爭(zhēng)獲得臨床批件。（七）、知識(shí)產(chǎn)權(quán)情況Lilly公司的艾塞那肽注射液和阿斯利康的Bydureon均有較好的知識(shí)產(chǎn)權(quán)保護(hù)，并在市場(chǎng)上取得成功，Bydureon是艾塞那肽的制劑上改造，在分子結(jié)構(gòu)上未作改進(jìn)，本研究的重組rE4-Fc是利用基因工程技術(shù)進(jìn)行改造，不再依賴復(fù)雜的化學(xué)合成；利用工程細(xì)胞株獲得的rE4-Fc具有更高的生物活性，蛋白該有的相關(guān)修飾更為完整，半衰期進(jìn)一步延長(zhǎng)。并減化了制造工藝，降低了生產(chǎn)成本。針對(duì)該研究產(chǎn)品，已經(jīng)完成申請(qǐng)專利的撰寫。二、項(xiàng)目風(fēng)險(xiǎn)分析1.對(duì)同類產(chǎn)品形成明顯的競(jìng)爭(zhēng)優(yōu)勢(shì)，效果好，副作用小rE4-Fc與艾塞那肽、利拉魯肽一樣只

22、有在正常血糖和高血糖條件下，才刺激胰島素的分泌；在低血糖情況下， 無(wú)此作用，這點(diǎn)與傳統(tǒng)的磺酰脲類降糖藥不同。因此其在臨床上發(fā)生低血糖副作用的風(fēng)險(xiǎn)會(huì)降低。但其具有分子量大，體內(nèi)半衰期長(zhǎng)，不需要像艾塞那肽注射液那樣每天注射兩次，利拉魯肽每天注射一次，更是顯著減輕患者給藥帶來(lái)的痛苦，患者對(duì)藥物的依從性好，exendin-4融合Fc后也顯著降低藥物的免疫原性?；颊邔?duì)艾塞那肽的耐受性較好， 不良反應(yīng)較輕，常見(jiàn)為輕度和中度惡心、嘔吐以及其他癥狀，隨著治療的繼續(xù), 惡心、嘔吐發(fā)生率和嚴(yán)重程度均會(huì)有所改善。2.國(guó)外研發(fā)進(jìn)展使其獲得臨床批件和新藥證書(shū)的可能性提高目前，批準(zhǔn)上市的GLP-1受體激動(dòng)劑藥物有Lill

23、y公司的艾塞那肽注射液、諾和諾德的利拉魯肽、阿斯利康的Bydureon、GSK的Albiglutide等治療II型糖尿病的藥物。Lilly開(kāi)發(fā)的Dulaglutide已經(jīng)完成期臨床，有望獲得FDA批準(zhǔn)上市。rE4-Fc的生物學(xué)活性明顯高于GLP-1-Fc。因此，開(kāi)發(fā)rE4-Fc獲得臨床批件和新藥證書(shū)的可能性非常大。3.良好療效及多適應(yīng)癥，具有較強(qiáng)的競(jìng)爭(zhēng)力rE4-Fc不僅可以治療II型糖尿病，而且還可以控制患者的體重，也可以用于多囊卵巢綜合癥(PCOS)的治療。這是目前所有治療糖尿病藥物所不具備的功能。這一功能又將使rE4-Fc具有一個(gè)更大的市場(chǎng)。有利于rE4-Fc在整個(gè)競(jìng)爭(zhēng)激烈的糖尿病藥物市場(chǎng)

24、中占據(jù)更大的份額。4.穩(wěn)定的培養(yǎng)工藝，為其產(chǎn)業(yè)化提供了良好的保障本項(xiàng)目采用exendin-4與IgG4的Fc片段融合表達(dá)，構(gòu)建了高效表達(dá)的CHO工程細(xì)胞株。工程細(xì)胞株經(jīng)過(guò)連續(xù)40次傳代，表達(dá)水平基本一致，純批次表達(dá)量穩(wěn)定在300mg/L。經(jīng)過(guò)培基礎(chǔ)養(yǎng)基篩選、流加組分篩選以及搖瓶培養(yǎng)工藝優(yōu)化，初步建立了穩(wěn)定的5L反應(yīng)器培養(yǎng)工藝，簡(jiǎn)單流加培養(yǎng)至少可以達(dá)到500mg/L。在此基礎(chǔ)上比較容易的進(jìn)行中試優(yōu)化、放大等工作，并進(jìn)行三批穩(wěn)定的中試生產(chǎn)。產(chǎn)品的體外細(xì)胞生物學(xué)活性檢測(cè)均與有關(guān)文獻(xiàn)一致、且5L培養(yǎng)產(chǎn)品批次之間性狀一致。可以進(jìn)行進(jìn)一步的擴(kuò)大生產(chǎn)。同時(shí)本項(xiàng)目有成熟的動(dòng)物模型，從技術(shù)的角度和產(chǎn)業(yè)化規(guī)模方面

25、，都將得到很好的保障。從這些情況來(lái)看，本項(xiàng)目開(kāi)發(fā)重組rE4-Fc融合蛋白的成功率，以及在臨床上的安全性是較高，市場(chǎng)風(fēng)險(xiǎn)也低。三、市場(chǎng)分析糖尿病是一種多樣性的代謝性疾病，由胰島素分泌障礙、胰島素的作用障礙或兩者同時(shí)發(fā)生而造成。胰島素分泌量絕對(duì)或相對(duì)不足引起體內(nèi)糖代謝、蛋白質(zhì)代謝、脂肪代謝、水、電解質(zhì)代謝等的紊亂。嚴(yán)重時(shí)病人血糖異常升高，產(chǎn)生脫水、迅速進(jìn)入昏迷、休克、呼吸衰竭，死亡率達(dá)10%以上。目前全球糖尿病患者數(shù)已逾1.2億，其中90%左右為型糖尿病，而此數(shù)字還在逐年上升，估計(jì)到2025年，世界范圍將有3億人患上糖尿病。單在美國(guó)，每天糖尿病發(fā)現(xiàn)病例就有2100例，每天有500名以上患者死于糖尿

26、病。目前在中國(guó)已大約有超過(guò)9200萬(wàn)糖尿病患者，并以每年150-200萬(wàn)人增長(zhǎng)，并呈現(xiàn)患者人群年輕化趨勢(shì)。預(yù)計(jì)到2025年，我國(guó)糖尿病患者將達(dá)到1億人。糖尿病一旦患病需終身用藥，醫(yī)療花費(fèi)巨大，中國(guó)每年用于糖尿病治療費(fèi)用達(dá)120-130億元人民幣。糖尿病治療藥物的研究是目前國(guó)際藥物研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)，在最新生命科學(xué)研究的基礎(chǔ)上，針對(duì)一些新的藥物靶點(diǎn)，正進(jìn)行大量的藥物研究。目前在糖尿病的治療中，主要根據(jù)糖尿病的不同階段，采用抑制糖吸收、促進(jìn)糖代謝的藥物進(jìn)行治療，但是目前常用胰島素、磺酰脲類和二甲雙胍類等藥物對(duì)患者血糖控制情況并不理想，用藥患者的糖化血紅蛋白（Hbalc）的平均值都8%，從而增加糖尿病患者發(fā)生腎病、致盲和心臟病等并發(fā)癥的危險(xiǎn)；且伴有體重增加、低血糖癥、水腫等副作用。目前市場(chǎng)上急需一種理想的、針對(duì)II型糖尿病長(zhǎng)期性治療手段，用以阻止、延遲或逆轉(zhuǎn)-細(xì)胞功能減退。這類治療手段應(yīng)該發(fā)揮出一種獨(dú)特的作用機(jī)制，使之能產(chǎn)生一種輔助性的或與目前已有治療方法的協(xié)同作用；不會(huì)引起體重增加、低血糖癥或其它限制性的或難以處理的不良反應(yīng)；保持或增強(qiáng)-細(xì)胞的功能；