移液器的使用——馮健愉

1、移液器的使用移液器的使用馮健愉馮健愉2013-09-22 Pipetting or measuring and transferring small volumes of liquid in the microliter and milliliter range is probably the most frequently practiced activity in scientific laboratories, and to be able to carry out this task quickly and precisely is an absolute prerequisite f

2、or successful laboratory work.Pipette移液器（槍?zhuān)┮埔浩鳎專(zhuān)㏕ip吸頭（槍頭）吸頭（槍頭）背景：微量加樣器（移液器）最早出現(xiàn)于背景：微量加樣器（移液器）最早出現(xiàn)于1956年，由德國(guó)年，由德國(guó)生理化學(xué)研究所的科學(xué)家生理化學(xué)研究所的科學(xué)家Schnitger發(fā)明，其后，在發(fā)明，其后，在1958年德國(guó)年德國(guó)Eppendorf公司開(kāi)始生產(chǎn)按鈕式微量加樣器，成為公司開(kāi)始生產(chǎn)按鈕式微量加樣器，成為世界上第一家生產(chǎn)微量加樣器的公司。世界上第一家生產(chǎn)微量加樣器的公司。工作原理：移液器的工作原理非常簡(jiǎn)單工作原理：移液器的工作原理非常簡(jiǎn)單通過(guò)彈簧的伸通過(guò)彈簧的伸縮力量使活塞上下

3、活動(dòng)，排出或吸取液體?？s力量使活塞上下活動(dòng)，排出或吸取液體。 移液器的結(jié)構(gòu)：一般包括控制按鈕（不同廠家設(shè)計(jì)不同，移液器的結(jié)構(gòu)：一般包括控制按鈕（不同廠家設(shè)計(jì)不同，通常也通過(guò)此按鈕進(jìn)行吸液體積調(diào)解）、吸頭推卸按鈕、通常也通過(guò)此按鈕進(jìn)行吸液體積調(diào)解）、吸頭推卸按鈕、體積顯示窗、套筒、彈性吸嘴、吸頭。體積顯示窗、套筒、彈性吸嘴、吸頭。移液器的分類(lèi)移液器的分類(lèi)空氣墊加樣器空氣墊加樣器活塞正移動(dòng)加樣器活塞正移動(dòng)加樣器 多通道加樣器、電子加樣器和分配器多通道加樣器、電子加樣器和分配器 空氣墊（活塞沖程）加樣器：空氣墊（活塞沖程）加樣器： 可很方便地用于固定或可調(diào)體積液可很方便地用于固定或可調(diào)體積液體的加樣

4、，加樣體積的范圍在小于體的加樣，加樣體積的范圍在小于1l至至l0ml之間。加樣器中的空氣之間。加樣器中的空氣墊的作用是將吸于塑料吸頭內(nèi)的液體樣本與加樣器內(nèi)的活塞分隔開(kāi)墊的作用是將吸于塑料吸頭內(nèi)的液體樣本與加樣器內(nèi)的活塞分隔開(kāi)來(lái)，空氣墊通過(guò)加樣器活塞的彈簧樣運(yùn)動(dòng)而移動(dòng)，進(jìn)而帶動(dòng)吸頭中來(lái)，空氣墊通過(guò)加樣器活塞的彈簧樣運(yùn)動(dòng)而移動(dòng)，進(jìn)而帶動(dòng)吸頭中的液體，死體積和移液吸頭中高度的增加決定了加樣中這種空氣墊的液體，死體積和移液吸頭中高度的增加決定了加樣中這種空氣墊的膨脹程度。因此，活塞移動(dòng)的體積必須比所希望吸取的體積要大的膨脹程度。因此，活塞移動(dòng)的體積必須比所希望吸取的體積要大約約24，溫度、氣壓和空氣濕

5、度的影響必須通過(guò)對(duì)空氣墊加樣，溫度、氣壓和空氣濕度的影響必須通過(guò)對(duì)空氣墊加樣器進(jìn)行結(jié)構(gòu)上的改良而降低，使得在正常情況下不至于影響加樣的器進(jìn)行結(jié)構(gòu)上的改良而降低，使得在正常情況下不至于影響加樣的準(zhǔn)確度。一次性吸頭是本加樣系統(tǒng)的一個(gè)重要組成部分，其形狀、準(zhǔn)確度。一次性吸頭是本加樣系統(tǒng)的一個(gè)重要組成部分，其形狀、材料特性及與加樣器的吻合程度均對(duì)加樣的準(zhǔn)確度有很大的影響。材料特性及與加樣器的吻合程度均對(duì)加樣的準(zhǔn)確度有很大的影響。 不足：不適宜移取高粘稠度液體、揮發(fā)性較大的液體、易發(fā)生交叉污染、錯(cuò)誤的使用習(xí)不足：不適宜移取高粘稠度液體、揮發(fā)性較大的液體、易發(fā)生交叉污染、錯(cuò)誤的使用習(xí)慣易造成移液器精度不準(zhǔn)

6、甚至移液器內(nèi)部腐蝕等等。慣易造成移液器精度不準(zhǔn)甚至移液器內(nèi)部腐蝕等等。 活塞正移動(dòng)加樣器：以活塞正移動(dòng)為原理的加樣器和分配器與空活塞正移動(dòng)加樣器：以活塞正移動(dòng)為原理的加樣器和分配器與空氣墊加樣器所受物理因素的影響不同，因此，在空氣墊加樣器難以氣墊加樣器所受物理因素的影響不同，因此，在空氣墊加樣器難以應(yīng)用的情況下，活塞正移動(dòng)加樣器可以應(yīng)用，如具有高蒸汽壓的、應(yīng)用的情況下，活塞正移動(dòng)加樣器可以應(yīng)用，如具有高蒸汽壓的、高黏稠度以及密度大于高黏稠度以及密度大于2.0g/cm3的液體；又如在臨床聚合酶鏈反應(yīng)的液體；又如在臨床聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)測(cè)定中，為防止氣溶膠的產(chǎn)生，最好使用活塞正移動(dòng)加樣器。測(cè)定

7、中，為防止氣溶膠的產(chǎn)生，最好使用活塞正移動(dòng)加樣器?；钊苿?dòng)加樣器的吸頭與空氣墊加樣器吸頭有所不同，其內(nèi)含一活塞正移動(dòng)加樣器的吸頭與空氣墊加樣器吸頭有所不同，其內(nèi)含一個(gè)可與加樣器的活塞耦合的活塞，這種吸頭一般由生產(chǎn)活塞正移動(dòng)個(gè)可與加樣器的活塞耦合的活塞，這種吸頭一般由生產(chǎn)活塞正移動(dòng)加樣器的廠家配套生產(chǎn)，不能使用通常的吸頭或不同廠家的吸頭。加樣器的廠家配套生產(chǎn)，不能使用通常的吸頭或不同廠家的吸頭。 多通道加樣器、電子加樣器和分配器：多通道加樣器、電子加樣多通道加樣器、電子加樣器和分配器：多通道加樣器、電子加樣器和分配器的原理與上述相同。多通道加樣器通常為器和分配器的原理與上述相同。多通道加樣器通

8、常為8通道或通道或12通通道，與道，與8*1296孔微孔板一致。多通道加樣器的使用不但可減少實(shí)孔微孔板一致。多通道加樣器的使用不但可減少實(shí)驗(yàn)操作人員的加樣操作次數(shù)，而且可提高加樣的精密度。電子加樣驗(yàn)操作人員的加樣操作次數(shù)，而且可提高加樣的精密度。電子加樣器和分配器為半自動(dòng)加樣系統(tǒng)，電子加樣器最大的優(yōu)點(diǎn)是其具有很器和分配器為半自動(dòng)加樣系統(tǒng)，電子加樣器最大的優(yōu)點(diǎn)是其具有很高的加樣重復(fù)性，應(yīng)用范圍廣。高的加樣重復(fù)性，應(yīng)用范圍廣。 移液器的選購(gòu)要點(diǎn)移液器的選購(gòu)要點(diǎn) 1.產(chǎn)品性能，即移液器的準(zhǔn)確性和重復(fù)性產(chǎn)品性能，即移液器的準(zhǔn)確性和重復(fù)性 2.產(chǎn)品的可靠耐用產(chǎn)品的可靠耐用 3.產(chǎn)品的人體工程學(xué)設(shè)計(jì)產(chǎn)品的

9、人體工程學(xué)設(shè)計(jì) 常見(jiàn)移液器的品牌：常見(jiàn)移液器的品牌：國(guó)產(chǎn)：大龍（國(guó)產(chǎn)：大龍（Dragonmed）、金花（北京青云）、金花（北京青云） 進(jìn)口：進(jìn)口：德國(guó)德國(guó)艾本德（艾本德（EPPENDORF）、）、美美/法法吉爾森（吉爾森（GILSON）、）、芬蘭芬蘭雷勃雷勃（Finnpipette）、）、芬蘭芬蘭百得（百得（BIOHIT）、）、德國(guó)德國(guó)普蘭德（普蘭德（BRAND）、）、日本日本立立洋（洋（NICHIRYO）、）、美國(guó)美國(guó)瑞寧（瑞寧（RAININ）、）、瑞士瑞士SOCOREX、瑞士瑞士哈美頓哈美頓（Hamilton）、）、波蘭波蘭HTL、美國(guó)美國(guó)Labnet、丹麥丹麥CAPP等等 。4.售后服務(wù)

10、質(zhì)量售后服務(wù)質(zhì)量移液器的正確操作和注意事項(xiàng)移液器的正確操作和注意事項(xiàng)錯(cuò)誤的操作可能帶來(lái)錯(cuò)誤的操作可能帶來(lái)0.1%-5%的誤差！的誤差！ 設(shè)定容量設(shè)定容量 ：設(shè)定所需要的容量時(shí)應(yīng)調(diào)整到：設(shè)定所需要的容量時(shí)應(yīng)調(diào)整到大于大于設(shè)定容量值的設(shè)定容量值的 1/4 圈，再調(diào)至設(shè)定值，這樣可排除機(jī)械間隙，使設(shè)定量值準(zhǔn)確，即先圈，再調(diào)至設(shè)定值，這樣可排除機(jī)械間隙，使設(shè)定量值準(zhǔn)確，即先將容量調(diào)節(jié)鈕旋轉(zhuǎn)超過(guò)目的容量值的將容量調(diào)節(jié)鈕旋轉(zhuǎn)超過(guò)目的容量值的 1/4 圈，再向下調(diào)至設(shè)定值。圈，再向下調(diào)至設(shè)定值。 （移液范圍在滿量程的（移液范圍在滿量程的35%-100%，可保證最佳的精度和重復(fù)性。），可保證最佳的精度和重復(fù)性

11、。）吸液的操作吸液的操作: 1、連接恰當(dāng)?shù)奈^（安裝吸頭時(shí)，移液器套柄用力下壓并小幅度旋轉(zhuǎn)、連接恰當(dāng)?shù)奈^（安裝吸頭時(shí)，移液器套柄用力下壓并小幅度旋轉(zhuǎn)即可，避免用力敲擊吸頭）；即可，避免用力敲擊吸頭）；2、按下控制鈕至第一檔（反向移液（適用于高粘度或易揮發(fā)樣品）吸、按下控制鈕至第一檔（反向移液（適用于高粘度或易揮發(fā)樣品）吸液時(shí)直接將按鈕按到第二檔釋放，排液時(shí)只需按到第一檔即可）；液時(shí)直接將按鈕按到第二檔釋放，排液時(shí)只需按到第一檔即可）； 3、將移液器吸頭、將移液器吸頭垂直（或傾角不超過(guò)垂直（或傾角不超過(guò)20）進(jìn)入液面下進(jìn)入液面下 1-6mm （視移（視移液器容量大小而定）；液器容量大小而定）；

12、 吸液器量程吸液器量程吸頭浸入深度吸頭浸入深度0.1-10l1-2mm2-200l2-3mm200-2000l3-6mm2000l6-10mm注：為使測(cè)量準(zhǔn)確可將吸頭預(yù)洗注：為使測(cè)量準(zhǔn)確可將吸頭預(yù)洗 3 次，即反復(fù)吸排液體次，即反復(fù)吸排液體 3 次。次。 吸液的操作吸液的操作: 4、使控制鈕緩慢滑回原位；、使控制鈕緩慢滑回原位； 5、移液器移出液面前略等待、移液器移出液面前略等待 1-3 秒；秒； 量程量程停頓時(shí)間停頓時(shí)間1000l以下以下1s5-10ml2-3s 6、緩慢取出吸頭，確保吸頭外壁無(wú)液體。、緩慢取出吸頭，確保吸頭外壁無(wú)液體。 小貼士：避免吸液速度過(guò)快；移液速度保持均勻；保持移液的

13、節(jié)奏和壓力一致。小貼士：避免吸液速度過(guò)快；移液速度保持均勻；保持移液的節(jié)奏和壓力一致。排液的操作：排液的操作： 1、將吸頭以一定角度抵住容量?jī)?nèi)壁；、將吸頭以一定角度抵住容量?jī)?nèi)壁； 2、緩慢將控制鈕按至第一檔并等待約、緩慢將控制鈕按至第一檔并等待約13秒；秒； 3、將控制鈕按至第二檔過(guò)程中，吸頭將剩余液體排凈；、將控制鈕按至第二檔過(guò)程中，吸頭將剩余液體排凈； 4、慢慢放控制鈕；放控制鈕； 5、按壓彈射鍵彈射出吸頭。、按壓彈射鍵彈射出吸頭。 養(yǎng)護(hù)：養(yǎng)護(hù)： 1、如液體不小心進(jìn)入活塞室應(yīng)及時(shí)清除污染物；、如液體不小心進(jìn)入活塞室應(yīng)及時(shí)清除污染物； 2、移液器使用完畢后，把移液器量程調(diào)至最大值，且將移液器

14、、移液器使用完畢后，把移液器量程調(diào)至最大值，且將移液器垂直放置在移液器架上；垂直放置在移液器架上； 3、根據(jù)使用頻率所有的移液器應(yīng)定期用肥皂水清洗或用、根據(jù)使用頻率所有的移液器應(yīng)定期用肥皂水清洗或用 60 的的異丙醇消毒，再用雙蒸水清洗并晾干；異丙醇消毒，再用雙蒸水清洗并晾干； 4、避免放在溫度較高處以防變形致漏液或不準(zhǔn)；、避免放在溫度較高處以防變形致漏液或不準(zhǔn)； 5、發(fā)現(xiàn)問(wèn)題及時(shí)找專(zhuān)業(yè)人員處理。、發(fā)現(xiàn)問(wèn)題及時(shí)找專(zhuān)業(yè)人員處理。 注意事項(xiàng)：注意事項(xiàng)： 1、當(dāng)移液器吸頭有液體時(shí)切勿將移液器水平或倒置放置，以防、當(dāng)移液器吸頭有液體時(shí)切勿將移液器水平或倒置放置，以防液體流入活塞室腐蝕移液器活塞；液體流

15、入活塞室腐蝕移液器活塞； 2、正確使用移液器吸液、排液，以達(dá)高精準(zhǔn)度。尤其注意排液、正確使用移液器吸液、排液，以達(dá)高精準(zhǔn)度。尤其注意排液的第的第2、3點(diǎn)操作；點(diǎn)操作； 3、平時(shí)檢查是否漏液的方法：、平時(shí)檢查是否漏液的方法： 吸液后在液體中停吸液后在液體中停 1-3 秒觀察吸頭內(nèi)液面是否下降；如果液面下秒觀察吸頭內(nèi)液面是否下降；如果液面下降首先檢查吸頭是否有問(wèn)題，如有問(wèn)題更換吸頭，更換吸頭后液面降首先檢查吸頭是否有問(wèn)題，如有問(wèn)題更換吸頭，更換吸頭后液面仍下降說(shuō)明活塞組件有問(wèn)題，應(yīng)找專(zhuān)業(yè)維修人員修理。仍下降說(shuō)明活塞組件有問(wèn)題，應(yīng)找專(zhuān)業(yè)維修人員修理。 4、需要高溫消毒的移液器應(yīng)首先查閱所使用的移液器是否適合、需要高溫消毒的移液器應(yīng)首先查閱所使用的移液器是否適合高溫消毒后再行處理。高溫消毒后再行處理。檢測(cè)微量移液器的準(zhǔn)確度檢測(cè)微量移液器的準(zhǔn)確度/操作準(zhǔn)確度操作準(zhǔn)確度儀器用具：儀器用具：Pipetman P1000, P200, P20；天平；小燒杯及；天平；小燒杯及蒸餾水蒸餾水方法步驟：方法步驟：1、將、將P1000, P200, P20 之體積調(diào)整圈旋轉(zhuǎn)至最高值之體積調(diào)整圈旋轉(zhuǎn)至最高值 （即（即1000, 200, 20）。）。2、天平上預(yù)先放置秤藥紙或秤藥盤(pán)并歸零。以微量移液