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1、出血性大腸桿菌O157：H7單克隆抗體的制備及其性質(zhì)鑒定83050243 張婷婷指導(dǎo)老師 李巖松 出血性大腸桿菌（EHEC）是水源性及食源性腸道致病菌，其中O157：H7血清型危害最大，它能感染動(dòng)物和人，引起人出血性結(jié)腸炎、血栓性血小板紫癜及溶血性尿路綜合癥等。圖1.大腸桿菌O157實(shí)驗(yàn)方法：實(shí)驗(yàn)方法：1. EHEC O157 Eae-Stx1/2B抗原免疫小鼠，測(cè)定小鼠血清抗體；2.PEG法融合細(xì)胞；3.選擇培養(yǎng)基篩選雜交瘤細(xì)胞；4.腹水誘生法制備單抗；5.單抗性質(zhì)鑒定。技術(shù)路線血清效價(jià)測(cè)定細(xì)胞融合融合細(xì)胞的篩選制備單抗單抗性質(zhì)鑒定1.血清抗體效價(jià) 小鼠經(jīng)4次免疫后 ，間接ELISA方法檢測(cè)
2、血清抗體，抗體效價(jià)均達(dá)1:10 000以上 ，達(dá)到細(xì)胞融合的實(shí)驗(yàn)要求。2.細(xì)胞融合結(jié)果細(xì)胞融合率達(dá)83%，其中7孔為強(qiáng)陽(yáng)性孔。圖2.細(xì)胞融合率27%3.雜交瘤細(xì)胞篩選 經(jīng) 3 次克隆篩選后，獲得1株分泌抗出血性大腸桿菌O157抗體的雜交瘤細(xì)胞株2H9。 4.抗體亞類(lèi)鑒定 按Sigma公司亞類(lèi)鑒定試劑盒說(shuō)明進(jìn)行鑒定,2H9細(xì)胞株單克隆抗體的亞類(lèi)為lgG2b.5.單抗穩(wěn)定性 2H9細(xì)胞株連續(xù)10次傳代培養(yǎng)后,上清檢測(cè)效價(jià)表明，2H9細(xì)胞株仍能穩(wěn)定分泌單克隆抗體。6.親和力測(cè)定 2H9細(xì)胞株單抗的親和常數(shù)為: 2.9106 。7.單抗特異性 8.純化前后腹水效價(jià)抗體稀釋倍數(shù)左圖.腹水效價(jià)測(cè)定； 右圖.純化腹水效價(jià)P/N值實(shí)驗(yàn)結(jié)論v1.血清抗體效價(jià)達(dá)1：10 000以上；v2.PEG法細(xì)胞融合率為83%；v3.篩選出一株穩(wěn)定分泌IgG2b亞類(lèi)抗體 的雜交瘤細(xì)胞株2H
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