第三章植物器官培養(yǎng)

1、第三章植物器官培養(yǎng)器官培養(yǎng)器官培養(yǎng)(Organ culture)植物某一器官的全部或部分或器官原基的培養(yǎng)。植物某一器官的全部或部分或器官原基的培養(yǎng)。根段、根尖、根段、根尖、 莖段、莖尖、莖段、莖尖、 塊莖、球莖、塊莖、球莖、 葉片、子葉、葉片、子葉、 花序、花瓣、子房、花托、花序、花瓣、子房、花托、果實、果實、 種子種子等。等。l 外植體選擇：外植體選擇：p28l洗滌：洗滌：p19l 滅菌：器皿滅菌滅菌：器皿滅菌p20 ， 外植體消毒外植體消毒p29第一節(jié)第一節(jié) 植物器官及組織培養(yǎng)的一般程序植物器官及組織培養(yǎng)的一般程序n培養(yǎng)基的選擇：基本培養(yǎng)基生長調節(jié)劑培養(yǎng)基的選擇：基本培養(yǎng)基生長調節(jié)劑p21

2、n培養(yǎng)基配置：特別是植物生長調節(jié)劑配置、培養(yǎng)基配置：特別是植物生長調節(jié)劑配置、保存保存p26-27n培養(yǎng)基滅菌：（尤其是某些不能高溫培養(yǎng)基滅菌：（尤其是某些不能高溫高壓滅菌的物質）高壓滅菌的物質） p20無無 菌菌 操操 作（技術）作（技術）p21Success!植物（活體）植物（活體）培養(yǎng)基（載體）培養(yǎng)基（載體）一般程序一般程序(p29-30)外植體取材外植體取材 自來水沖洗自來水沖洗10min以上以上 表面消毒表面消毒10-30s 選擇適合消毒劑處理選擇適合消毒劑處理無菌水沖洗無菌水沖洗3-5次次 放入無菌培養(yǎng)皿備用放入無菌培養(yǎng)皿備用外植體消毒外植體消毒植物組織培養(yǎng)形態(tài)發(fā)生和植株再生植物組

3、織培養(yǎng)形態(tài)發(fā)生和植株再生一、概念和意義一、概念和意義1.1.莖尖培養(yǎng)概念莖尖培養(yǎng)概念莖尖分生組織培養(yǎng)莖尖分生組織培養(yǎng)指對不超過指對不超過0.1mm的莖尖或幾十微米的莖尖進行的培養(yǎng)。的莖尖或幾十微米的莖尖進行的培養(yǎng)。特點：可獲脫病毒苗，操作困難，成苗時間長。特點：可獲脫病毒苗，操作困難，成苗時間長。 普通莖尖培養(yǎng)普通莖尖培養(yǎng)對幾毫米至幾十毫米長的莖尖、芽尖及側芽的培養(yǎng)。對幾毫米至幾十毫米長的莖尖、芽尖及側芽的培養(yǎng)。操作技術簡單、易成活、成苗時間短、繁殖速度快。操作技術簡單、易成活、成苗時間短、繁殖速度快。 第二節(jié)第二節(jié) 莖尖培養(yǎng)莖尖培養(yǎng)莖段莖段 莖尖取材有限，莖尖取材有限，可采用帶芽或可采用帶芽

4、或不帶芽的莖段進行培養(yǎng)。不帶芽的莖段進行培養(yǎng)。優(yōu)點優(yōu)點容易成功、變異小、容易成功、變異小、性狀一致、繁殖速度快。性狀一致、繁殖速度快。用于快速繁殖。用于快速繁殖。莖尖培養(yǎng)莖尖培養(yǎng)在園藝植物離體培養(yǎng)中最常見，在園藝植物離體培養(yǎng)中最常見，可快速繁殖無性系；可快速繁殖無性系；培養(yǎng)脫病毒苗、培養(yǎng)脫病毒苗、品種改良；品種改良；基礎研究。基礎研究。2.2.莖尖培養(yǎng)意義莖尖培養(yǎng)意義蠟梅蠟梅莖段莖段（一）建立無菌材料（一）建立無菌材料 健壯枝梢健壯枝梢 去除葉片去除葉片 分成分成1-2cm1-2cm 自來水沖洗消毒自來水沖洗消毒 75% 75%的酒精的酒精3030秒秒 0.1% 0.1%升汞或升汞或2%2%次

5、氯酸鈉消毒次氯酸鈉消毒8-10min8-10min 無菌水無菌水 修剪剝離莖尖，通常切割下頂端修剪剝離莖尖，通常切割下頂端 通常切割下頂端通常切割下頂端0.1mm0.1mm葉原基的莖尖葉原基的莖尖 無菌水無菌水 接種。接種。 二、莖尖培養(yǎng)一般方法二、莖尖培養(yǎng)一般方法（莖尖分生組織）（莖尖分生組織）（二）培養(yǎng)基（二）培養(yǎng)基多為多為MS培養(yǎng)基及其改良配方，培養(yǎng)基及其改良配方，還有還有White配方、配方、B5配方、配方、Heller配方、配方、Gautheret配方等。配方等。1.1.固體培養(yǎng)法固體培養(yǎng)法特點特點瓊脂做凝固劑，莖尖基部緊貼培養(yǎng)基。瓊脂做凝固劑，莖尖基部緊貼培養(yǎng)基。優(yōu)點優(yōu)點操作較為簡

6、單，普遍。操作較為簡單，普遍。缺點缺點對有些植物培養(yǎng)較難。對有些植物培養(yǎng)較難。操作操作培養(yǎng)基分裝培養(yǎng)基分裝滅菌滅菌冷卻冷卻莖尖接種莖尖接種252533培養(yǎng)。培養(yǎng)。（三）培養(yǎng)方法（三）培養(yǎng)方法2.2.紙橋培養(yǎng)法紙橋培養(yǎng)法濾紙取代瓊脂，濾紙取代瓊脂，液體培養(yǎng)基。液體培養(yǎng)基。優(yōu)點優(yōu)點營養(yǎng)物質能均衡持久地供給外植體，利于外植體健康生長。營養(yǎng)物質能均衡持久地供給外植體，利于外植體健康生長。缺點缺點操作復雜。操作復雜。 莖尖培養(yǎng)可進行植物的無性快繁，莖尖培養(yǎng)可進行植物的無性快繁，并且技術較為成熟，也叫微繁技術。并且技術較為成熟，也叫微繁技術。三、普通莖尖培養(yǎng)與繁殖技術三、普通莖尖培養(yǎng)與繁殖技術（一）莖尖微

7、繁技術的一般方法（一）莖尖微繁技術的一般方法1. 無菌培養(yǎng)體系的建立無菌培養(yǎng)體系的建立外植體制備外植體制備正在生長的芽或腋芽、莖段、鱗莖切塊、塊莖、球莖。正在生長的芽或腋芽、莖段、鱗莖切塊、塊莖、球莖。莖尖組織大小為帶莖尖組織大小為帶2-4個葉原基或更多。個葉原基或更多。 操作程序操作程序類似一般無菌操作基本技術，類似一般無菌操作基本技術，基本培養(yǎng)基：基本培養(yǎng)基：MS、B5、White等，等，糖糖2-3%，生長調節(jié)劑。生長調節(jié)劑。培養(yǎng)條件培養(yǎng)條件1000-3000Lx、16hr、25。莖尖的發(fā)育方向及調節(jié)是采用生長調節(jié)劑，莖尖的發(fā)育方向及調節(jié)是采用生長調節(jié)劑，6-BA6-BA、KTKT等促進發(fā)

8、芽，等促進發(fā)芽，IBAIBA、NAANAA、2,4-D2,4-D促生根。促生根。培養(yǎng)的莖尖可能有幾種不同的發(fā)育方向培養(yǎng)的莖尖可能有幾種不同的發(fā)育方向 (1)腋芽萌發(fā)腋芽萌發(fā) (2)脫分化后產生胚狀體脫分化后產生胚狀體 (3)脫分化后直接產生不定器官脫分化后直接產生不定器官 (4)脫分化后形成愈傷組織脫分化后形成愈傷組織 用作懸浮培養(yǎng)細胞或原生質體的起始材料，用作懸浮培養(yǎng)細胞或原生質體的起始材料， 或用以分化大量胚狀體，或用以分化大量胚狀體， 或不定芽或不定芽.2.2.脫分化和再分化脫分化和再分化3.3.生根成苗生根成苗胚狀體可直接成苗，胚狀體可直接成苗，腋芽和不定芽須轉入生根培養(yǎng)基培養(yǎng)。腋芽和

9、不定芽須轉入生根培養(yǎng)基培養(yǎng)。 礦質元素高利于莖葉生長，低利于生根，故生根培養(yǎng)基中無機鹽低。礦質元素高利于莖葉生長，低利于生根，故生根培養(yǎng)基中無機鹽低。芽苗生根采取的措施芽苗生根采取的措施 (1)(1)降低基本培養(yǎng)基無機鹽濃度降低基本培養(yǎng)基無機鹽濃度 一般采用一般采用1/2MS1/2MS或改良或改良WhiteWhite基本培養(yǎng)基?；九囵B(yǎng)基。(2) (2) 調節(jié)生長素濃度調節(jié)生長素濃度 采用采用IBAIBA或有利于分化根。或有利于分化根。(3 )(3 )添加吸附劑添加吸附劑 如活性碳。如活性碳。(4 )(4 )減少瓊脂用量。減少瓊脂用量。試管苗的移栽應在生根后不久，當小根尚未停止生長之前及時移栽

10、。試管苗的移栽應在生根后不久，當小根尚未停止生長之前及時移栽。 （小根（小根5cm5cm左右）。左右）。即將形成的小植株轉移到土壤的過程。即將形成的小植株轉移到土壤的過程。這個過程是微繁殖最關鍵的一步。這個過程是微繁殖最關鍵的一步。保持小苗水分供需平衡保持小苗水分供需平衡選擇適當?shù)慕橘|選擇適當?shù)慕橘| 珍珠巖、蛭石、粗砂、爐灰渣、鋸木屑等。珍珠巖、蛭石、粗砂、爐灰渣、鋸木屑等。防止雜菌滋生防止雜菌滋生 保持環(huán)境干凈，農藥滅菌。保持環(huán)境干凈，農藥滅菌。注意光溫管理注意光溫管理 避免陽光直射、溫度適宜。避免陽光直射、溫度適宜。 4.4.試管苗的移植試管苗的移植( (二二) ) 影響莖尖培養(yǎng)微繁殖的因

11、素影響莖尖培養(yǎng)微繁殖的因素p基因型基因型p外植體的大小外植體的大小p供試植株的生理狀態(tài)供試植株的生理狀態(tài)p芽在植株上的部位芽在植株上的部位p供試植株的年齡供試植株的年齡p培養(yǎng)基：植物生長物質培養(yǎng)基：植物生長物質p褐變褐變p玻璃化玻璃化玻璃化苗的葉和嫩梢呈水晶透明或半透明水漬狀；玻璃化苗的葉和嫩梢呈水晶透明或半透明水漬狀； 整株矮化腫脹、失綠；整株矮化腫脹、失綠； 葉片皺縮成縱向卷曲，脆弱易碎；葉片皺縮成縱向卷曲，脆弱易碎； 葉表缺少角質層蠟質，沒有功能性氣孔，不具柵欄組織，僅有海綿組織。葉表缺少角質層蠟質，沒有功能性氣孔，不具柵欄組織，僅有海綿組織。玻璃化苗中因其體內含水量高，玻璃化苗中因其體

12、內含水量高，干物質、葉綠素、蛋白質、纖維素和酶活性降低，干物質、葉綠素、蛋白質、纖維素和酶活性降低，組織畸形，器官功能不全，組織畸形，器官功能不全，分化能力降低，所以很難成活，分化能力降低，所以很難成活，嚴重影響組培苗繁殖率的提高。嚴重影響組培苗繁殖率的提高。 一、離體葉培養(yǎng)概念及意義一、離體葉培養(yǎng)概念及意義1.1.離體葉培養(yǎng)概念離體葉培養(yǎng)概念 指包括葉原基、葉柄、葉鞘、指包括葉原基、葉柄、葉鞘、 葉片、子葉等的無菌培養(yǎng)。葉片、子葉等的無菌培養(yǎng)。 多經(jīng)脫分化形成愈傷組織，多經(jīng)脫分化形成愈傷組織， 再由后者分化出莖和根。再由后者分化出莖和根。第三節(jié)第三節(jié) 葉的培養(yǎng)葉的培養(yǎng)桫欏葉片桫欏葉片研究葉形

13、態(tài)建成、光合作用、葉綠素形成等理論問題的良好方法。研究葉形態(tài)建成、光合作用、葉綠素形成等理論問題的良好方法。 葉原基培養(yǎng)成為成熟葉，從而觀察葉形態(tài)發(fā)生的過程。葉原基培養(yǎng)成為成熟葉，從而觀察葉形態(tài)發(fā)生的過程。通過葉片組織的脫分化和再分化培養(yǎng)，以證實葉細胞的全能性。通過葉片組織的脫分化和再分化培養(yǎng)，以證實葉細胞的全能性。通過離體葉組織、細胞的培養(yǎng)，通過離體葉組織、細胞的培養(yǎng)， 探索離體葉組織、細胞培養(yǎng)的條件和影響因素。探索離體葉組織、細胞培養(yǎng)的條件和影響因素。利用離體葉組織的再生特性，建立植物體細胞快速無性繁殖系，利用離體葉組織的再生特性，建立植物體細胞快速無性繁殖系， 提高某些不易繁殖植物的繁殖

14、系數(shù)。提高某些不易繁殖植物的繁殖系數(shù)。葉細胞培養(yǎng)物是良好的遺傳誘變系統(tǒng)，葉細胞培養(yǎng)物是良好的遺傳誘變系統(tǒng)， 經(jīng)過自然變異或者人工誘變處理可篩選出突變體應用于育種實踐。經(jīng)過自然變異或者人工誘變處理可篩選出突變體應用于育種實踐。 2.2.離體葉培養(yǎng)意義離體葉培養(yǎng)意義（一）葉原基培養(yǎng)（一）葉原基培養(yǎng) 葉原基培養(yǎng)是研究形態(tài)建成的重要手段。葉原基培養(yǎng)是研究形態(tài)建成的重要手段。 1. 采用休眠期頂芽，剝去一部分鱗片。采用休眠期頂芽，剝去一部分鱗片。 2. 在在5%次氯酸鈉溶液中浸泡次氯酸鈉溶液中浸泡20min，進行表面消毒。，進行表面消毒。 3. 切取柱狀葉原基進行培養(yǎng)。切取柱狀葉原基進行培養(yǎng)。 培養(yǎng)基采

15、用培養(yǎng)基采用Knops無機鹽（部分修改）或無機鹽（部分修改）或Kundson（1951）配方（大量元素），）配方（大量元素）， 添加添加Nitsch配方中的微量元素（再加配方中的微量元素（再加CoCl225mg/L）2%蔗糖、蔗糖、pH5.5。部分實驗中添加維生素、部分實驗中添加維生素、NAA、水解酪蛋白等，、水解酪蛋白等，溫度溫度24，人工光照，人工光照24h。 二、葉培養(yǎng)方法二、葉培養(yǎng)方法1.1.葉組織培養(yǎng)培養(yǎng)的方法葉組織培養(yǎng)培養(yǎng)的方法（二）葉組織培養(yǎng)（二）葉組織培養(yǎng)方法一（幼嫩葉片）方法一（幼嫩葉片）選取植株頂端未充分展開的幼嫩葉片選取植株頂端未充分展開的幼嫩葉片流水沖洗流水沖洗蘸有少量

16、蘸有少量75%酒精的紗布擦拭葉片兩面酒精的紗布擦拭葉片兩面放入放入0.1%升汞溶液中消毒升汞溶液中消毒5-8min無菌水沖洗無菌水沖洗3-4次次消毒后葉片轉入到鋪有濾紙的無菌培養(yǎng)皿內消毒后葉片轉入到鋪有濾紙的無菌培養(yǎng)皿內解剖刀切成解剖刀切成0.5cm0.5cm0.5cm0.5cm左右的小塊或薄片（如葉柄和子葉）左右的小塊或薄片（如葉柄和子葉）上表皮朝上接在固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)。上表皮朝上接在固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)。 70%酒精漂洗約酒精漂洗約10秒秒飽和漂白粉液中浸飽和漂白粉液中浸3-15分鐘分鐘無菌水沖洗數(shù)次無菌水沖洗數(shù)次放在無菌的干濾紙上吸干水分以供接種用。放在無菌的干濾紙上吸干水分以供接種用。對一

17、些粗糙或帶絨毛的葉片要延長滅菌時間。對一些粗糙或帶絨毛的葉片要延長滅菌時間。注意要選擇成熟的葉片。注意要選擇成熟的葉片。 同一葉片的柵欄組織比海綿組織較成熟。同一葉片的柵欄組織比海綿組織較成熟。培養(yǎng)葉肉組織時因海綿組織在分裂前就死亡，培養(yǎng)葉肉組織時因海綿組織在分裂前就死亡，如果柵欄組織不發(fā)達就難培養(yǎng)。如果柵欄組織不發(fā)達就難培養(yǎng)。方法二（成熟葉片）方法二（成熟葉片）葉片愈傷組織誘導形成葉片愈傷組織誘導形成常用常用MS、B5、White、N6等培養(yǎng)基，等培養(yǎng)基，3%糖，糖，培養(yǎng)基中添加椰子汁等有機添加物，培養(yǎng)基中添加椰子汁等有機添加物，有利于葉片組織培養(yǎng)中的形態(tài)發(fā)生。有利于葉片組織培養(yǎng)中的形態(tài)發(fā)生

18、。 大多數(shù)雙子葉植物的葉組織培養(yǎng)，大多數(shù)雙子葉植物的葉組織培養(yǎng)，細胞分裂素特別是細胞分裂素特別是KT、6-BA有利于芽的形成，有利于芽的形成，生長素特別是生長素特別是NAA有利于根的發(fā)生，有利于根的發(fā)生， 2,4-D有利于愈傷組織的形成。有利于愈傷組織的形成。一般一般 6-BA 1-3mg/L NAA 0.25-1mg/L 2. 2. 培養(yǎng)基培養(yǎng)基25-28，光照光照12-14h，光照度光照度 1500-2000Lx，不定芽分化和生長期間不定芽分化和生長期間3000-10000Lx。3.3.培養(yǎng)條件培養(yǎng)條件 直接產生不定芽；直接產生不定芽； 由愈傷組織產生不定芽；由愈傷組織產生不定芽； 胚狀體

19、形成；胚狀體形成； 其他途徑。其他途徑。 葉片的分化程度較高，葉片的分化程度較高，一般需要通過誘導愈傷組織并經(jīng)再分化才能產生植株，變異率較高。一般需要通過誘導愈傷組織并經(jīng)再分化才能產生植株，變異率較高。再分化能力弱的植物種類而言，葉片離體再生的難度相當大。再分化能力弱的植物種類而言，葉片離體再生的難度相當大。4.4.離體葉組織的莖和芽發(fā)生途徑離體葉組織的莖和芽發(fā)生途徑5.5.影響葉肉組織培養(yǎng)的因素影響葉肉組織培養(yǎng)的因素（1）基因型基因型 不同植物種類、不同植物種類、 同一物種的不同品種間在葉組織培養(yǎng)特性上有一定的差異。同一物種的不同品種間在葉組織培養(yǎng)特性上有一定的差異。（2）細胞分裂素與生長素

20、的組合細胞分裂素與生長素的組合 兩種細胞分裂素都能促進芽的分化，兩種細胞分裂素都能促進芽的分化， 6-BA的作用好于的作用好于KT， 但但6-BA對不定芽的進一步發(fā)育（莖葉的形成）有抑制作用。對不定芽的進一步發(fā)育（莖葉的形成）有抑制作用。 細胞分裂素與生長素的組合細胞分裂素與生長素的組合 細胞分裂素與生長素配合使用，細胞分裂素與生長素配合使用， 誘導芽分化效果好于單獨使用細胞分裂素。誘導芽分化效果好于單獨使用細胞分裂素。（3 3）供試植株的發(fā)育時間和葉齡）供試植株的發(fā)育時間和葉齡 個體發(fā)育早期的幼嫩葉片較成熟幼嫩葉片分化能力高，個體發(fā)育早期的幼嫩葉片較成熟幼嫩葉片分化能力高，（4 4）葉脈）葉

21、脈 葉脈、葉柄分化能力較強。葉脈、葉柄分化能力較強。（5 5）極性）極性 葉背面朝上放置就不生長。葉背面朝上放置就不生長。（6 6）損傷）損傷 損傷后刺激誘導愈傷組織生長和器官發(fā)生。損傷后刺激誘導愈傷組織生長和器官發(fā)生。一、根培養(yǎng)一、根培養(yǎng)（一）根培養(yǎng)的實踐意義（一）根培養(yǎng)的實踐意義1.1.進行根系生理代謝研究的最優(yōu)良試驗體系。進行根系生理代謝研究的最優(yōu)良試驗體系。2.2.研究器官分化、形態(tài)建成的良好體系。研究器官分化、形態(tài)建成的良好體系。3.3.建立快速生長的根無性系，對藥物生產有重要意義。建立快速生長的根無性系，對藥物生產有重要意義。4.4.對根細胞培養(yǎng)物進行誘變處理，可篩選突變體，用于育

22、種實踐。對根細胞培養(yǎng)物進行誘變處理，可篩選突變體，用于育種實踐。第四節(jié)第四節(jié) 其他器官的培養(yǎng)其他器官的培養(yǎng)1.1.培養(yǎng)步驟培養(yǎng)步驟 離體根培養(yǎng)的第一步是要獲得無性繁殖系。離體根培養(yǎng)的第一步是要獲得無性繁殖系。 直接取室外植物的根系培養(yǎng)；直接取室外植物的根系培養(yǎng)； 植物種子，經(jīng)滅菌后，在無菌條件下發(fā)芽，獲得無菌苗，取根培養(yǎng)。植物種子，經(jīng)滅菌后，在無菌條件下發(fā)芽，獲得無菌苗，取根培養(yǎng)。 種子表面消毒種子表面消毒無菌條件下萌發(fā)無菌條件下萌發(fā)根伸長后切取根伸長后切取1.0cm1.0cm長的根尖長的根尖接種于培養(yǎng)基接種于培養(yǎng)基側根生長側根生長切取側根的根尖擴大培養(yǎng)切取側根的根尖擴大培養(yǎng)獲離體根無性系獲離

23、體根無性系 （二）離體根的培養(yǎng)方法（二）離體根的培養(yǎng)方法胡蘿卜根培養(yǎng)胡蘿卜根培養(yǎng)在一個培養(yǎng)瓶中，有液體和固體培養(yǎng)兩個組成部分：在一個培養(yǎng)瓶中，有液體和固體培養(yǎng)兩個組成部分：根尖部分處于液體培養(yǎng)中，根尖部分處于液體培養(yǎng)中，而根莖部分則插入含有有機成分的固體而根莖部分則插入含有有機成分的固體 培養(yǎng)基中。培養(yǎng)基中。可進行根系生長發(fā)育，營養(yǎng)代謝或結瘤試驗?？蛇M行根系生長發(fā)育，營養(yǎng)代謝或結瘤試驗。2.2.離體根培養(yǎng)的試驗系統(tǒng)離體根培養(yǎng)的試驗系統(tǒng)此裝置由此裝置由2個部分組成，個部分組成，下部是試管，管中裝有含無機鹽的營養(yǎng)液，下部是試管，管中裝有含無機鹽的營養(yǎng)液，并接種根瘤菌；并接種根瘤菌；上部是玻璃蓋，蓋

24、中有一單向開口的管狀凹槽，上部是玻璃蓋，蓋中有一單向開口的管狀凹槽，槽中盛放含有有機化合物的瓊脂固體培養(yǎng)基。槽中盛放含有有機化合物的瓊脂固體培養(yǎng)基。故有機營養(yǎng)從根基部吸收，故有機營養(yǎng)從根基部吸收， 無機營養(yǎng)從根尖吸收。無機營養(yǎng)從根尖吸收。 Bunting和和Horrocks1964年修改了年修改了Raggio等的裝置，等的裝置，變?yōu)樵诖稚持刑峁o機鹽。變?yōu)樵诖稚持刑峁o機鹽。利用這一技術研究菜豆、大豆等離體根根瘤菌的固氮情況，利用這一技術研究菜豆、大豆等離體根根瘤菌的固氮情況，結果表明這些根瘤菌含有血紅蛋白，并能固定大氣中的氮。結果表明這些根瘤菌含有血紅蛋白，并能固定大氣中的氮。Raggio1

25、965年等設計了離體根的結瘤實驗裝置。年等設計了離體根的結瘤實驗裝置。離體根培養(yǎng)多用無機離子濃度低的離體根培養(yǎng)多用無機離子濃度低的WhiteWhite培養(yǎng)基或其他培養(yǎng)基，培養(yǎng)基或其他培養(yǎng)基，MSMS、B5B5等也可采用，但必須將其濃度稀釋到等也可采用，但必須將其濃度稀釋到2/32/3或或1/21/2。（三）離體根培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基（三）離體根培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基成份成份 苜蓿濃度苜蓿濃度(mg/L) (mg/L) 西紅柿濃度西紅柿濃度(mg/L)(mg/L) Ca(NO3)2.4H2O 200 143.9Na2SO4 200 100KCl 65 40KNO3 82 NaH2PO4.2H2O 18.6

26、 10.6MgSO4.7H2O 740 368.5MnSO4.4H2O 4.5 3.35FeC6H5O7.3H2O 4 2.25ZnSO4.7H2O 2.7 1.34H3BO3 1.5 0.75KI 0.8 0.38CuSO4.5H2O 0.004 0.002MoO3 0.02 0.01甘氨酸甘氨酸 3 4 煙酸煙酸 0.5 0.75維生素維生素B1 0.1 0.1維生素維生素B6 0.1 0.1蔗糖蔗糖 20000 15000pH 5.5 5.2 1.1.基因型基因型 不同植物的根對培養(yǎng)的反應不同，不同植物的根對培養(yǎng)的反應不同，番茄、煙草、馬鈴薯、小麥可快速生長并繼代培養(yǎng)無限生長。番茄、煙草、馬鈴薯、小麥可快速生