病毒類生物制品安檢和效檢PPT課件

1、病毒類生物制品病毒類生物制品安全檢驗(yàn)和效力檢驗(yàn)安全檢驗(yàn)和效力檢驗(yàn)“安全、有效、穩(wěn)定、均一安全、有效、穩(wěn)定、均一”是獸用生物制品質(zhì)量概念的4個(gè)核心要素，對(duì)于生物制品而言,安全和效力檢驗(yàn)是所有預(yù)防用生物制品的必檢項(xiàng)目，也是生物制品企業(yè)質(zhì)量管理和檢驗(yàn)人員最主要的日常工作。嚴(yán)格規(guī)范的試驗(yàn)操作是取得真實(shí)準(zhǔn)確的檢驗(yàn)結(jié)果，保證制品質(zhì)量的前題。以下就病毒類制品的安全和效力檢驗(yàn)問題與大家進(jìn)行交流。l安全檢驗(yàn)的原理及技術(shù)依據(jù)l安全檢驗(yàn)的一般要求l安全檢驗(yàn)的一般判定原則l病毒類制品安全檢驗(yàn)的種類和控制要點(diǎn)l影響安全檢驗(yàn)結(jié)果的主要因素l安全檢驗(yàn)注意事項(xiàng)l安全檢驗(yàn)的安全措施 對(duì)人、畜及環(huán)境安全是對(duì)各類獸用生物制品最基本

2、的要求，安全檢驗(yàn)的原理原理就是生物制品大部分是用活的微生物制備而成，有些微生物本身就是強(qiáng)毒或殘余一定毒力;另外在制品生產(chǎn)過程中也可能由原材料、設(shè)備或操作過程造成外源毒素或微生物污染，如果沒有嚴(yán)格的控制手段和檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)有可能對(duì)人畜和環(huán)境造成危害。因此獸用生物制品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定：對(duì)于預(yù)防、治療用途的獸用生物制品必須進(jìn)行安全檢驗(yàn)。 獸用生物制品安全檢驗(yàn)的技術(shù)依據(jù)如下： 1、中華人民共和國獸藥典、獸用生物制品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、生物制品規(guī)程 2、企業(yè)的內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn) 3、企業(yè)安全檢驗(yàn)SOPl1、安檢樣品、安檢樣品：除另有規(guī)定外，每批抽3瓶混和后按照規(guī)定進(jìn)行檢驗(yàn)和判定；l2、場(chǎng)地：、場(chǎng)地：安全檢驗(yàn)應(yīng)在專用動(dòng)物舍內(nèi)進(jìn)行，不得

3、在野外進(jìn)行l(wèi)3、安檢動(dòng)物：、安檢動(dòng)物：安檢動(dòng)物必須符合各制品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和規(guī)程的要求l4、安檢動(dòng)物的飼養(yǎng)：、安檢動(dòng)物的飼養(yǎng)：安檢動(dòng)物應(yīng)單獨(dú)飼養(yǎng)不得與效檢免疫動(dòng)物及攻毒動(dòng)物同舍飼養(yǎng)，以免影響檢驗(yàn)結(jié)果l5、特殊規(guī)定：、特殊規(guī)定：凡生產(chǎn)口蹄疫疫苗的企業(yè)，對(duì)其生產(chǎn)的豬用活疫苗均需增加乳鼠進(jìn)行安檢。凡使用豬瘟強(qiáng)毒或污染豬瘟強(qiáng)毒的生物制品企業(yè)，對(duì)其所生產(chǎn)的豬用活疫苗均需用無豬瘟抗體的敏感豬進(jìn)行安檢。(避免交叉感染、散毒)l安檢動(dòng)物在檢驗(yàn)期間如有死亡時(shí)，必須及時(shí)解剖，明確原因，確屬意外死亡時(shí)，作無結(jié)果論；如檢驗(yàn)結(jié)果可疑，難以判定時(shí)，應(yīng)以加倍的該種動(dòng)物重檢；如不安全，則該批制品應(yīng)于報(bào)廢。l凡規(guī)定用多種動(dòng)物進(jìn)行安檢

4、的制品，只要有一種動(dòng)物的安檢結(jié)果不符合規(guī)定，即不得出售。 1 1、用本動(dòng)物進(jìn)行安全檢驗(yàn)、用本動(dòng)物進(jìn)行安全檢驗(yàn)l 用制品的靶動(dòng)物進(jìn)行安全檢驗(yàn)是最直接最有效的安全檢驗(yàn)方法，也是大部分獸用生物制品采用的方法。在用本動(dòng)物進(jìn)行安全檢驗(yàn)時(shí)必須注意以下問題：l（1）對(duì)于禽用疫苗: a.檢驗(yàn)用雞必須采用SPF雞，檢驗(yàn)用雞胚必須采用SPF雞胚，其優(yōu)點(diǎn)是不需測(cè)定有關(guān)抗體。b.對(duì)于某些標(biāo)準(zhǔn)暫時(shí)規(guī)定采用易感禽的，在試驗(yàn)前應(yīng)測(cè)定針對(duì)被檢制品抗原的特異性抗體水平，抗體效價(jià)必須符合規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)。l 在接種疫苗以后，必須及時(shí)進(jìn)行觀察，特別是對(duì)于發(fā)病病程短，不以死亡作為判定標(biāo)準(zhǔn)的制品（如法氏囊、傳支等疫苗）l 標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定必須解剖的

5、制品，必須在規(guī)定的時(shí)間內(nèi)進(jìn)行解剖和判定，需要進(jìn)行傳代的，應(yīng)采集病料按規(guī)定進(jìn)行傳代。l（2）對(duì)于哺乳類動(dòng)物疫苗，在接種前應(yīng)測(cè)定針對(duì)被檢制品抗原的特異性抗體水平，抗體效價(jià)必須符合規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)。 a.在接種疫苗以后，如規(guī)定某些觀察和測(cè)定指標(biāo)的（如體溫、局部反應(yīng)、肌體狀態(tài)、食欲變化等），必須按規(guī)定全面測(cè)定和觀察，并及時(shí)詳細(xì)記錄。 b.對(duì)于某些規(guī)定的特殊判定標(biāo)準(zhǔn)（如羊痘活疫苗，需測(cè)定痘腫反應(yīng)大小），應(yīng)及時(shí)準(zhǔn)確測(cè)量并記錄具體數(shù)據(jù)。l有的制品標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定可以用試驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行安全檢驗(yàn)l如牛瘟活疫苗（用小白鼠和豚鼠進(jìn)行檢驗(yàn)）l偽狂犬滅活疫苗（用家兔進(jìn)行檢驗(yàn)） 這種檢驗(yàn)方法較少采用，其特點(diǎn)是試驗(yàn)動(dòng)物比本動(dòng)物更為易感，而且

6、試驗(yàn)動(dòng)物均可表現(xiàn)出特異性的臨床癥狀。對(duì)于該類試驗(yàn)觀察要點(diǎn)是觀察要點(diǎn)是特異性的臨床癥狀l用本動(dòng)物和試驗(yàn)動(dòng)物同時(shí)進(jìn)行安全試驗(yàn)，是大多數(shù)哺乳類動(dòng)物用疫苗及多聯(lián)疫苗采用的方法。在這種安全試驗(yàn)中： a.小實(shí)驗(yàn)動(dòng)物一般承擔(dān)非特異性的安全評(píng)價(jià)指標(biāo)（內(nèi)毒素、佐劑安全性等）; b.本動(dòng)物承擔(dān)特異性安全評(píng)價(jià)指標(biāo); 對(duì)于這種安全檢驗(yàn)，除個(gè)別產(chǎn)品的特殊規(guī)定外，一般判定原則是:所有試驗(yàn)均應(yīng)符合規(guī)定，只要有一種試驗(yàn)不安全，均判為產(chǎn)品不安全。 有一些產(chǎn)品，因靶病毒對(duì)不同年齡的動(dòng)物致病性不同，可能規(guī)定需用不同年齡段的本動(dòng)物進(jìn)行安全檢驗(yàn)（如孕畜、仔畜等），對(duì)于這類制品應(yīng)按規(guī)定進(jìn)行檢驗(yàn)。l對(duì)于病毒類制品來說，由于病毒與細(xì)菌不同：

7、a.病毒更易受抗體及各種理化因素的影響；b.病毒類疫苗在生產(chǎn)過程中除易受細(xì)菌污染外，更易受外源病毒污染，因此潛在的不安全因素更為復(fù)雜，因此在對(duì)病毒類疫苗特別是弱毒活疫苗進(jìn)行檢驗(yàn)時(shí)應(yīng)注意以下幾點(diǎn)：l （1）接種動(dòng)物前及接種過程中應(yīng)注意對(duì)稀釋樣品進(jìn)行冷藏，防止病毒滅活及被細(xì)菌污染。 （2）必須確保試驗(yàn)動(dòng)物的抗體水平符合規(guī)定 （3）試驗(yàn)動(dòng)物的年齡、品種甚至性別必須符合規(guī)定 （4）某些非致死性病毒病病程較短，癥狀不典型，應(yīng)及時(shí)全面觀察，需要解剖的應(yīng)及時(shí)解剖，防止因觀察不及時(shí)造成不安全產(chǎn)品的放行。l1.為保證檢驗(yàn)的公正性，避免在對(duì)安全檢驗(yàn)結(jié)果判定的主觀影響，因此應(yīng)由2名檢驗(yàn)員共同進(jìn)行。l2.為防止污染，

8、涉及疫苗稀釋等操作步驟，應(yīng)當(dāng)在無菌條件下進(jìn)行。l3.動(dòng)物飼養(yǎng)環(huán)境要符合動(dòng)物飼養(yǎng)和檢驗(yàn)的要求，如果環(huán)境因素不穩(wěn)定，應(yīng)當(dāng)設(shè)置合適數(shù)量的同來源動(dòng)物對(duì)照。l4.檢驗(yàn)過程中，如出現(xiàn)發(fā)病時(shí)，要增加觀察次數(shù)，對(duì)死亡動(dòng)物要及時(shí)進(jìn)行解剖并進(jìn)行無害化處理 1 1、檢驗(yàn)過程中應(yīng)注意防止對(duì)檢驗(yàn)人員和環(huán)境的污染，檢驗(yàn)人員必須穿戴工作服、口罩及相關(guān)的安全防護(hù)器具，撒在操作臺(tái)、地面的產(chǎn)品要及時(shí)進(jìn)行原位消毒。 2 2、檢驗(yàn)完畢后開封的產(chǎn)品均要進(jìn)行高壓滅菌處理。 3 3、發(fā)病或死亡動(dòng)物、糞便及其污染物必須嚴(yán)格按照“防止散毒”等相關(guān)規(guī)定處理。 4 4、懷孕或手部有外傷的檢驗(yàn)人員禁止解剖死亡動(dòng)物。 5 5、在檢驗(yàn)過程中發(fā)生烈性傳染

9、病或人員意外時(shí)，必須迅速報(bào)告有關(guān)部門采取緊急措施。 l效力檢驗(yàn)的原理及依據(jù)效力檢驗(yàn)的原理及依據(jù)l效力檢驗(yàn)的一般要求效力檢驗(yàn)的一般要求l效力檢驗(yàn)的一般判定原則效力檢驗(yàn)的一般判定原則l病毒類制品效力檢驗(yàn)病毒類制品效力檢驗(yàn)的種類及質(zhì)量控制要點(diǎn)的種類及質(zhì)量控制要點(diǎn)l影響效力檢驗(yàn)結(jié)果的主要因素影響效力檢驗(yàn)結(jié)果的主要因素l效力檢驗(yàn)注意事項(xiàng)效力檢驗(yàn)注意事項(xiàng)l效力檢驗(yàn)的安全措施效力檢驗(yàn)的安全措施l 對(duì)于獸用預(yù)防和治療類生物制品來說，效力是制品的核心質(zhì)量要素之一，效力是制品中發(fā)揮主要作用的核心成分如抗原、抗體及佐劑等效能的集中反映，效力檢驗(yàn)是對(duì)以上各成分效能的綜合指標(biāo)進(jìn)行檢驗(yàn)，是制品放行前最主要的評(píng)價(jià)指標(biāo)，因此

10、獸用生物制品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和規(guī)程規(guī)定預(yù)防和治療用生物制品必須進(jìn)行效力檢驗(yàn)，影響制品效力的主要因素有抗原的免疫原性、有效抗原的含量、佐劑的效能等，在現(xiàn)有的效力檢驗(yàn)方法中，免疫攻毒試驗(yàn)是對(duì)以上各因素進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)的最有效的直接方法，而抗原含量測(cè)定、免疫動(dòng)物后的抗體效價(jià)測(cè)定等均屬于間接方法，但由于其指標(biāo)與免疫攻毒保護(hù)試驗(yàn)具有一定的平行關(guān)系因此可作為某些制品的效力檢驗(yàn)指標(biāo)。從生物制品的發(fā)展趨勢(shì)來看，由于人們對(duì)動(dòng)物保護(hù)、環(huán)境和生物安全的重視，這些間接方法特別是體外評(píng)價(jià)方法是最主要的發(fā)展方向。l效力檢驗(yàn)的技術(shù)依據(jù)如下： 1、中華人民共和國獸藥典、獸用生物制品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、生物制品規(guī)程、中華人民共和國獸藥典、獸用生物制

11、品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、生物制品規(guī)程 2、企業(yè)的內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)、企業(yè)的內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn) 3、企業(yè)效力檢驗(yàn)、企業(yè)效力檢驗(yàn)SOPl樣品要求樣品要求：a.除另有規(guī)定外一般每批疫苗任抽任抽1瓶瓶按規(guī)定進(jìn)行檢驗(yàn)；b.同批疫苗分為幾個(gè)亞批時(shí)，效力檢驗(yàn)均應(yīng)按亞批分別抽樣分別檢驗(yàn)，不能采用檢驗(yàn)一個(gè)亞批代表其它批或幾個(gè)亞批混和效檢的方法進(jìn)行檢驗(yàn)。l動(dòng)物要求動(dòng)物要求：a.應(yīng)選用同品種、體重大致相同并符合實(shí)驗(yàn)動(dòng)物要求的健康易感動(dòng)物；b.外購動(dòng)物要求來源相同,免疫前應(yīng)隔離觀察適當(dāng)時(shí)間，確證符合試驗(yàn)動(dòng)物標(biāo)準(zhǔn)要求后方可使用。c.隔離舍內(nèi)飼養(yǎng)。l接種要求接種要求：a.免疫動(dòng)物和對(duì)照動(dòng)物必須同時(shí)注射;b.強(qiáng)毒不能與免疫接種部位在同一個(gè)部位,例如左后腿

12、接種疫苗，攻毒部位應(yīng)選右后腿。l1、 免疫動(dòng)物中途有意外死亡或損失，如存活頭數(shù)仍能達(dá)到要求的保護(hù)頭數(shù)以上時(shí)，可以進(jìn)行攻毒，攻毒后如能達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的保護(hù)頭數(shù)，可判為合格。達(dá)不到保護(hù)頭數(shù)判為不合格，不得以保護(hù)百分率作為判定依據(jù)。攻毒后不合格，應(yīng)算為一次檢驗(yàn)。l2、對(duì)不規(guī)律的效檢結(jié)果如本動(dòng)物效檢不合格，小動(dòng)物檢驗(yàn)合格，應(yīng)判為不合格。l3、同時(shí)做兩個(gè)稀釋度檢驗(yàn)時(shí)，高稀釋度（如萬倍）合格，低稀釋度（如5000倍）不合格，判為無結(jié)果。l4、攻毒對(duì)照動(dòng)物死亡或發(fā)病頭數(shù)達(dá)不到規(guī)定要求，但免疫組動(dòng)物符合標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，該次檢驗(yàn)判為無結(jié)果，不計(jì)算在檢驗(yàn)次數(shù)內(nèi)，但必須簽在批簽發(fā)報(bào)表中。對(duì)照動(dòng)物不發(fā)病死亡時(shí)，不得重復(fù)攻毒。l

13、5、重檢規(guī)定：a.規(guī)定用本動(dòng)物檢驗(yàn)的制品，效檢兩次不合格，應(yīng)報(bào)廢，不得進(jìn)行第3次檢驗(yàn)。b.規(guī)定用本動(dòng)物或小動(dòng)物進(jìn)行效檢的制品，可用小動(dòng)物檢2次，本動(dòng)物檢1次，如本動(dòng)物檢驗(yàn)不合格，不得再用小動(dòng)物進(jìn)行重檢。l病毒類制品的效力檢驗(yàn)種類： 1 1、按照檢驗(yàn)形式、按照檢驗(yàn)形式分為：體內(nèi)試驗(yàn)和體外試驗(yàn)2類， 2、根據(jù)檢驗(yàn)內(nèi)容分為：攻毒保護(hù)試驗(yàn)、抗原含量測(cè)定、免疫抗體測(cè)定3類。 對(duì)于弱毒類活疫苗多采用抗原含量測(cè)定 對(duì)于滅活疫苗多采用攻毒保護(hù)試驗(yàn) 以下按照第二種分類方式介紹3類效力檢驗(yàn)方法的質(zhì)量控制要點(diǎn)l攻毒保護(hù)試驗(yàn)原理：使用疫苗進(jìn)行接種的最終目的是使接種過的動(dòng)物獲得抵抗強(qiáng)毒病原感染抵抗強(qiáng)毒病原感染的能力。因

14、此，對(duì)靶動(dòng)物或已經(jīng)建立的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型進(jìn)行接種后，用強(qiáng)毒病原進(jìn)行人工攻毒，根據(jù)動(dòng)物的保護(hù)情況判斷疫苗的效力，是用以檢驗(yàn)疫苗效力的最直觀方法。l攻毒保護(hù)試驗(yàn)種類：由于效力檢驗(yàn)采用的檢驗(yàn)動(dòng)物均為小樣本，一般不以保護(hù)百分率表示試驗(yàn)結(jié)果，按照結(jié)果表示方法分為：絕對(duì)保護(hù)比例、相對(duì)保護(hù)比率、半數(shù)保護(hù)量（PD50）、保護(hù)指數(shù)（PI值）4種方法。la.絕對(duì)保護(hù)比例方法絕對(duì)保護(hù)比例方法：主要用于采用致死性強(qiáng)毒進(jìn)行攻擊的產(chǎn)品或發(fā)病癥狀特異、判定客觀（如新城疫滅活疫苗）等產(chǎn)品，要求對(duì)照動(dòng)物全部發(fā)病死亡，免疫動(dòng)物以攻毒后的絕對(duì)保護(hù)數(shù)為判定標(biāo)準(zhǔn)。（免疫7/10、對(duì)照0/5）lb.相對(duì)保護(hù)比率方法相對(duì)保護(hù)比率方法：主要用于

15、攻毒毒株毒力較弱，不一定全部發(fā)病死亡的制品，如傳染性支氣管炎（免疫6/8、對(duì)照0/4或免疫8/8對(duì)照3/4）、兔瘟滅活疫苗（免疫4/4、對(duì)照3/4） ）lc.半數(shù)保護(hù)量（半數(shù)保護(hù)量（PD50）和保護(hù)指數(shù)（）和保護(hù)指數(shù)（PI值）值） 半數(shù)保護(hù)量測(cè)定方法:是以不同劑量疫苗免疫動(dòng)物，采用定量強(qiáng)毒進(jìn)行攻擊，通過計(jì)算可使50%動(dòng)物得到保護(hù)的疫苗免疫劑量評(píng)價(jià)制品的效力，該方法是攻毒保護(hù)試驗(yàn)的定量方法，是目前為止較為科學(xué)的一種方法。目前采用該方法的產(chǎn)品主要有口蹄疫滅活疫苗、雞傳染性鼻炎、新城疫二聯(lián)滅活疫苗等。 保護(hù)指數(shù)方法:在國內(nèi)使用不普遍，主要用于致病力較弱，評(píng)價(jià)指標(biāo)不十分客觀的制品，如馬立克活疫苗的攻毒

16、保護(hù)試驗(yàn)等，通過計(jì)算免疫組和對(duì)照組保護(hù)百分比的比值進(jìn)行效力評(píng)價(jià)。狂犬病滅活疫苗的攻毒保護(hù)試驗(yàn)，通過同時(shí)計(jì)算疫苗和參考疫苗的PD50，公式為：（疫苗的PD50/參考疫苗的PD50）參考疫苗的IU值，每頭份應(yīng)2IU。l1、動(dòng)物：必須是易感動(dòng)物，在免疫前除SPF動(dòng)物外，應(yīng)按要求測(cè)定抗體效價(jià)。l2、免疫：免疫接種量應(yīng)準(zhǔn)確l3、攻擊用強(qiáng)毒：攻毒前應(yīng)準(zhǔn)確測(cè)定毒價(jià)，在接種過程中應(yīng)注意對(duì)稀釋毒液進(jìn)行低溫保存。l4、試驗(yàn)觀察：攻毒后應(yīng)及時(shí)觀察，有剖檢要求的應(yīng)在規(guī)定時(shí)間進(jìn)行剖檢觀察，要求分離病毒的應(yīng)及時(shí)無菌采集病料。l5、記錄：應(yīng)按效力檢驗(yàn)SOP及時(shí)詳細(xì)記錄規(guī)定項(xiàng)目采用此方法的主要產(chǎn)品有： l雞新城疫滅活疫苗、雞

17、傳染性鼻炎-雞新城疫二聯(lián)滅活疫苗、偽狂犬病滅活疫苗、兔病毒性出血癥滅活疫苗、豬口蹄疫O型滅活疫苗、?？谔阋逴型滅活疫苗、豬瘟活疫苗(I)、豬瘟活疫苗（II）、雞傳染性喉氣管炎活疫苗、雞傳染性法氏囊病中等毒力株活疫苗、豬瘟、豬丹毒、豬多殺性巴氏桿菌三聯(lián)活疫苗、偽狂犬活疫苗、雞傳染性支氣管炎活疫苗、雞新城疫中等毒力活疫苗、雞新城疫低毒力活疫苗、雞新城疫-雞傳染性支氣管炎二聯(lián)活疫苗、鴨瘟活疫苗。 注：紅色字體疫苗表示可采用此方法，也可采用其他方法。l牛口蹄疫O型滅活疫苗效力檢驗(yàn)：用至少6月齡的健康易感牛（細(xì)胞中和抗體滴度1：8，或乳鼠中和抗體滴度1：4）15頭，分為3組，每組5頭，將待檢疫苗分為1頭

18、份、1/3頭份、1/9頭份3個(gè)劑量組，每一劑量組分別于頸部肌肉注射5頭牛。接種21天后，連同條件相同的對(duì)照牛2頭，每頭牛舌上表面兩側(cè)分兩點(diǎn)皮內(nèi)注射?？谔阋逴型病毒強(qiáng)毒，每點(diǎn)0.1ml（共0.2ml，含10000ID50）。連續(xù)觀察10日。對(duì)照牛應(yīng)至少3蹄出現(xiàn)水泡或潰瘍。免疫牛僅在舌面出現(xiàn)水泡或潰瘍，而其他部位無病變時(shí)判為保護(hù)，除舌面以外任一部位出現(xiàn)典型口蹄疫水泡或潰瘍判為不保護(hù)。根據(jù)免疫牛的保護(hù)數(shù)，按Reed-Muench法計(jì)算被檢疫苗的PD50，每頭份疫苗應(yīng)至少含3 PD50。l抗原含量測(cè)定原理：抗原含量測(cè)定原理：制品中的抗原含量與免疫效力一般呈平行關(guān)系，因此通過測(cè)定制品中的有效抗原含量可間

19、接反映制品的效力。l測(cè)定抗原含量的方法分為體內(nèi)測(cè)定抗原含量的方法分為體內(nèi)和體外兩類：體外兩類：la.a.對(duì)于病毒活疫苗主要是測(cè)定病毒含量，方法主要有:動(dòng)物、雞胚、細(xì)胞、血凝試驗(yàn)等。其中采用動(dòng)物和雞胚方法屬于體內(nèi)試驗(yàn)體內(nèi)試驗(yàn)；采用細(xì)胞和血凝試驗(yàn)為體外試體外試驗(yàn)驗(yàn)。結(jié)果表示主要有LD5O 、TCID50 、ELD50、PD50、EID5O）或蝕班數(shù)（PFU）、HA價(jià)等lb.對(duì)于滅活疫苗的抗原含量測(cè)定，體內(nèi)試驗(yàn)體內(nèi)試驗(yàn)主要是PD50方法，體外試驗(yàn)主要是一些血清學(xué)方法如ELISA等。l病毒含量測(cè)定方法：每批疫苗按瓶簽注明的頭份用指定的稀釋液作適當(dāng)稀釋后，通常選擇三個(gè)最佳稀釋度，按規(guī)定的途徑和劑量接種一

20、定數(shù)目指定的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、細(xì)胞、雞胚，在規(guī)定的時(shí)間內(nèi)觀察，根據(jù)動(dòng)物反應(yīng)、細(xì)胞病變、雞胚存活數(shù)或病變數(shù)，通過計(jì)算LD5O、TCID50 、ELD50、PD50、EID5O或蝕班數(shù)（PFU），以此來判定疫苗的效力。 l 病毒含量測(cè)定常見疫苗（12種）： 口蹄疫O、A型活疫苗、山羊活疫苗、雞傳染性喉氣管炎活疫苗、雞傳染性法氏囊病中等毒力株活疫苗、雞傳染性支氣管炎活疫苗、雞新城疫中等毒力活疫苗、雞新城疫低毒力活疫苗、雞新城疫、雞傳染性支氣管炎二聯(lián)活疫苗、雞痘活疫苗（）、小鵝瘟活疫苗、雞馬立克氏病活疫苗、雞馬力克氏病火雞皰疹病毒活疫苗。l 注：紅色字體疫苗表示可采用此方法，也可采用其他方法。l口蹄疫O、A型

21、活疫苗單價(jià)苗的效力檢驗(yàn)：將疫苗用PBS做10倍系列稀釋，O型苗以10-5、10-6、10-7三個(gè)個(gè)稀釋度，A型苗以10-6、10-7、10-83個(gè)稀釋度，各皮下接種34日齡乳鼠4只，每只0.1ml，觀察4-5日，根據(jù)乳鼠發(fā)病死亡數(shù)計(jì)算LD50，每0.1ml O型苗105.5 LD50， A型苗106.5LD50，判為合格。l 山羊痘活疫苗效力檢驗(yàn)方法之一：按瓶簽注明頭份，用生理鹽水稀釋測(cè)其毒價(jià)，每頭份病毒含量應(yīng)103.5 TCID50。l免疫抗體測(cè)定的原理：免疫抗體測(cè)定的原理：主要是采用血清學(xué)試驗(yàn)測(cè)血清學(xué)試驗(yàn)測(cè)定定疫苗免疫動(dòng)物后產(chǎn)生的保護(hù)性抗體效價(jià)保護(hù)性抗體效價(jià)，間接間接反映制品的效力反映制品

22、的效力。病毒性產(chǎn)品主要有病毒中和試驗(yàn)、HI試驗(yàn)、ELISA等，其中中和試驗(yàn)有體內(nèi)和體外試驗(yàn)兩種。HI試驗(yàn)、ELISA均屬于體外試驗(yàn)。l病毒中和試驗(yàn)有固定病毒稀釋血清、固定血清病毒中和試驗(yàn)有固定病毒稀釋血清、固定血清稀釋病毒兩種方法稀釋病毒兩種方法la.固定病毒稀釋血清法以中和抗體效價(jià)表示結(jié)固定病毒稀釋血清法以中和抗體效價(jià)表示結(jié)果果，中和抗體效價(jià)指能使50%指示動(dòng)物（雞胚、細(xì)胞）得到保護(hù)的抗體稀釋度lb.b.固定血清稀釋病毒以中和指數(shù)表示結(jié)果固定血清稀釋病毒以中和指數(shù)表示結(jié)果 中和指數(shù)指試驗(yàn)組LD50（ LD5O、TCID50 、ELD50、PD50、EID5O ）與對(duì)照組LD50（ LD5O、

23、TCID50 、ELD50、PD50、EID5O ）的比值l主要有雞產(chǎn)蛋下降綜合征滅活疫苗（HI抗體測(cè)定）、馬傳染性貧血活疫苗（補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)和瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)）法氏囊疫苗（中和抗體）。禽流感滅活疫苗等。l雞新城疫-雞傳染性支氣管炎二聯(lián)活疫苗、小鵝瘟活疫苗、偽狂犬病滅活疫苗。 注：紅色字體疫苗表示可采用此方法，也可采用其他方法。l雞產(chǎn)蛋下降綜合癥效力檢驗(yàn)：用3-6周齡的健康易感雞（HI抗體1：4）10只，每只肌肉或皮下注射疫苗0.5ml, 另取10只雞飼養(yǎng)不免疫；3-5周后采血，測(cè)定HI抗體，免疫雞HIHI抗體抗體幾何平均滴度1：128，對(duì)照雞抗體HI抗體效價(jià)應(yīng)1：4。l小鵝瘟活疫苗效力檢驗(yàn)方法之一；取健康成年鵝4只，分別采