總糖和還原糖的測(cè)定

1、總糖和還原糖的測(cè)定實(shí)驗(yàn)三實(shí)驗(yàn)三 總糖和還原糖的測(cè)定總糖和還原糖的測(cè)定 3,5二硝基水楊酸二硝基水楊酸(DNS)法法總糖和還原糖的測(cè)定一、目一、目 的的n 掌握還原糖和總糖的測(cè)定原理掌握還原糖和總糖的測(cè)定原理n 掌握分光光度計(jì)的使用掌握分光光度計(jì)的使用總糖和還原糖的測(cè)定二、原二、原 理理n還原糖還原糖：指含有自由醛基或酮基的糖類(lèi)：指含有自由醛基或酮基的糖類(lèi) 單糖單糖: 不能被水解成更小分子的糖不能被水解成更小分子的糖,單糖都是還原糖單糖都是還原糖 葡萄糖葡萄糖, 果糖果糖 寡糖寡糖: 最重要的是雙糖：最重要的是雙糖：Maltose（麥芽糖麥芽糖 ）,Sucrose（蔗糖）蔗糖） Lactose（

2、乳糖乳糖 ） 但但Sucrose不是還原糖不是還原糖 多糖多糖: 能水解成多個(gè)單糖分子能水解成多個(gè)單糖分子,如淀粉如淀粉,糖原和纖糖原和纖 維素維素 總糖和還原糖的測(cè)定 酸水解法酸水解法使沒(méi)有還原性的雙糖與多糖，徹使沒(méi)有還原性的雙糖與多糖，徹底水解成具有還原性的單糖，再進(jìn)行測(cè)定，這底水解成具有還原性的單糖，再進(jìn)行測(cè)定，這樣就可以求樣品中總糖的含量。樣就可以求樣品中總糖的含量?？偺呛瓦€原糖的測(cè)定測(cè)定方法比色法測(cè)定方法比色法HOOCNOOH NO22+ 還原糖 NOOH NH22(DNS)（3氨基5硝基水 楊酸 ） HOOC黃色黃色棕紅色棕紅色總糖和還原糖的測(cè)定 首先制作葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線，以標(biāo)準(zhǔn)葡萄

3、首先制作葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線，以標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖樣品進(jìn)行測(cè)定，以葡萄糖含量（糖樣品進(jìn)行測(cè)定，以葡萄糖含量（mg）為為橫坐標(biāo)，橫坐標(biāo)，OD540讀數(shù)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲讀數(shù)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。線。 待測(cè)樣品的待測(cè)樣品的OD540平均值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上平均值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出相應(yīng)的糖含量。查出相應(yīng)的糖含量?？偺呛瓦€原糖的測(cè)定n朗伯比爾（朗伯比爾（Lambert-Beer）定律）定律 朗伯比爾定律是比色分析的基本原理，這個(gè)定律是有色溶液對(duì)單色光的吸收程度與溶液及液層厚度間的定量關(guān)系。此定律是由朗伯定律和比爾定律歸納而得。 A或或D= =I I0 0/I/I A或D光吸收或光密度 I0 入射光強(qiáng)度 I 透射光強(qiáng)度總

4、糖和還原糖的測(cè)定三、試劑和器材三、試劑和器材 試劑：試劑：DNS試劑葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液 ；6M HCl；碘碘化鉀溶液；6M NaOH；0.1% 酚酞指示劑。 器材器材 容量瓶,試管，移液管，量筒，膠頭滴管，漏斗 50水浴，水浴，沸水浴，分光沸水浴，分光光度計(jì)等。光度計(jì)等。 材料材料 藕粉，玉米淀粉 總糖和還原糖的測(cè)定四、操作步驟四、操作步驟1.葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線制作2.還原糖的提取 藕粉藕粉改為稱(chēng)改為稱(chēng)1.0克克，50水浴20min浸出，水浴鍋中進(jìn)行3.總糖的水解及提取 玉米淀粉玉米淀粉測(cè)總糖，沸水浴20min酸水解，電磁爐中進(jìn)行4.樣品含糖量的測(cè)定總糖和還原糖的測(cè)定五、注意事項(xiàng)五、注意事項(xiàng)1. 實(shí)驗(yàn)

5、安全：強(qiáng)酸，強(qiáng)堿2. 總糖的水解及提取是兩次定容，中和至微紅色3. 先把樣品混勻混勻后測(cè)定OD540值（封口膜）4. 標(biāo)準(zhǔn)曲線制作與樣品含糖量測(cè)定應(yīng)同時(shí)進(jìn)行，一起顯色和比色 5.樣品測(cè)定：每個(gè)樣平行做三個(gè)試管，空白不做，用標(biāo)準(zhǔn)曲線中的0號(hào)管?？偺呛瓦€原糖的測(cè)定六、分光光度計(jì)的使用六、分光光度計(jì)的使用1).電源打開(kāi)，用波長(zhǎng)設(shè)置鍵，設(shè)置所需的分析波長(zhǎng)，預(yù)熱20分鐘；2).比色皿有光面和毛面，手接觸毛面；3).待測(cè)液倒至比色皿3/43/4高度高度，切忌太滿！4).空白對(duì)照放在比色皿槽的第一槽位；測(cè)定時(shí)濃度由低到高；5).將空白對(duì)照推（拉 )入光路中，按鍵，此時(shí)顯示器顯示的“BLA”直至顯示“100.

6、0”為止。6).將被測(cè)樣品推（拉）入光路，這時(shí)便可從顯示器上得到被測(cè)樣品的透射比或吸光度值。樣品讀數(shù)三遍讀數(shù)三遍，取平均值。7).使用分光光度計(jì)時(shí)帶測(cè)定樣品、洗瓶、廢液杯、筆和本。測(cè)定樣品、洗瓶、廢液杯、筆和本。總糖和還原糖的測(cè)定移液器的使用手法，兩檔位吸液吸液放液放液總糖和還原糖的測(cè)定1.比色時(shí)為什么要設(shè)計(jì)空白管？ 2.比較費(fèi)林試劑比色法與3,5-二硝基水楊酸比色法測(cè)定可溶性淀粉中還原糖和總糖的結(jié)果，這兩種方法各有何優(yōu)點(diǎn)？八、思考題八、思考題總糖和還原糖的測(cè)定 值日生值日生：每間教室第5、6組同學(xué) 職責(zé)職責(zé)：實(shí)驗(yàn)臺(tái)面物品整理歸位，水池邊的藍(lán)色垃圾桶清理干凈，教室里所用儀器電源插銷(xiāo)拔掉，關(guān)窗，最后把垃圾袋丟到廁所外的垃圾桶里?？偺呛瓦€原糖的測(cè)定重要通知重要通知n下周實(shí)驗(yàn)下周實(shí)驗(yàn)維生素維生素C C的定量測(cè)定的定量測(cè)定 為為開(kāi)放、開(kāi)放、設(shè)計(jì)型實(shí)驗(yàn)，撰寫(xiě)小論文設(shè)計(jì)型實(shí)驗(yàn)，撰寫(xiě)小論文，實(shí)驗(yàn)主題由各組自己擬定，可以以溫度實(shí)驗(yàn)主題由各組自己擬定，可以以溫度為主題，也可以以浸泡時(shí)間為主題，等為主題