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文檔簡介

1、實驗一、蛋白質的等電點測定和沉淀反應實驗一、蛋白質的等電點測定和沉淀反應一、目的1.了解蛋白質的兩性解離性質2.學習測定蛋白質等電點的一種方法3.加深對蛋白質膠體溶液穩(wěn)定因素的認識4.了解沉淀蛋白質的幾種方法及其實用意義二、原理 蛋白質是兩性電解質。在蛋白質溶液中存在下列平衡：等電點等電點: :當溶液的pH達到一定數(shù)值時，蛋白質顆粒上正負電荷的數(shù)目 相等，在電場中，蛋白質既不向陰極移動，也不向陽極移動，此時溶液的pH值稱為此種蛋白質的等電點。 1.四、操作步驟n（一）酪蛋白等電點的測定（1）取同樣規(guī)格的試管4支，加入各試劑，然后混勻。此時 4個管的pH依次為5.9、5.5、4.7、3.5。n（

2、2）各加酪蛋白的醋酸鈉溶液1mL， 加一管，搖勻一管。觀察其混濁度。靜置10分鐘后，再觀察其混濁度。最混濁的一管pH即為酪蛋白的等電點。 （二）蛋白質的沉淀及變性1、蛋白質的鹽析 n蛋白質的鹽析: 無機鹽（硫酸銨、硫酸鈉、氯化鈉等）的濃溶液能析出蛋白質。鹽的濃度不同，析出的蛋白質也不同。如球蛋白可在半飽和硫酸銨溶液中析出，而清蛋白則在飽和硫酸銨溶液中才能析出。n鹽溶:由鹽析獲得的蛋白質沉淀，當降低其鹽類濃度時，又能再溶解，故蛋白質的鹽析作用是可逆過程。n于試管中加入蛋白質溶液5mL ，再加等量的飽和硫酸銨溶液，混勻后靜置數(shù)分鐘則析出球蛋白的沉淀。倒出少量混濁沉淀，加少量水，觀察是否溶解，為什么

3、？將管內容物過濾，向濾液中添加硫酸銨粉末到不再溶解為止。此時析出沉淀為清蛋白。取出部分清蛋白，加少量蒸餾水，觀察沉淀的再溶解。2、重金屬離子沉淀蛋白質 n 重金屬離子與蛋白質結合成不溶于水的復合物。取1支試管，加入蛋白質溶液2mL，再加3%硝酸銀溶液12滴，振蕩試管，有沉淀產(chǎn)生。放置片刻，傾去上清液，向沉淀中加入少量的水，沉淀是否溶解？為什么？3、某些有機酸沉淀蛋白質 n 取1支試管，加入蛋白質溶液2mL，再加入1ml5%三氯乙酸溶液，振蕩試管，觀察沉淀的生成。放置片刻傾出清液，向沉淀中加入少量水，觀察沉淀是否溶解。4、有機溶劑沉淀蛋白質n 取1支試管，加入2mL蛋白質溶液，再加入2mL95%乙醇。觀察沉淀的生成（如果沉淀不明顯，加點NaCl，混勻。5、乙醇引起的變性與沉淀 n取3支試管，編號。依下表順序加入試劑五、注意事項n等電點測定的實驗要求各種試劑的濃度和加入量必須相當準確。六、實驗報告n以表格形式總結實驗結果，包括觀察到的現(xiàn)象

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