實(shí)驗(yàn)6淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的檢測(cè)

1、（1 1）穩(wěn)定性顯著提高穩(wěn)定性顯著提高( (熱穩(wěn)定性，對(duì)各種試劑的穩(wěn)定性等熱穩(wěn)定性，對(duì)各種試劑的穩(wěn)定性等) ) （2 2）同一批固定化酶能在工藝流程中）同一批固定化酶能在工藝流程中重復(fù)多次地使用重復(fù)多次地使用；（3 3）固定化后，）固定化后，易和反應(yīng)物分開(kāi)易和反應(yīng)物分開(kāi)，有利于控制生產(chǎn)過(guò)程有利于控制生產(chǎn)過(guò)程，同時(shí)也同時(shí)也省去了熱處理使酶失活的步驟省去了熱處理使酶失活的步驟；酶的固定化方法主要可分為四類(lèi)：酶的固定化方法主要可分為四類(lèi)：吸附法、共價(jià)偶聯(lián)法、吸附法、共價(jià)偶聯(lián)法、交聯(lián)法和包埋法交聯(lián)法和包埋法等。吸附法和共價(jià)偶聯(lián)法又可統(tǒng)稱(chēng)為載等。吸附法和共價(jià)偶聯(lián)法又可統(tǒng)稱(chēng)為載體結(jié)合法。體結(jié)合法。酶酶酶與

2、載體形成范德華力酶與載體形成范德華力酶和載體結(jié)合不牢固，在使用過(guò)程中容易脫落，所以使用受到限制。酶和載體結(jié)合不牢固，在使用過(guò)程中容易脫落，所以使用受到限制。 但必須注意，參加共價(jià)結(jié)合的氨基酸殘基但必須注意，參加共價(jià)結(jié)合的氨基酸殘基應(yīng)當(dāng)是應(yīng)當(dāng)是酶催化活性非必需基團(tuán)酶催化活性非必需基團(tuán)，如若共價(jià)，如若共價(jià)結(jié)合包括了酶活性中心有關(guān)的基團(tuán)，會(huì)導(dǎo)結(jié)合包括了酶活性中心有關(guān)的基團(tuán)，會(huì)導(dǎo)致酶的活力損失。致酶的活力損失。是將酶與聚合物載體以共價(jià)鍵結(jié)合的固定化方法。是將酶與聚合物載體以共價(jià)鍵結(jié)合的固定化方法。酶中的酶中的氨基、羧基氨基、羧基、巰基、羥基、咪唑基、巰基、羥基、咪唑基、吲哚基、苯環(huán)等常與載體共價(jià)結(jié)合吲

3、哚基、苯環(huán)等常與載體共價(jià)結(jié)合載載體體共共價(jià)價(jià)鍵鍵交聯(lián)法：是使用雙功能或多功能試劑使酶分子交聯(lián)法：是使用雙功能或多功能試劑使酶分子之間相互交聯(lián)呈網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的固定化方法。之間相互交聯(lián)呈網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的固定化方法。其中使用最廣泛的是其中使用最廣泛的是戊二醛戊二醛。戊二醛和酶蛋白中的游離氨基發(fā)生。戊二醛和酶蛋白中的游離氨基發(fā)生反應(yīng)，從而使酶分子之間相互交聯(lián)形成固定化酶。反應(yīng)，從而使酶分子之間相互交聯(lián)形成固定化酶。戊二醛戊二醛但是交聯(lián)法中酶的活性中心構(gòu)造可能受到影響，而使但是交聯(lián)法中酶的活性中心構(gòu)造可能受到影響，而使酶失活明顯酶失活明顯。常用的載體有常用的載體有海藻酸鈉凝膠海藻酸鈉凝膠微膠囊包埋法，微膠囊包埋法

4、，酶被包埋成微酶被包埋成微膠囊型膠囊型凝膠包埋法，酶凝膠包埋法，酶被包埋成網(wǎng)格型被包埋成網(wǎng)格型常用的載體有常用的載體有聚酰胺、聚酰胺、火棉膠、醋酸纖維素火棉膠、醋酸纖維素四、固定化酶技術(shù)應(yīng)用四、固定化酶技術(shù)應(yīng)用如生產(chǎn)高果糖漿的圖示：如生產(chǎn)高果糖漿的圖示：把酶固定在反應(yīng)柱上把酶固定在反應(yīng)柱上有何好處？有何好處？反應(yīng)柱能連續(xù)使用半反應(yīng)柱能連續(xù)使用半年，大大降低了生產(chǎn)年，大大降低了生產(chǎn)成本，提高果糖的產(chǎn)成本，提高果糖的產(chǎn)量和質(zhì)量。量和質(zhì)量。 淀粉淀粉 糊精糊精葡萄糖葡萄糖 麥芽糖麥芽糖遇碘顯藍(lán)色遇碘顯藍(lán)色遇碘顯紅色遇碘顯紅色遇碘不顯藍(lán)色遇碘不顯藍(lán)色遇碘不顯藍(lán)色遇碘不顯藍(lán)色淀粉酶淀粉酶淀粉酶淀粉酶糖化

5、淀粉酶糖化淀粉酶 淀粉淀粉 糊精糊精 石英砂石英砂 淀粉酶淀粉酶反應(yīng)柱反應(yīng)柱 分布著小分布著小孔的篩板孔的篩板五、五、“- 淀粉酶固定化淀粉酶固定化”實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟1、淀粉酶的固定化。淀粉酶的固定化。5mg 淀粉酶溶于淀粉酶溶于4ml蒸餾水，加入蒸餾水，加入5mg石英砂，攪拌石英砂，攪拌30min2、將石英砂裝入含氣門(mén)心并用夾子封住的注、將石英砂裝入含氣門(mén)心并用夾子封住的注射器中。用射器中。用40ml蒸餾水用流速蒸餾水用流速1ml/min來(lái)洗來(lái)洗滌除去未吸附的游離淀粉酶滌除去未吸附的游離淀粉酶3、使淀粉溶液以、使淀粉溶液以0.3ml/min的流速過(guò)柱，在流的流速過(guò)柱，在流出出5ml后接收后接收0.5ml流出液。加入流出液。加入1-2滴滴KI-I2溶