甾體激素類藥物分析藥物分析ppt課件

1、甾體激素類藥物甾體激素類藥物的分析的分析基基 本本 要要 求求1 1掌握甾體構(gòu)造類藥物的構(gòu)造特點(diǎn)與分析方掌握甾體構(gòu)造類藥物的構(gòu)造特點(diǎn)與分析方 法之間的關(guān)系。法之間的關(guān)系。2 2掌握甾體類藥物的鑒別原理與方法。掌握甾體類藥物的鑒別原理與方法。3 3掌握甾體類藥物的含量原理與方法。掌握甾體類藥物的含量原理與方法。4 4熟習(xí)甾體類藥物雜質(zhì)檢查的方法。熟習(xí)甾體類藥物雜質(zhì)檢查的方法。根本構(gòu)造：環(huán)戊烷駢多氫菲根本構(gòu)造：環(huán)戊烷駢多氫菲C20C21ABCD12345678910111213141516171819 概述概述分類：分類：甾體激素甾體激素腎上腺皮質(zhì)激素腎上腺皮質(zhì)激素性激素性激素雄性激素及蛋雄性激素

2、及蛋白同化激素白同化激素孕激素孕激素雌激素雌激素OHOOHOCH2OHHHH 腎上腺皮質(zhì)激素腎上腺皮質(zhì)激素氫化可的松氫化可的松OHOOHOHFHOCH3OHCH3腎上腺皮質(zhì)激素腎上腺皮質(zhì)激素醋酸地塞米松醋酸地塞米松OHOHOHCH3HHHOHFCH3O腎上腺皮質(zhì)激素腎上腺皮質(zhì)激素曲安息龍曲安息龍OHOHCH3HHHHOFCH3OOPONaOONaOH腎上腺皮質(zhì)激素腎上腺皮質(zhì)激素地塞米松磷酸鈉地塞米松磷酸鈉雄性激素雄性激素OCH3HHCH3OHHCH3甲睪酮甲睪酮OOHHHHOCH3雄性激素雄性激素丙酸睪酮丙酸睪酮OOHHHHO蛋白同化激素蛋白同化激素苯丙酸諾龍苯丙酸諾龍?jiān)屑に卦屑に攸S體酮黃體酮

3、OCH3HHHCH3OHCH3OCH3HHCH3OOHCH3OCH3CH3孕激素孕激素醋酸甲地孕酮醋酸甲地孕酮雌性激素雌性激素炔雌醇炔雌醇OHCH3HHHCCHHO雌性激素雌性激素OHCH3HHHHHO雌二醇雌二醇OHOHHHCH3HCCH炔諾酮炔諾酮此外此外OHOHHHH3CHCCH炔諾孕酮炔諾孕酮一、構(gòu)造與性質(zhì)一、構(gòu)造與性質(zhì) 1. 腎上腺皮質(zhì)激素腎上腺皮質(zhì)激素主要活性基團(tuán)主要活性基團(tuán)性性 質(zhì)質(zhì)4 4 3 3 酮酮UVUV、與羰基試、與羰基試劑反應(yīng)劑反應(yīng) C C1717 醇酮基醇酮基還還 原原 性性2. 2. 雄性激素及蛋白同化激素雄性激素及蛋白同化激素主要活性基團(tuán)主要活性基團(tuán)性性 質(zhì)質(zhì)4

4、4 3 3 酮酮UVUV、與羰基試、與羰基試劑反應(yīng)劑反應(yīng) C C17 17 羥基羥基可成酯可成酯3. 3. 孕激素孕激素主要活性基團(tuán)主要活性基團(tuán)性性 質(zhì)質(zhì)4 4 3 3 酮酮UVUV、與羰基試、與羰基試劑反應(yīng)劑反應(yīng)C C17 17 甲酮基甲酮基與亞硝基鐵氰與亞硝基鐵氰化納反應(yīng)化納反應(yīng)4. 4. 雌性激素雌性激素主要活性基團(tuán)主要活性基團(tuán)性性 質(zhì)質(zhì)A A環(huán)為環(huán)為3 3OH OH 苯環(huán)苯環(huán)UVUV、與重氮苯磺、與重氮苯磺酸鹽反應(yīng)酸鹽反應(yīng)C C17 17 乙炔基乙炔基與與AgNOAgNO3 3反應(yīng)反應(yīng)C C17 17 羥基羥基可成酯可成酯二、鑒別實(shí)驗(yàn)二、鑒別實(shí)驗(yàn)一與強(qiáng)酸的呈色反響一與強(qiáng)酸的呈色反響甾體

5、激素甾體激素類藥物類藥物呈色呈色H2SO4 H3PO4 H2SO4 H3PO4 HClO4 HClO4 HClHCl母核母核與硫酸顯色反響與硫酸顯色反響 顯顯 色色 熒光熒光 加水稀釋加水稀釋潑尼松龍潑尼松龍 深紅深紅 絮狀絮狀灰灰潑尼松潑尼松 橙橙 黃黃藍(lán)綠藍(lán)綠炔雌醚炔雌醚 橙紅橙紅 黃綠黃綠 紅色紅色 炔雌醇炔雌醇 橙紅橙紅 黃綠黃綠 絮狀絮狀玫紅玫紅醋酸可的松醋酸可的松 黃或微黃或微 褪色并澄褪色并澄 帶橙帶橙 清清( (二二) ) 官能團(tuán)的反響官能團(tuán)的反響腎上腺腎上腺皮質(zhì)激皮質(zhì)激素藥物素藥物呈色呈色四氮唑鹽四氮唑鹽OH1、C17 醇酮基醇酮基復(fù)原性復(fù)原性呈色反響呈色反響此外還有斐林試此

6、外還有斐林試液、多倫試液液、多倫試液甾酮類甾酮類激素藥激素藥物物呈色呈色羰基試劑羰基試劑2.C32.C3酮基和酮基和C20C20酮基酮基常用的羰基試劑：常用的羰基試劑：2,4-2,4-二硝基苯肼、異煙肼、硫酸苯肼二硝基苯肼、異煙肼、硫酸苯肼具有甲酮具有甲酮基或活潑基或活潑亞甲基的亞甲基的甾體激素甾體激素類藥物類藥物呈色呈色亞硝基鐵氰化納亞硝基鐵氰化納間二硝基酚間二硝基酚芳香醛芳香醛3.3.甲酮基甲酮基黃體酮黃體酮藍(lán)紫色藍(lán)紫色亞硝基鐵亞硝基鐵 氰化納氰化納其他甾體其他甾體淡橙色淡橙色不顯色不顯色有機(jī)氟有機(jī)氟F有機(jī)破壞有機(jī)破壞有機(jī)氯有機(jī)氯Cl4.4.有機(jī)鹵素有機(jī)鹵素茜素氟藍(lán)茜素氟藍(lán) 硝酸亞鈰硝酸亞

7、鈰硝酸硝酸硝酸銀硝酸銀AgCl 呈色呈色 雌激素雌激素類藥物類藥物紅色偶紅色偶 氮染料氮染料重氮苯磺酸重氮苯磺酸5. 酚羥基酚羥基含炔基含炔基的甾體的甾體激素激素銀鹽沉淀銀鹽沉淀硝酸銀硝酸銀6. 乙炔基的沉淀反響乙炔基的沉淀反響RCCHAgNO3RCCAg (三三)制備衍生物測(cè)定制備衍生物測(cè)定m.p.鹽酸氨基脲鹽酸氨基脲苯丙酸諾龍苯丙酸諾龍縮氨基脲衍生物縮氨基脲衍生物1. 縮氨基脲的生成縮氨基脲的生成m.p.約約180分解分解2. 酯的水解酯的水解丙酸睪酮丙酸睪酮堿性條件堿性條件睪酮睪酮m.p.為為150 156-3-3-酮、苯環(huán)、其他共軛構(gòu)造酮、苯環(huán)、其他共軛構(gòu)造四四UVUV法法1. 構(gòu)造根

8、據(jù)構(gòu)造根據(jù)240nm240nm左右左右280nm左右左右2. 例如例如 構(gòu)造特征：酚羥基、構(gòu)造特征：酚羥基、C17 C17 OHOH C17 C17 乙炔基乙炔基炔雌醇炔雌醇OHCCHHO五五IRIR法法1505cm-1OH 3505cm-13300cm-1CH CC 1590cm-13610cm-1OH 酚羥基酚羥基醇羥基醇羥基1615cm-1苯環(huán)的骨苯環(huán)的骨架振動(dòng)架振動(dòng)黃體酮黃體酮COHHHCH3O構(gòu)造特征：構(gòu)造特征：-3-3-酮、酮、C17-C17-酮基酮基1700cm-1 C=O20位酮基位酮基1665cm-13位酮基位酮基1615cm-1870cm-1 C-H雙鍵雙鍵七七TLCTLC

9、法法 主要用于甾體激素類藥物主要用于甾體激素類藥物制劑的鑒別制劑的鑒別 方法：對(duì)照品法方法：對(duì)照品法 要求供試品溶液所顯主斑要求供試品溶液所顯主斑點(diǎn)的顏色和位置與對(duì)照品溶液點(diǎn)的顏色和位置與對(duì)照品溶液的主斑點(diǎn)一樣。的主斑點(diǎn)一樣。八八 HPLC法法 主要用于甾體激素類藥物主要用于甾體激素類藥物制劑的鑒別如：醋酸曲安奈制劑的鑒別如：醋酸曲安奈德軟膏、醋酸氟輕松軟膏德軟膏、醋酸氟輕松軟膏 方法：對(duì)照品法方法：對(duì)照品法 要求在含量測(cè)定項(xiàng)下記錄要求在含量測(cè)定項(xiàng)下記錄的色譜圖中，供試品峰的的色譜圖中，供試品峰的tR與與對(duì)照品峰的對(duì)照品峰的tR一致。一致。三、三、 特殊雜質(zhì)檢查特殊雜質(zhì)檢查一其他甾體的檢查一其

10、他甾體的檢查檢查方法具有一定分別才干檢查方法具有一定分別才干 TLCTLC法高低濃度對(duì)比法法高低濃度對(duì)比法 HPLCHPLC法類似高低濃度對(duì)比法法類似高低濃度對(duì)比法1 1TLCTLC法高低濃度對(duì)比法法高低濃度對(duì)比法 斷定方法：斷定方法： 規(guī)定雜質(zhì)斑點(diǎn)數(shù)目規(guī)定雜質(zhì)斑點(diǎn)數(shù)目 規(guī)定雜質(zhì)斑點(diǎn)顏色規(guī)定雜質(zhì)斑點(diǎn)顏色例：氫化可的松中其他甾體的檢查例：氫化可的松中其他甾體的檢查供試液：本品供試液：本品+ +氯仿氯仿- -甲醇甲醇9 9：1 1 濃度：濃度：3.0mg/ml3.0mg/ml對(duì)照液：供試液對(duì)照液：供試液3.0mg/ml3.0mg/ml+ +氯仿氯仿- -甲醇甲醇9 9：1 1 60g/ml 60g

11、/ml 層析：供試液層析：供試液 點(diǎn)樣、展開、斑點(diǎn)檢出。點(diǎn)樣、展開、斑點(diǎn)檢出。 對(duì)照液對(duì)照液判別：供試液如顯雜質(zhì)斑點(diǎn)，不得多于判別：供試液如顯雜質(zhì)斑點(diǎn)，不得多于3 3個(gè)，其顏個(gè)，其顏 色與對(duì)照液的主斑點(diǎn)比較，不得更深。色與對(duì)照液的主斑點(diǎn)比較，不得更深。2 2HPLCHPLC法主成分本身對(duì)照法法主成分本身對(duì)照法 斷定方法：斷定方法： 規(guī)定雜質(zhì)峰數(shù)目規(guī)定雜質(zhì)峰數(shù)目規(guī)定雜質(zhì)峰面積規(guī)定雜質(zhì)峰面積硒的檢查硒的檢查二二來源來源 合成中用二氧化硒合成中用二氧化硒(SeO2)(SeO2)脫氫脫氫有毒有毒方法方法藥物藥物氧瓶熄滅氧瓶熄滅二氨基萘比色法測(cè)定二氨基萘比色法測(cè)定三有機(jī)溶劑殘留量的檢查三有機(jī)溶劑殘留量的

12、檢查靈敏度法靈敏度法甲醇甲醇 不得出峰不得出峰 檢測(cè)限檢測(cè)限= 3.1ng= 3.1ng丙酮丙酮 5.0%5.0% 內(nèi)標(biāo)法內(nèi)標(biāo)法 + + 校正因子校正因子以地塞米松磷酸鈉為例以地塞米松磷酸鈉為例 GCGC法法地塞米松磷酸鈉地塞米松磷酸鈉檢查檢查 甲醇和丙酮甲醇和丙酮 精細(xì)稱取本品精細(xì)稱取本品0.16g，置，置10ml量瓶量瓶中，精細(xì)加內(nèi)標(biāo)溶液中，精細(xì)加內(nèi)標(biāo)溶液2ml，加水稀釋至，加水稀釋至刻度，作為供試液；另精細(xì)量取甲醇刻度，作為供試液；另精細(xì)量取甲醇10l(7.9mg)與丙酮與丙酮100l(79mg)置置100ml量瓶中，精細(xì)加內(nèi)標(biāo)溶液量瓶中，精細(xì)加內(nèi)標(biāo)溶液20ml，加水至刻度，作為對(duì)照液。

13、照氣相色譜加水至刻度，作為對(duì)照液。照氣相色譜法測(cè)定，含丙酮不得過法測(cè)定，含丙酮不得過5.0%，并不得，并不得出現(xiàn)甲醇峰。出現(xiàn)甲醇峰。二游離磷酸鹽的檢查二游離磷酸鹽的檢查地塞米松磷酸鈉地塞米松磷酸鈉對(duì)照品比色法對(duì)照品比色法 POKHPOH%.%.L %. 一一HPLC法法USPUSP、BPBP、JPJP均采用均采用RPRPHPLCHPLC大多內(nèi)標(biāo)法大多內(nèi)標(biāo)法甾體激素類藥物常含有構(gòu)造類似的其甾體激素類藥物常含有構(gòu)造類似的其他甾體雜質(zhì)，對(duì)利用構(gòu)造特征設(shè)計(jì)的比他甾體雜質(zhì)，對(duì)利用構(gòu)造特征設(shè)計(jì)的比色法有干擾色法有干擾四、含量測(cè)定四、含量測(cè)定二二UV法法-3-酮酮 240nm腎上腺皮質(zhì)激素腎上腺皮質(zhì)激素雄性

14、激素和蛋白同化激素雄性激素和蛋白同化激素孕激素、口服避孕藥孕激素、口服避孕藥 苯環(huán)苯環(huán) 280nm雌激素雌激素腎上腺皮質(zhì)激素、腎上腺皮質(zhì)激素、 雄性激素和蛋白同雄性激素和蛋白同化激素、孕激素化激素、孕激素C3酮基酮基1 原理原理異煙腙黃異煙腙黃酮基酮基異煙肼異煙肼 CHCl縮合縮合1. 異煙肼比色法異煙肼比色法三比色法三比色法CONHNOHN異煙腙黃色異煙腙黃色2 2方法方法對(duì)照品法對(duì)照品法異煙肼異煙肼?lián)]去乙醇揮去乙醇對(duì)照液對(duì)照液供試液供試液A CHCl暗暗453 3討論討論反響速度反響專屬性反響速度反響專屬性A.C3= O C3= O C17= O C17= O 、 C20= OC20= O

15、 C11= O C11= O 不反響不反響反響專屬性反響專屬性 C3C3酮基酮基B. 溶劑的選擇溶劑的選擇異煙肼鹽酸鹽異煙肼鹽酸鹽甲醇、乙醇甲醇、乙醇無水甲醇無水甲醇無水乙醇無水乙醇C.C.水分、溫度、水分、溫度、O2O2與光線的影響與光線的影響 含水量含水量腙水解腙水解A%不揮發(fā)溶劑、不吸收水分時(shí)不揮發(fā)溶劑、不吸收水分時(shí) O2 O2與光線無影響與光線無影響t D. 酸的種類和濃度及異煙肼的濃度酸的種類和濃度及異煙肼的濃度酸酸: :異煙肼異煙肼 = 2:1= 2:1最大最大A A 腎上腺皮質(zhì)激素類腎上腺皮質(zhì)激素類C17 -C17 -醇酮基醇酮基強(qiáng)復(fù)原性強(qiáng)復(fù)原性1 1原理原理2. 四氮唑比色法四

16、氮唑比色法有色甲瓚有色甲瓚四氮唑鹽四氮唑鹽醇酮基醇酮基 a a 77COH - 復(fù)原復(fù)原 CNNNNH三苯甲瓚三苯甲瓚深紅深紅CNNNN+Cl-氯化三苯四氮唑氯化三苯四氮唑TTC紅四氮唑紅四氮唑RTnmmax490480 e2 HCl-+CNNNNOCH3+-ClCNNNNOCH3藍(lán)四氮唑藍(lán)四氮唑BT2方法方法對(duì)照品法對(duì)照品法氫氧化四甲基銨氫氧化四甲基銨對(duì)照液對(duì)照液供試液供試液ATTC4045暗暗3 3討論討論A. 基團(tuán)對(duì)反響速度的影響基團(tuán)對(duì)反響速度的影響C11= O C11OHC21OH C21-酯酯B. 溶劑、水分的影響溶劑、水分的影響以無醛乙醇為溶劑以無醛乙醇為溶劑C. O2C. O2與光線的影響與光線的影響避光避光隔絕空氣、快速、充隔絕空氣、快速、充N2N2D. D. 堿的種類及參與順序堿的種類及參與順序以氫氧化四甲基銨的結(jié)果最正確以氫氧化四甲基銨的結(jié)果最正確參與順序：參與順序：堿試液堿試液四氮唑鹽四氮唑鹽皮質(zhì)激素溶液皮質(zhì)激素溶液E. E. 溫度與時(shí)間溫度與時(shí)間1 1原理原理max=465max=515雌激素雌激素3. Kober反