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文檔簡介

1、肝臟谷丙轉氨酶活力測定肝臟谷丙轉氨酶活力測定 一、實驗目的一、實驗目的掌握谷丙轉氨酶的測定方法。掌握谷丙轉氨酶的測定方法。二、實驗原理二、實驗原理谷丙轉氨酶作用于丙氨酸及谷丙轉氨酶作用于丙氨酸及-酮戊二酸，生成谷氨酸與丙酮戊二酸，生成谷氨酸與丙酮酸。丙酮酸與酮酸。丙酮酸與2.4-2.4-二硝基苯肼作用，生成二硝基苯腙，此二硝基苯肼作用，生成二硝基苯腙，此物在堿性溶液呈紅棕色，與經(jīng)同樣處理的標準丙酮酸比色，物在堿性溶液呈紅棕色，與經(jīng)同樣處理的標準丙酮酸比色，求得丙酮酸的生成量以表示酶的活性。求得丙酮酸的生成量以表示酶的活性。丙酮酸二硝基苯腙紅棕色2,4-二硝基苯肼三、實驗器材三、實驗器材1. 剪

2、刀 或 組織搗碎機 2. 37水浴3. 分光光度計（520nm）4.比色皿5.計算紙（9 cm9 cm）四四. . 實驗試劑實驗試劑 1.標準丙酮酸 現(xiàn)配現(xiàn)配 2.谷丙轉氨酶底物 4，1周 3.0.1M pH7.4 PB 4.0.02% 2,4-二硝基苯肼溶液 5.0.4M NaOH 6.新鮮肝臟（購買或取活的小白鼠肝臟） 五、實驗步驟五、實驗步驟 1.1.肝勻漿肝勻漿處理：20g 肝先用生理鹽水洗凈，濾紙吸干水，再用預冷的0.1M pH7.4 PB搗碎，并定容至200ml，供全班用2. 2. 谷丙轉氨酶活力的測定谷丙轉氨酶活力的測定1）取4支試管，標注名稱，按照下表操作2）計算酶活力 本法規(guī)定：酶在37 與底物作用30分鐘，產生2.5g 丙酮酸為一個谷丙轉氨酶活性單位。3.3.計算計算1）每ml肝勻漿谷丙轉氨酶活力單位（U/ml） D = （AB） 500 S 2.52）每g 肝臟谷丙轉氨酶活力單位（U/g） D D = D 200 / 20說明：說明：A：樣品A 520nm B：對照A 520nm S：標準A 520nm 500：標準丙酮酸濃度 2.5：谷丙轉氨酶換算單位 200200：200ml200ml肝勻漿肝勻漿 2020：20g20g肝肝 五、實驗步驟五、實驗步驟六六. . 附注附注2.4-二硝基苯肼與丙酮酸的顏色反并不是特異性的，-酮戌二酸

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