藥物的含量測定方法與驗證

1、1第四章第四章 藥物的含量測定方法與驗證藥物的含量測定方法與驗證藥物分析教研室藥物分析教研室2內容提要內容提要第一節(jié)第一節(jié) 定量分析方法的分類與特點定量分析方法的分類與特點第二節(jié)第二節(jié) 樣品分析的前處理方法樣品分析的前處理方法第三節(jié)第三節(jié) 藥品質量標準分析方法驗證藥品質量標準分析方法驗證3第一節(jié)第一節(jié) 定量分析方法的分類與特點定量分析方法的分類與特點含量測定常用的方法含量測定常用的方法 容量分析法容量分析法( (滴定法滴定法) ) 光譜分析法光譜分析法 色譜分析法色譜分析法 4一、容量分析法（滴定法）一、容量分析法（滴定法）方法：方法：特點：特點：l 方法簡便易行：價廉、簡便、快速；方法簡便易

2、行：價廉、簡便、快速；l 方法耐用性高方法耐用性高l 準確度高準確度高（RSD0.2%）：適用于對準確度要）：適用于對準確度要求較高的試樣分析。求較高的試樣分析。l 專屬性差專屬性差適用范圍：適用范圍：化學原料藥物的含量測定?；瘜W原料藥物的含量測定。第一節(jié)第一節(jié) 定量分析方法的分類與特點定量分析方法的分類與特點5一、容量分析法一、容量分析法有關計算有關計算滴定度滴定度T （mg/ml）：每：每1 ml規(guī)定濃度的滴定液規(guī)定濃度的滴定液所相當?shù)谋粶y藥物的質量。所相當?shù)谋粶y藥物的質量。 被測物被測物 WA=TVB第一節(jié)第一節(jié) 定量分析方法的分類與特點定量分析方法的分類與特點61、滴定度的計算、滴定度

3、的計算滴定反應：滴定反應：aA (被測藥物被測藥物)+bB(滴定劑滴定劑)cC+dD MbamTm:滴定劑摩爾濃度；滴定劑摩爾濃度；M被測物摩爾質量；被測物摩爾質量；a/b:反應反應摩爾比摩爾比第一節(jié)第一節(jié) 定量分析方法的分類與特點定量分析方法的分類與特點72. 含量測定含量測定 直接滴定法直接滴定法 生成物滴定法生成物滴定法 剩余量滴定法剩余量滴定法 (1)(2)(3)第一節(jié)第一節(jié) 定量分析方法的分類與特點定量分析方法的分類與特點8(1) 直接滴定法% 100(%) WTV含量規(guī)定摩爾濃度實際摩爾濃度F%100%100100%(%) WFTVWTVWTV含量注意掌握滴定反應的原理注意掌握滴定

4、反應的原理, , 藥物與滴定劑在反應藥物與滴定劑在反應中的摩爾比中的摩爾比，正確計算滴定度和百分含量，正確計算滴定度和百分含量 濃度校正因子濃度校正因子9例：阿司匹林的含量測定例：阿司匹林的含量測定 精密稱取本品精密稱取本品0.4018g，加中性乙醇，加中性乙醇20ml溶解后，溶解后，加加3滴酚酞指示劑，用滴酚酞指示劑，用NaOH滴定液（滴定液（0.1002mol/L）滴定，消耗體積為滴定，消耗體積為22.20ml，求阿司匹林的含量？，求阿司匹林的含量？（ch.p每每1ml 0.1mol/L 的的NaOH滴定液相當于滴定液相當于18.02mg的阿司匹林）的阿司匹林）(1) 直接滴定法10解：精

5、密稱取供試品解：精密稱取供試品Ws=0.4018gNaOH實際濃度實際濃度0.1002mol/L，則，則F=0.1002/0.1=1.002消耗的消耗的NaOH滴定液體積：滴定液體積：V樣樣=22.20ml阿司匹林含量阿司匹林含量=100%SVF TW樣322.20 1.002 18.20 10100%0.401899.8%(1) 直接滴定法11(2) 生成物滴定法生成物滴定法%100%100100%(%) WFTVWTVWTV含量注意藥物與生成物注意藥物與生成物B，生成物，生成物B與滴定劑之與滴定劑之間的化學計量關系，正確計算滴定度。間的化學計量關系，正確計算滴定度。藥物與藥物與A作用生成作

6、用生成B, 用滴定液滴定用滴定液滴定B百分含量計算方法與直接滴定法相同百分含量計算方法與直接滴定法相同 12（3）回滴定（剩余滴定）法）回滴定（剩余滴定）法o（a）不做空白試驗時百分含量計算）不做空白試驗時百分含量計算%100)V%AAWTFVFBBA（含量VA 定量加入滴定液定量加入滴定液A的體積的體積(ml)VB 滴定液滴定液B在回滴中消耗的體積在回滴中消耗的體積(ml)FA 滴定液滴定液A的濃度校正因數(shù)的濃度校正因數(shù)FB 滴定液滴定液B的濃度校正因數(shù)的濃度校正因數(shù)TA 滴定液滴定液A的滴定度的滴定度W 供試品稱取量供試品稱取量13（3）回滴定（剩余滴定）法）回滴定（剩余滴定）法o （b）

7、做空白試驗時百分含量計算）做空白試驗時百分含量計算 %100)V%0BWFTVSB（含量VB0 空白實驗消耗滴定液空白實驗消耗滴定液B的體積的體積VBS 樣品實驗消耗滴定液樣品實驗消耗滴定液B的體積的體積FB 滴定液滴定液B的濃度校正因數(shù)的濃度校正因數(shù)TA 滴定液滴定液A的滴定度的滴定度W 供試品稱取量供試品稱取量14 司可巴比妥鈉含量測定司可巴比妥鈉含量測定: 本品約本品約0.1g, 加水加水10ml溶溶解解, 精密加溴滴定液精密加溴滴定液(0.05mol/L)25ml, 再加鹽酸再加鹽酸5ml, 放置放置15分鐘分鐘, 加碘化鉀試液加碘化鉀試液10ml, 用硫代硫酸鈉滴定用硫代硫酸鈉滴定液

8、液(0.1mol/L)滴定滴定, 滴定的結果用空白試驗校正滴定的結果用空白試驗校正 W=0.1022g; 硫代硫酸鈉滴定液硫代硫酸鈉滴定液 F=1.038; 供試品消耗硫代硫酸鈉滴定液供試品消耗硫代硫酸鈉滴定液15.73ml;空白空白23.21ml 15滴定度滴定度(mg/ml) 01.1327.260111 . 0MbamT司可巴比妥鈉司可巴比妥鈉M=260.27, 與溴摩爾比為與溴摩爾比為1:1 %8 .98%10010001022. 001.13038. 1)73.1521.23( %100)(%) 2322322BrOSNaOSNaS0WTFVV司可巴比妥含量16（一）紫外（一）紫外-

9、可見分光光度法可見分光光度法（二）熒光分析法（二）熒光分析法（三）紅外分光光度法（三）紅外分光光度法（四）原子吸收分光光度法（四）原子吸收分光光度法（五）火焰光度法（五）火焰光度法二、光譜分析法二、光譜分析法17（一）紫外（一）紫外可見分光光度法可見分光光度法 根據(jù)物質對波長為根據(jù)物質對波長為200200760 nm760 nm這一這一范圍的光吸收特性建立起來的一種定性、范圍的光吸收特性建立起來的一種定性、定量和結構分析的方法。定量和結構分析的方法。 二、光譜分析法二、光譜分析法181. 1. 基本原理基本原理ECLIITA0lglgLambert -BeerLambert -Beer定律定律

10、百分吸光系數(shù)百分吸光系數(shù)( )：當溶液濃度：當溶液濃度c為為1%(g/ml)、液層厚度液層厚度(l)為為1cm時的吸光度時的吸光度(A)。%11cmE物質對光的選擇性吸收波長及相應的吸收系數(shù)是物質對光的選擇性吸收波長及相應的吸收系數(shù)是該物質的物理常數(shù)。該物質的物理常數(shù)。二、光譜分析法二、光譜分析法192.2.特點與適用范圍特點與適用范圍特點：特點：l簡便易行：儀器價格低廉、操作簡便、易于普及簡便易行：儀器價格低廉、操作簡便、易于普及l(fā)靈敏度高，靈敏度高，1010-4-4 1010-7-7g/mlg/mll準確度高準確度高,RSD=2-5%,RSD=2-5%l專屬性較差專屬性較差適用范圍：適用范

11、圍：多用于藥物制劑的定量檢查，如片劑的多用于藥物制劑的定量檢查，如片劑的溶出度或含量均勻度檢查。溶出度或含量均勻度檢查。二、光譜分析法二、光譜分析法20（1 1）波長準確度校正）波長準確度校正標準汞燈中的較強譜線標準汞燈中的較強譜線237.83237.83、253.65253.65、275.28275.28、296.73296.73、313.16313.16、334.15nm334.15nm等等氘燈中氘燈中:486.03nm,656.10nm:486.03nm,656.10nm3. 3. 儀器的校正和檢定儀器的校正和檢定二、光譜分析法二、光譜分析法21（2 2）吸光度的準確度校正）吸光度的準確

12、度校正60mg60mg重鉻酸鉀用重鉻酸鉀用0.005mol/L0.005mol/L的硫酸溶液稀釋至的硫酸溶液稀釋至1000ml1000ml，在規(guī)定波長處測定并計算吸收系數(shù)，與，在規(guī)定波長處測定并計算吸收系數(shù)，與規(guī)定值比較。規(guī)定值比較。規(guī)定值：規(guī)定值：235nm 123.0235nm 123.0126.0126.0 257nm 142.8 257nm 142.8146.2146.2 313nm 47.0 313nm 47.050.350.3 350nm 105.5 350nm 105.5108.5108.5二、光譜分析法二、光譜分析法22（3）雜散光檢查）雜散光檢查規(guī)定試劑、濃度及在規(guī)定的波長處

13、測定相應透光率。規(guī)定試劑、濃度及在規(guī)定的波長處測定相應透光率。 碘化鈉碘化鈉1.00（1g/ml）220nm 0.8%（透光率）（透光率） 亞硝酸鈉亞硝酸鈉5.00（1g/ml）340nm 0.8（透光率）（透光率）（4）吸收池校正）吸收池校正 兩吸收池測定的差值小于兩吸收池測定的差值小于1%二、光譜分析法二、光譜分析法234、測定條件、測定條件（1）對溶劑的要求：注意溶劑的截止波長。）對溶劑的要求：注意溶劑的截止波長。 （2）測定波長的確證）測定波長的確證（3）供試品溶液濃度）供試品溶液濃度應使測得的吸光度在應使測得的吸光度在0.30.7之間之間二、光譜分析法二、光譜分析法24 5 5、含量

14、測定、含量測定(1) 對照品比較法對照品比較法RRXXACACCx：供試品溶液的濃度：供試品溶液的濃度Ax：供試品溶液的吸光度：供試品溶液的吸光度CR：對照品溶液的濃度：對照品溶液的濃度AR：對照品溶液的吸光度：對照品溶液的吸光度A. 待測物與對照品在相同條件下測定待測物與對照品在相同條件下測定(儀器、溶劑、波長儀器、溶劑、波長)B. 供試品溶液與對照品溶液濃度相近供試品溶液與對照品溶液濃度相近二、光譜分析法二、光譜分析法255 5、含量測定、含量測定(1) 對照品比較法對照品比較法%100(%)WDCx含量原料藥原料藥百分含量的計算公式：百分含量的計算公式：D：稀釋體積：稀釋體積W：供試品取

15、樣量：供試品取樣量二、光譜分析法二、光譜分析法26 5 5、含量測定、含量測定(1) 對照品比較法對照品比較法制劑制劑含量測定結果的計算公式：含量測定結果的計算公式：D：稀釋體積：稀釋體積W：供試品取樣量：供試品取樣量%100%/100%/gggg每單位實測含量標示量標示量測得量（ ）平均片重（片）供試品重（ ）標示量（片）27 5 5、含量測定、含量測定(1) 對照品比較法對照品比較法制劑含量測定結果的計算公式：制劑含量測定結果的計算公式：W(V)：平均片重：平均片重(裝量裝量)W：供試品取樣量：供試品取樣量B：制劑的標示量：制劑的標示量%100%XCD VVB標示量%100%XCD WWB

16、標示量固體制劑固體制劑液體制劑液體制劑）（VW28 5 5、含量測定、含量測定(2) 吸光系數(shù)法吸光系數(shù)法100)/(%11cmXXEAmlgCCx：供試品溶液的濃度：供試品溶液的濃度Ax：供試品溶液的吸光度：供試品溶液的吸光度 ：對照品溶液的濃度：對照品溶液的濃度A. 用本法測定時，吸光系數(shù)通常應大用本法測定時，吸光系數(shù)通常應大于于100；B. 注意儀器的校正與檢定注意儀器的校正與檢定%11cmE29 5 5、含量測定、含量測定(2) 吸光系數(shù)法吸光系數(shù)法1%1100%100%cmADELW含量原料藥百分含量的計算公式：原料藥百分含量的計算公式：30精密稱取貝諾酯精密稱取貝諾酯0.1500g

17、0.1500g，置于，置于100ml100ml的量筒中，加的量筒中，加無水乙醇適量，振搖微熱溶解后放冷，加無水乙醇無水乙醇適量，振搖微熱溶解后放冷，加無水乙醇稀釋至刻度搖勻，過濾，精密量取稀釋至刻度搖勻，過濾，精密量取5ml5ml至至1000ml1000ml量量筒中加水至刻度，用紫外分光光度法在筒中加水至刻度，用紫外分光光度法在240nm240nm波長波長處測定吸收度為處測定吸收度為0.55850.5585，已知本品，已知本品240nm240nm處標準給處標準給定吸收系數(shù)定吸收系數(shù) 為為745745。求貝諾酯百分含量。求貝諾酯百分含量LCEALCEARcmRXcmX%11%11311%10.5

18、585100 1000100745 1005(%)100%100%99.95%0.1500cmADEW含量32 鹽酸氯丙嗪片劑的含量測定：取本品鹽酸氯丙嗪片劑的含量測定：取本品20片，精片，精密稱定為密稱定為8.100g，研細，精密稱取，研細，精密稱取0.4800g片粉，置片粉，置于于500ml量瓶中，加酸及水溶解并稀釋至刻度，取上量瓶中，加酸及水溶解并稀釋至刻度，取上清液清液5.00ml，置，置100ml量瓶中，加水至刻度，在量瓶中，加水至刻度，在254nm測得吸收度為測得吸收度為0.540，另取鹽酸氯丙嗪對照品，另取鹽酸氯丙嗪對照品，配成配成6.0g/ml的對照品溶液，同法在的對照品溶液，

19、同法在254nm處測的吸處測的吸收度為收度為0.564，標示量為，標示量為50mg/片，計算標示量百分數(shù)？片，計算標示量百分數(shù)？330.4800Wg8.1000.405020gWg500100100005.00mlD0.5406.05.7450.564XXRRAggCCmlmlA65.745 10000 0.4050 10(%)96.9%0.4800 0.0500CD WWB標示量B=50 mg/片=0.050g/片34 維生素維生素B1注射液含量的測定：精密量取本品（規(guī)注射液含量的測定：精密量取本品（規(guī)格格2ml：50mg）2ml，置，置200ml量瓶中，加水稀釋至刻量瓶中，加水稀釋至刻度，

20、搖勻，精密量取度，搖勻，精密量取5ml，置，置100ml量瓶中，加鹽酸量瓶中，加鹽酸溶液（溶液（91000）稀釋至刻度，照紫外）稀釋至刻度，照紫外-可見分光光度可見分光光度法（附錄法（附錄 A），在），在246nm的波長處測得吸光度為的波長處測得吸光度為0.521，按維生素，按維生素B1 的吸收系數(shù)（的吸收系數(shù)（ ）為）為421，計算本，計算本品相當于標示量的百分含量品相當于標示量的百分含量1%1cmE351%1100100%0.521200 1002 1000421 1 1005100%99.0%50 2cmXAD VELCD VVBVB 示量% = 標36（二）熒光分析法（二）熒光分析法

21、利用物質的熒光特性進行定性與定量測定的方法利用物質的熒光特性進行定性與定量測定的方法稱為熒光分析法。稱為熒光分析法。熒光發(fā)射光譜（熒光光譜）熒光發(fā)射光譜（熒光光譜）熒光激發(fā)光譜（熒光激發(fā)光譜（激發(fā)光譜激發(fā)光譜）371.1.特點與適用范圍特點與適用范圍特點：特點：l高靈敏度：高靈敏度：10-12 10-10g/ml，較，較UV-Vis高高l熒光自熄滅：溶液中熒光物質濃度太大時，會有熒光自熄滅：溶液中熒光物質濃度太大時，會有“自熄滅自熄滅”作用，因此熒光分析法應在低濃度溶液作用，因此熒光分析法應在低濃度溶液中進行中進行l(wèi)易受干擾：干擾因素多，必須做空白試驗易受干擾：干擾因素多，必須做空白試驗適用范

22、圍：適用范圍：（二）熒光分析法（二）熒光分析法 382.干擾及排除干擾及排除(1)溶劑溶劑空白試驗空白試驗(2)溶液溶液： l藥物濃度不宜過高，藥物濃度不宜過高，l懸浮物懸浮物過濾，過濾，l溶氧溶氧通惰性氣體除去通惰性氣體除去l溶液溶液pH。(3)玻璃儀器及測定池玻璃儀器及測定池高度潔凈高度潔凈 (4) 溫度：控制測定溫度溫度：控制測定溫度（二）熒光分析法（二）熒光分析法 393.測定方法與含量計算測定方法與含量計算 在一定實驗條件時，在在一定實驗條件時，在較稀濃度范較稀濃度范圍圍內藥物的熒內藥物的熒光強度與溶液中該物質的濃度成正比。光強度與溶液中該物質的濃度成正比。 對照品比較對照品比較法法

23、 rbrXbXrXrXrbrXbXRRRRCCCCRRRR（二）熒光分析法（二）熒光分析法 40 利用物質在流動相與固定相兩相中分配系數(shù)差異利用物質在流動相與固定相兩相中分配系數(shù)差異而得以分離，并在檢測中能檢出其信號，從而達到而得以分離，并在檢測中能檢出其信號，從而達到分分離、分析離、分析的一類分析方法。的一類分析方法。色譜分析法是分析混合物的最有力手段。色譜分析法是分析混合物的最有力手段。三三 色譜分析法色譜分析法411.1.特點與適用范圍特點與適用范圍特點：特點：l高靈敏度：高靈敏度：10-15 10-12g/ml，l高專屬性：高專屬性：l高效能與高速度：高效能與高速度：適用范圍：適用范圍

24、：廣泛應用于藥物制劑的含量測定，尤其廣泛應用于藥物制劑的含量測定，尤其是復方制劑含量測定的首選方法。是復方制劑含量測定的首選方法。三三 色譜分析法色譜分析法422.2.分類分類依據(jù)分離原理：依據(jù)分離原理：l吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜與分子排阻吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜與分子排阻色色譜等。譜等。依據(jù)分離方式：依據(jù)分離方式：lHPLC、GC、TLC等等三三 色譜分析法色譜分析法43Ch.P各品種項下的色譜條件各品種項下的色譜條件固定條件固定條件固定相種類固定相種類流動相組成流動相組成檢測器類型檢測器類型可變條件可變條件色譜柱內徑、長度色譜柱內徑、長度流動相各組成的比例、流速流動相各組成

25、的比例、流速檢測器的靈敏度檢測器的靈敏度柱溫、進樣量柱溫、進樣量系統(tǒng)適用性系統(tǒng)適用性（一）高效液相色譜法（一）高效液相色譜法(附錄附錄)441. 對儀器的一般要求對儀器的一般要求填充劑填充劑常用十八烷基硅烷鍵合硅膠（常用十八烷基硅烷鍵合硅膠（C18）離子交換色譜離子交換色譜離子交換填充劑離子交換填充劑分子排阻色譜分子排阻色譜凝膠或高分子多微球填充劑凝膠或高分子多微球填充劑檢測器：紫外檢測器最常用。檢測器：紫外檢測器最常用。熒光檢測器、蒸發(fā)光散射檢測器、電化學檢測熒光檢測器、蒸發(fā)光散射檢測器、電化學檢測器等。器等。（一）高效液相色譜法（一）高效液相色譜法(附錄附錄)451. 對儀器的一般要求對儀

26、器的一般要求流動相：流動相：反相色譜系統(tǒng)首選甲醇反相色譜系統(tǒng)首選甲醇-水系統(tǒng)；采用紫外末水系統(tǒng)；采用紫外末端波長檢測時，首選乙腈端波長檢測時，首選乙腈-水系統(tǒng)。水系統(tǒng)。（一）高效液相色譜法（一）高效液相色譜法(附錄附錄)462. 系統(tǒng)適用性試驗系統(tǒng)適用性試驗 指用規(guī)定的對照品溶液或系統(tǒng)適用性試驗指用規(guī)定的對照品溶液或系統(tǒng)適用性試驗溶液對色譜系統(tǒng)進行試驗，應符合要求。包括溶液對色譜系統(tǒng)進行試驗，應符合要求。包括理論板數(shù)（理論板數(shù)（n）、分離度（）、分離度（R）、拖尾因子（）、拖尾因子（T）和重復性和重復性等四個指標。等四個指標。（一）高效液相色譜法（一）高效液相色譜法(附錄附錄)472. 系統(tǒng)適

27、用性試驗系統(tǒng)適用性試驗（1）色譜柱的理論板數(shù)）色譜柱的理論板數(shù)(n)：用于評價色譜柱的分離：用于評價色譜柱的分離效能。一般為待測組分或內標物質的理論板數(shù)。效能。一般為待測組分或內標物質的理論板數(shù)。2254. 5hRWtn色譜柱的理論板數(shù)越多，柱效越高。色譜柱的理論板數(shù)越多，柱效越高。（一）高效液相色譜法（一）高效液相色譜法(附錄附錄)482. 系統(tǒng)適用性試驗系統(tǒng)適用性試驗（2）分離度（）分離度（R）：用于評價待測組分與相鄰共存無）：用于評價待測組分與相鄰共存無或難分離物質之間的分離程度，是衡量色譜系統(tǒng)效能或難分離物質之間的分離程度，是衡量色譜系統(tǒng)效能的關鍵指標。的關鍵指標。21WW2R12RR

28、tt除另有規(guī)定外，待測組分與相鄰共存物之間的分離除另有規(guī)定外，待測組分與相鄰共存物之間的分離度應大于度應大于1.5。（一）高效液相色譜法（一）高效液相色譜法(附錄附錄)492. 系統(tǒng)適用性試驗系統(tǒng)適用性試驗l采用外標法時，取對照溶液，連續(xù)進樣采用外標法時，取對照溶液，連續(xù)進樣5次，峰面積次，峰面積RSD應應2.0%；l采用內標法時，配制相當于采用內標法時，配制相當于80%、100%、120%的對的對照液，加入規(guī)定的內標，分別進樣照液，加入規(guī)定的內標，分別進樣3次，計算平均校正次，計算平均校正因子，因子，RSD亦應亦應2.0%。 （3）重復性：用于評價連續(xù)進樣中，色譜系統(tǒng)響應值）重復性：用于評價

29、連續(xù)進樣中，色譜系統(tǒng)響應值的重復性能。的重復性能。（一）高效液相色譜法（一）高效液相色譜法(附錄附錄)502. 系統(tǒng)適用性試驗系統(tǒng)適用性試驗（4）拖尾因子）拖尾因子(T)：用于評價色譜峰的對稱性。：用于評價色譜峰的對稱性。105. 02dWTh除另有規(guī)定外，用峰高定量時除另有規(guī)定外，用峰高定量時T應在應在0.95 1.05之間。之間。（一）高效液相色譜法（一）高效液相色譜法(附錄附錄)51 （1）內標法）內標法對照品對照品+內標物內標物對照溶液，進樣，測定，計算校正因子對照溶液，進樣，測定，計算校正因子 3. 測定法測定法RRssCACAf ）校正因子（ 供試品供試品+內標內標供試品溶液，進樣

30、，測定供試品和內供試品溶液，進樣，測定供試品和內標物質的峰面積或峰高，計算含量標物質的峰面積或峰高，計算含量 sSXXCAAfC）含量（%100%XCDW含量（一）高效液相色譜法（一）高效液相色譜法(附錄附錄)52 （2）外標法）外標法供試品供試品供試品溶液供試品溶液對照品對照品對照品溶液對照品溶液進樣，測定，計算含量進樣，測定，計算含量 RXRXAACC）含量（ 缺點：不易精確控制缺點：不易精確控制進樣量，宜用定量環(huán)或進樣量，宜用定量環(huán)或自動進樣自動進樣（一）高效液相色譜法（一）高效液相色譜法(附錄附錄)53 HPLCHPLC主要用于抗生素、生化藥品及含雜質干擾測主要用于抗生素、生化藥品及含

31、雜質干擾測定的化學藥品。廣泛用于藥物制劑及多組分的含量測定的化學藥品。廣泛用于藥物制劑及多組分的含量測定。定。 在藥典中收載率呈大幅度上升趨勢。在藥典中收載率呈大幅度上升趨勢。 （一）高效液相色譜法（一）高效液相色譜法(附錄附錄)54（二）氣相色譜法（二）氣相色譜法 GC 用于本身具揮發(fā)性，或加熱氣化的供試品的測用于本身具揮發(fā)性，或加熱氣化的供試品的測定。如維生素定。如維生素E 1. 對對GC儀器一般要求儀器一般要求 l載氣為氮氣；載氣為氮氣；l色譜柱為填充或毛細管柱色譜柱為填充或毛細管柱l固定液：甲基聚硅氧烷、聚乙二醇固定液：甲基聚硅氧烷、聚乙二醇l檢測器：氫火焰離子化檢測器檢測器：氫火焰離

32、子化檢測器 l進樣方式：溶液直接進樣或頂空進樣。進樣方式：溶液直接進樣或頂空進樣。 552. 系統(tǒng)適用性試驗系統(tǒng)適用性試驗除另有規(guī)定外，應照除另有規(guī)定外，應照HPLC項下的規(guī)定。項下的規(guī)定。3. 測定方法測定方法l手動進樣手動進樣內標法定量內標法定量l自動進樣自動進樣外標法定量外標法定量l標準加入法標準加入法可消除基質效應的影響可消除基質效應的影響（二）氣相色譜法（二）氣相色譜法56小結小結o 化學原料藥的含量測定化學原料藥的含量測定容量分析法；容量分析法；o 制劑的含量測定制劑的含量測定色譜分析法；色譜分析法；o 制劑的定量檢查制劑的定量檢查(溶出度、含量均勻度的檢溶出度、含量均勻度的檢查查

33、)光譜分析法；光譜分析法；57第二節(jié)第二節(jié) 樣品分析的前處理方法樣品分析的前處理方法概述概述分析前要采用一定的方法，分析前要采用一定的方法，使待測藥物或待測元使待測藥物或待測元素轉化為適宜的狀態(tài)后再進行分析測定。素轉化為適宜的狀態(tài)后再進行分析測定。前處理的目的是前處理的目的是消除干擾，保護儀器消除干擾，保護儀器，提高方法，提高方法的準確度、精密度、選擇性和靈敏度。的準確度、精密度、選擇性和靈敏度。樣品前處理是分析檢測的關鍵環(huán)節(jié)樣品前處理是分析檢測的關鍵環(huán)節(jié) 。58前處理對象：前處理對象：1. 含金屬（含金屬（Ca、Fe、Hg、Zn）2. 鹵素（鹵素（F、Cl、Br、I）、）、N、P、S等等 第

34、二節(jié)第二節(jié) 樣品分析的前處理方法樣品分析的前處理方法591.含鹵素有機藥物含鹵素有機藥物1）鹵素與脂肪鏈的碳原子相連，結合不牢固；）鹵素與脂肪鏈的碳原子相連，結合不牢固； CCl3C(CH3)2OH2)鹵素與芳環(huán)相連，結合牢固。鹵素與芳環(huán)相連，結合牢固。 樣品前處理分類樣品前處理分類泛影酸泛影酸第二節(jié)第二節(jié) 樣品分析的前處理方法樣品分析的前處理方法60 2.含金屬的藥物含金屬的藥物1)有機金屬藥物有機金屬藥物：金屬原子直接與碳原子以共價鍵相連，：金屬原子直接與碳原子以共價鍵相連，結合比較牢固，如結合比較牢固，如卡巴胂、醋酸苯汞、汞撒利卡巴胂、醋酸苯汞、汞撒利 樣品前處理分類樣品前處理分類OCH

35、2COONaCONHCH2CHCH2HgOHOCH3NHCONH2AsOOHHOHgOCOCH3第二節(jié)第二節(jié) 樣品分析的前處理方法樣品分析的前處理方法61 2.含金屬的藥物含金屬的藥物2)含金屬的有機藥物：含金屬的有機藥物：金屬原子不與碳原子直接相連，金屬原子不與碳原子直接相連，通常為有機酸及酚的金屬鹽或配位化合物，溶液中通常為有機酸及酚的金屬鹽或配位化合物，溶液中能直接離解出金屬離子。能直接離解出金屬離子。 如如酒石酸銻鉀、葡萄糖酸銻鈉、富馬酸亞鐵酒石酸銻鉀、葡萄糖酸銻鈉、富馬酸亞鐵 樣品前處理分類樣品前處理分類CCHCCOOOFeOCCHOCHOOOCOOSbSbOOCOOOCHOCHC2

36、K+ 3H2O第二節(jié)第二節(jié) 樣品分析的前處理方法樣品分析的前處理方法62 根據(jù)鹵素或金屬在分子中結合牢固程度不根據(jù)鹵素或金屬在分子中結合牢固程度不同處理方法而異。同處理方法而異。不經(jīng)有機破壞不經(jīng)有機破壞結合不牢結合不牢固固經(jīng)有機破壞經(jīng)有機破壞結合牢固結合牢固前處理方法前處理方法 樣品前處理方法樣品前處理方法第二節(jié)第二節(jié) 樣品分析的前處理方法樣品分析的前處理方法63 1.直接測定法；直接測定法； 2.經(jīng)水解后測定法；經(jīng)水解后測定法； 3.經(jīng)氧化還原后測定法。經(jīng)氧化還原后測定法。 不對藥物分子的有機結構部分進行完全破壞不對藥物分子的有機結構部分進行完全破壞通過選用適當溶劑溶解或經(jīng)簡單回流處理，使待

37、通過選用適當溶劑溶解或經(jīng)簡單回流處理，使待測元素電離、離解，轉化為無機離子進行測定，測元素電離、離解，轉化為無機離子進行測定，適用于含金屬有機藥物或結合不牢固的含鹵素藥適用于含金屬有機藥物或結合不牢固的含鹵素藥物的分析。物的分析。一、不經(jīng)有機破壞的分析方法一、不經(jīng)有機破壞的分析方法641.直接測定法直接測定法適用于金屬離子藥物溶解后，可直接進行滴定適用于金屬離子藥物溶解后，可直接進行滴定如：葡萄糖酸鈣的含量測定如：葡萄糖酸鈣的含量測定一、不經(jīng)有機破壞的分析方法一、不經(jīng)有機破壞的分析方法65 2.經(jīng)水解后測定法經(jīng)水解后測定法（1）堿水解后測定法）堿水解后測定法 適用于鹵素原子與脂肪鏈的碳原子相連

38、，結合適用于鹵素原子與脂肪鏈的碳原子相連，結合不牢固的藥物。不牢固的藥物。一、不經(jīng)有機破壞的分析方法一、不經(jīng)有機破壞的分析方法66CCl3C(CH3)2OH 三氯叔丁醇三氯叔丁醇溶于溶于NaOH溶液加熱回流使其水解，將有機結合的溶液加熱回流使其水解，將有機結合的鹵素，經(jīng)水解作用轉變?yōu)闊o機的鹵素離子，然后鹵素，經(jīng)水解作用轉變?yōu)闊o機的鹵素離子，然后選用間接銀量法進行測定。選用間接銀量法進行測定。CCl3C(CH3)2OH+NaOH(CH3)2CO+NaCl+HCOONaNaCl+AgNO3AgCl+NaNO3AgNO3+NH4SCNAgSCN+NH4NO3回流回流一、不經(jīng)有機破壞的分析方法一、不經(jīng)

39、有機破壞的分析方法67 2.經(jīng)水解后測定法經(jīng)水解后測定法（2）酸水解后測定法）酸水解后測定法 將含金屬的有機藥物與適當?shù)乃峁矡?，將不溶將含金屬的有機藥物與適當?shù)乃峁矡幔瑢⒉蝗苄缘慕饘冫}類，水解置換為可溶性鹽，然后用配位性的金屬鹽類，水解置換為可溶性鹽，然后用配位滴定或剩余酸堿滴定法滴定或剩余酸堿滴定法一、不經(jīng)有機破壞的分析方法一、不經(jīng)有機破壞的分析方法68 硬脂酸鎂硬脂酸鎂硬脂酸鎂與定量硫酸共沸，水解生成硬脂酸和硬脂酸鎂與定量硫酸共沸，水解生成硬脂酸和硫酸鎂，剩余的酸以氫氧化鈉滴定硫酸鎂，剩余的酸以氫氧化鈉滴定Mg(C17H35COO)2+H2SO4MgSO4+2C17H35COOHH2SO4

40、+NaOHNa2SO4+H2O回流回流一、不經(jīng)有機破壞的分析方法一、不經(jīng)有機破壞的分析方法693.氧化還原后測定法氧化還原后測定法 鹵素結合于苯環(huán)，結合牢固，在堿性鹵素結合于苯環(huán)，結合牢固，在堿性(或酸性或酸性) 條件下加還原劑鋅粉，加熱回流。形成無機鹵化條件下加還原劑鋅粉，加熱回流。形成無機鹵化物后用測定。物后用測定。如：泛影酸含量測定。如：泛影酸含量測定。一、不經(jīng)有機破壞的分析方法一、不經(jīng)有機破壞的分析方法70+3NaI+2CH3COONa+3Na2ZnO2+3H2ONaOH 回流回流 Zn粉粉 加熱加熱 NaI+AgNO3AgI+NaNO3曙紅為吸附指示劑曙紅為吸附指示劑黃色黃色玫瑰紅色

41、玫瑰紅色例：泛影酸的含量測定例：泛影酸的含量測定銀量法銀量法71含氮、硫、磷有機藥物及有機金屬藥物中待測離子含氮、硫、磷有機藥物及有機金屬藥物中待測離子與碳原子結合牢固，用上述方法難以成為無機的化與碳原子結合牢固，用上述方法難以成為無機的化合物，此時必須采用有機破壞的方法，使之轉變?yōu)楹衔铮藭r必須采用有機破壞的方法，使之轉變?yōu)闊o機化合物，方可進行測定。無機化合物，方可進行測定。 二二 經(jīng)有機破壞的分析方法經(jīng)有機破壞的分析方法（一）濕法破壞法（一）濕法破壞法（二）干法破壞法（二）干法破壞法72（一）濕法破壞法（一）濕法破壞法 主要采用強酸進行有機破壞，將有機結合的待測主要采用強酸進行有機破壞，將

42、有機結合的待測元素轉變?yōu)榭蓽y定無機化合物。本法可用于生物制元素轉變?yōu)榭蓽y定無機化合物。本法可用于生物制品中氮、磷或金屬元素的測定。品中氮、磷或金屬元素的測定。 根據(jù)所用試劑試劑不同，可分為：根據(jù)所用試劑試劑不同，可分為： 1）硝酸）硝酸高氯酸法高氯酸法 2）硫酸）硫酸硫酸鹽法硫酸鹽法 3）硝酸）硝酸硫酸法硫酸法 4）其他濕法）其他濕法二二 經(jīng)有機破壞的分析方法經(jīng)有機破壞的分析方法73 例：例：凱氏定氮法凱氏定氮法以以硫酸硫酸-硫酸鹽法硫酸鹽法為基礎的為基礎的含氮有機藥物定量分含氮有機藥物定量分析方法。析方法。 適用于含氮有機藥物的前處理。適用于含氮有機藥物的前處理。二二 經(jīng)有機破壞的分析方法經(jīng)

43、有機破壞的分析方法741.原理：原理：供試品供試品NH4HSO4+(NH4)2SO42NaOH+(NH4)2SO4Na2SO4+2NH3+2H2ONH4HSO4+NaOHNaHSO4+NH3 +H2OH2SO4吸收：吸收：2%硼酸溶液吸收液硼酸溶液吸收液凱氏定氮法凱氏定氮法75（1）消解（凱氏燒瓶中進行）消解（凱氏燒瓶中進行）操作操作將將樣品、樣品、H2SO4、K2SO4、CuSO4放入凱放入凱氏燒瓶中一起加熱，使被測有機物含氮化合物中的氏燒瓶中一起加熱，使被測有機物含氮化合物中的N全部轉化為銨鹽的形式全部轉化為銨鹽的形式 (NH4)2SO4、NH4HSO42.測定法測定法分為分為3個步驟個步

44、驟消解、蒸餾吸收、滴定消解、蒸餾吸收、滴定凱氏定氮法凱氏定氮法76消解中各試劑作用消解中各試劑作用H2SO4氧化劑和炭化劑，生成氧化劑和炭化劑，生成SO2和和H2OK2SO4提高提高H2SO4沸點縮短消解時間沸點縮短消解時間CuSO4催化劑，使消解速度加快催化劑，使消解速度加快消解產(chǎn)物消解產(chǎn)物(NH4)2SO4、NH4HSO4分解完全的依據(jù)是分解液應為無色或綠色分解完全的依據(jù)是分解液應為無色或綠色凱氏定氮法凱氏定氮法77（2）蒸餾與吸收）蒸餾與吸收蒸餾：消解液加入蒸餾：消解液加入40%的的NaOH溶液后蒸餾溶液后蒸餾2NaOH+(NH4)2SO4Na2SO4+2NH3+2H2ONH4HSO4+

45、NaOHNaHSO4+NH3 +H2O吸收：吸收：2%硼酸溶液吸收液硼酸溶液吸收液凱氏定氮法凱氏定氮法78（3）滴定）滴定直接滴定法直接滴定法滴定液：滴定液：H2SO4滴定液（滴定液（0.05mol/L） 每每1ml的的0.05mol/L H2SO4=1.401mg的氮的氮指示劑：甲基紅指示劑：甲基紅溴甲酚綠混合指示劑溴甲酚綠混合指示劑 終點顏色：終點顏色：藍綠色藍綠色灰紫色灰紫色NH3+H3BO3NH3H3BO3(NH4)2SO4+2H3BO3NH3H3BO3+H2SO4傳遞作用傳遞作用凱氏定氮法凱氏定氮法79（3）滴定）滴定剩余滴定法剩余滴定法吸收液吸收液 將蒸餾出來的將蒸餾出來的NH3用

46、定量、過量的標準鹽酸或用定量、過量的標準鹽酸或硫酸吸收，過量的酸用標準堿溶液滴定。硫酸吸收，過量的酸用標準堿溶液滴定。 凱氏定氮法凱氏定氮法8081 凱氏定氮法可分為：凱氏定氮法可分為： 第一法（常量法）第一法（常量法）含氮量含氮量2530mg H2SO4滴定液（滴定液（0.05mol/L） 第二法（半微量法）第二法（半微量法）含氮量含氮量1.02.0mg H2SO4滴定液（滴定液（0.005mol/L）凱氏定氮法凱氏定氮法82（二）干法破壞（二）干法破壞 適用于含鹵素、硫、磷等有機物的前處理，亦適用于含鹵素、硫、磷等有機物的前處理，亦可用于含硒、砷鹽藥物的測定?？捎糜诤?、砷鹽藥物的測定。1

47、、高溫熾灼法、高溫熾灼法2、氧瓶燃燒法、氧瓶燃燒法三三 經(jīng)有機破壞的分析方法經(jīng)有機破壞的分析方法831、高溫熾灼法、高溫熾灼法主要用于含鹵素藥物的鑒別。主要用于含鹵素藥物的鑒別。本法將有機藥物經(jīng)高溫本法將有機藥物經(jīng)高溫灼燒灰化灼燒灰化，使有機結構分，使有機結構分解而待測元素轉化為無機元素或可溶性的無機鹽。解而待測元素轉化為無機元素或可溶性的無機鹽。將適量樣品置坩堝中，常加入無水將適量樣品置坩堝中，常加入無水Na2CO3、Mg(NO3)2、Ca(OH)2、ZnO等輔助灰化等輔助灰化，混合均，混合均勻后，先小火加熱，使樣品完全勻后，先小火加熱，使樣品完全炭化炭化，然后放入，然后放入高溫爐中灼燒，使

48、其灰化完全。高溫爐中灼燒，使其灰化完全。（二）干法破壞（二）干法破壞84 （1）原理）原理 將將有機藥物有機藥物放入充滿氧氣的密閉燒瓶中進行燃燒，放入充滿氧氣的密閉燒瓶中進行燃燒，并將燃燒所產(chǎn)生的待測物質吸收在適當并將燃燒所產(chǎn)生的待測物質吸收在適當吸收液吸收液中，中，然后根據(jù)待測物質的性質，采用適當分析方法進行然后根據(jù)待測物質的性質，采用適當分析方法進行鑒別、檢查或含量測定。鑒別、檢查或含量測定。 適用于含適用于含鹵素及硫、磷、硒等藥物鹵素及硫、磷、硒等藥物的鑒別、檢查的鑒別、檢查和含量測定。和含量測定。2、氧瓶燃燒法、氧瓶燃燒法85（2 2）儀器裝置）儀器裝置86容量大小隨樣品量而定，一般容

49、量大小隨樣品量而定，一般500ml、1000ml。取樣量通常為取樣量通常為1020 mg，使用，使用500 ml燃燒瓶。燃燒瓶。含氟藥物用石英或聚氯乙烯制成的燃燒瓶。含氟藥物用石英或聚氯乙烯制成的燃燒瓶。硬質玻璃碘瓶硬質玻璃碘瓶 2、氧瓶燃燒法、氧瓶燃燒法87鉑絲鉑絲瓶塞底部熔封一根鉑絲，鉑絲下端做成螺旋狀，瓶塞底部熔封一根鉑絲，鉑絲下端做成螺旋狀，長度約為瓶身的長度約為瓶身的2/3；鉑絲作用鉑絲作用 a.固定樣品固定樣品 b.催化作用催化作用使樣品分解完全使樣品分解完全2、氧瓶燃燒法、氧瓶燃燒法88無灰濾紙無灰濾紙樣品研細后放中間，樣品研細后放中間，按照虛線折疊固定于鉑絲按照虛線折疊固定于鉑

50、絲下端螺旋處。下端螺旋處。2、氧瓶燃燒法、氧瓶燃燒法89 稱樣用材料及稱樣稱樣用材料及稱樣 A. 固體樣品固體樣品 無灰濾紙無灰濾紙 B. 液體樣品液體樣品 紙袋紙袋 C. 軟膏類樣品：將適量樣品置不含被測成分軟膏類樣品：將適量樣品置不含被測成分的蠟油紙中包裹嚴密，外層再用無灰濾紙包裹的蠟油紙中包裹嚴密，外層再用無灰濾紙包裹2、氧瓶燃燒法、氧瓶燃燒法90（4）操作）操作取樣取樣1020mg，放入濾紙包好，放入濾紙包好樣品樣品燃燒產(chǎn)物燃燒產(chǎn)物吸收液吸收液適宜法測定適宜法測定吸收于吸收于燃燒燃燒O2/Pt加吸收液、通氧加吸收液、通氧燃燒燃燒吸收吸收測定測定2、氧瓶燃燒法、氧瓶燃燒法91 （5）注意

51、事項）注意事項 氧氣要充分氧氣要充分使樣品燃燒完全，燃燒完全時沒有黑色炭化物。使樣品燃燒完全，燃燒完全時沒有黑色炭化物。樣品燃燒時，溫度很高，燃燒瓶內壓力很大，有爆樣品燃燒時，溫度很高，燃燒瓶內壓力很大，有爆炸的可能性，必須采取防護措施。炸的可能性，必須采取防護措施。防爆防爆2、氧瓶燃燒法、氧瓶燃燒法92 吸收液吸收液定量吸收待測元素各種價態(tài)并轉化為單一定量吸收待測元素各種價態(tài)并轉化為單一價態(tài)。價態(tài)。 根據(jù)被測物種類及分析方法選擇根據(jù)被測物種類及分析方法選擇: H2O、H2O-NaOH、H2O-NaOH-H2O2吸收完全吸收完全:一般振搖一般振搖30min，燃燒瓶看不到煙霧。，燃燒瓶看不到煙霧

52、。吸收液選擇吸收液選擇Cl-、F- 白色煙霧白色煙霧Br- 棕色、棕色、I- 紫色紫色2、氧瓶燃燒法、氧瓶燃燒法93含鹵素藥物的燃燒產(chǎn)物含鹵素藥物的燃燒產(chǎn)物氟化物、氯化物氟化物、氯化物R-XX-+CO2+H2OO2/Pt 氟或氯以離子狀態(tài)存在，可選氟或氯以離子狀態(tài)存在，可選用水或水用水或水-氫氧化鈉氫氧化鈉吸收后可直接測定。吸收后可直接測定。2、氧瓶燃燒法、氧瓶燃燒法94R-BrR-BrBrBr2 2+Br+Br- -+CO+CO2 2+H+H2 2O OO O2 2/Pt/Pt量大量大 量少量少含鹵素藥物的燃燒產(chǎn)物含鹵素藥物的燃燒產(chǎn)物溴化物溴化物 燃燒后以溴化氫和單質溴的混合物存在，可在水燃

53、燒后以溴化氫和單質溴的混合物存在，可在水-氫氧化鈉吸收液中加氫氧化鈉吸收液中加SO2飽和溶液還原飽和溶液還原Br2Br- 2、氧瓶燃燒法、氧瓶燃燒法95含鹵素藥物的燃燒產(chǎn)物含鹵素藥物的燃燒產(chǎn)物 碘化物碘化物R-IR-II I2 2+I+I- -+IO+IO3 3- -+IO+IO_ _+CO+CO2 2+H+H2 2O OO O2 2/Pt/Pt量大量大 微量微量 量少量少銀量法銀量法 I-+Ag+ AgI 水水-氫氧化鈉氫氧化鈉-SO2飽和溶液飽和溶液碘量法碘量法 I2+2S2O32- S4O62-+2I-水水-氫氧化鈉溶液吸收，用氫氧化鈉溶液吸收，用溴溴-醋酸醋酸溶液氧化為溶液氧化為IO3

54、- 再用再用KI還原為還原為I22、氧瓶燃燒法、氧瓶燃燒法96含硫藥物的燃燒產(chǎn)物含硫藥物的燃燒產(chǎn)物R-SSO3+H2O+CO2O2/PtSO3+H2O2+H2O SO42-SO42-+BaCl2 BaSO42、氧瓶燃燒法、氧瓶燃燒法97含磷藥物的燃燒產(chǎn)物含磷藥物的燃燒產(chǎn)物R-PP2O5+H2O+CO2O2/PtP2O5+HNO3+H2O H3PO4采用磷鉬藍比色法測定含量采用磷鉬藍比色法測定含量磷酸磷酸+鉬酸銨鉬酸銨 磷鉬酸磷鉬酸 磷鉬藍磷鉬藍 還原劑還原劑2、氧瓶燃燒法、氧瓶燃燒法98含硒藥物的燃燒產(chǎn)物含硒藥物的燃燒產(chǎn)物R-SeSeO2+SeO3+H2O+CO2O2/PtSeO2+SeO3+

55、HNO3 H2SeO4 與與二氨基萘二氨基萘反應生成反應生成綠色熒光物質綠色熒光物質 比色法測定含量比色法測定含量2、氧瓶燃燒法、氧瓶燃燒法99實例實例碘苯酯的含量測定碘苯酯的含量測定原理：原理：有機碘化物，用氧瓶燃燒分解為碘化物，再有機碘化物，用氧瓶燃燒分解為碘化物，再 被氧化為游離碘后被吸收液吸收被氧化為游離碘后被吸收液吸收2、氧瓶燃燒法、氧瓶燃燒法100燃燒燃燒吸收吸收（NaOH+H2O）R-II2+NaI+NaIO3+CO2+H2O+NaClO加入溴加入溴醋酸氧化醋酸氧化劑劑將將I-、I2氧化為氧化為IO3-2NaI+Br2=2NaBr+I2I2+5Br2+6H2O=2HIO3+10H

56、Br2、氧瓶燃燒法、氧瓶燃燒法101加入甲酸除去過量的溴加入甲酸除去過量的溴Br2+HCOOH2HBr+CO2加加KI還原還原KI+IO3-3I2+H2O滴滴定定I2+2Na2S2O32HNaI+Na2S4O6至淀粉指示劑藍色消失至淀粉指示劑藍色消失2、氧瓶燃燒法、氧瓶燃燒法102第三節(jié)第三節(jié) 藥品質量標準分析方法驗證藥品質量標準分析方法驗證分析方法驗證目的：證明采用的分析方法準確、分析方法驗證目的：證明采用的分析方法準確、可靠。（能反應真實測定結果）可靠。（能反應真實測定結果） 分析方法驗證應用對象分析方法驗證應用對象1.研究新藥制定質量標準需對分析方法進行驗證；研究新藥制定質量標準需對分析

57、方法進行驗證；2.藥物生產(chǎn)工藝變更、制劑組分變更、原分析方法藥物生產(chǎn)工藝變更、制劑組分變更、原分析方法修訂時需對質量分析方法進行驗證；修訂時需對質量分析方法進行驗證；3.發(fā)表研究論文對建立的分析方法進行驗證。發(fā)表研究論文對建立的分析方法進行驗證。103需驗證的項目需驗證的項目驗證的內容驗證的內容準確度準確度 定量限定量限防腐劑防腐劑溶出度溶出度,釋放度釋放度鑒別試驗鑒別試驗雜質檢查雜質檢查含量測定含量測定精密度精密度 專屬性專屬性 檢測限檢測限 線性線性 范圍范圍 耐用性耐用性重復性重復性中間精密度中間精密度重現(xiàn)性重現(xiàn)性 第三節(jié)第三節(jié) 藥品質量標準分析方法驗證藥品質量標準分析方法驗證104一、

58、準確度（一、準確度（accuracy） 測量值與真實值接近的程度測量值與真實值接近的程度 表表 示示: 回收率回收率 測定方法：回收試驗測定方法：回收試驗 加樣回收試驗加樣回收試驗105（一）含量測定方法的準確度（一）含量測定方法的準確度 1、原料藥、原料藥 回收試驗：回收試驗： 空白空白+已知量已知量A的對照品（或標準品）測定，的對照品（或標準品）測定，測定值為測定值為M100%MRA一、準確度（一、準確度（accuracy）106加樣回收試驗：加樣回收試驗：已準確測定藥物含量已準確測定藥物含量P的真實樣品的真實樣品+已知量已知量A的的對照品（或標準品）測定，測定值為對照品（或標準品）測定，

59、測定值為M。100%MPRA（一）含量測定方法的準確度（一）含量測定方法的準確度 1、原料藥、原料藥一、準確度（一、準確度（accuracy）107 原料藥原料藥 （1）可用已知純度的對照品或樣品進行測定）可用已知純度的對照品或樣品進行測定（2）用本法所得結果與已建立準確度的另一方法）用本法所得結果與已建立準確度的另一方法測定的結果進行比較。測定的結果進行比較。 %100%加入量測得量回收率一、準確度（一、準確度（accuracy）108 制劑空白輔料加入已知含量的對照品，加入量制劑空白輔料加入已知含量的對照品，加入量為已知制劑濃度的為已知制劑濃度的80%、100%、120%；每一；每一濃度測

60、濃度測3份份 n=9 2、 制劑制劑（1）模擬處方法）模擬處方法: 即采用在空白輔料中加入原料藥即采用在空白輔料中加入原料藥對照品的方法。對照品的方法。%100%加入量測得量回收率一、準確度（一、準確度（accuracy）109%100%加入量本底量測得量回收率（2）標準添加法）標準添加法: 如不能得到制劑的全部組分，如不能得到制劑的全部組分，可向已知含量制劑定量中加入被測物對照品進行可向已知含量制劑定量中加入被測物對照品進行測定。測定。 加入已知純度對照品量為已知含量制劑濃度的加入已知純度對照品量為已知含量制劑濃度的80%、100%、120%，每一濃度測，每一濃度測3份份 n=9一、準確度（