福際邁好成功第一步核酸分離純化學習教案

1、會計學1福際邁好成功福際邁好成功(chnggng)第一步核酸第一步核酸分離純化分離純化第一頁，共76頁。EXPERT IN NUCLEIC ACID EXTRACTIONv公司概況公司概況v核酸分離提取技術(shù)核酸分離提取技術(shù)(jsh)(jsh)交交流流主要主要(zhyo)內(nèi)內(nèi)容容中 國 ( z h n u ) 福 際 Wo r l d s F o r e g e n e第1頁/共76頁第二頁，共76頁。公司簡介 成都福際生物(shngw)技術(shù)有限公司坐落于成都高新孵化園內(nèi)，由耶魯大學留學回國的知名學者創(chuàng)辦, 主營方向為研發(fā)、生產(chǎn)和銷售生命科學科研及臨床所用的試劑及試劑盒。現(xiàn)已推出各種DNA純化試

2、劑盒及直接PCR系列產(chǎn)品。未來，福際將進一步加大研發(fā)投入，豐富產(chǎn)品種類，致力于發(fā)展成為(chngwi)世界一流的集研發(fā)、生產(chǎn)、銷售、技術(shù)支持、技術(shù)服務(wù)為一體的生物技術(shù)公司。管理行政中心銷售中心服務(wù)中心研發(fā)中心（基礎(chǔ)）返回(fnhu)第2頁/共76頁第三頁，共76頁。CONTACT US人才(rnci)優(yōu)勢v公司(n s)擁有一支實力雄厚的研發(fā)隊伍，主要研發(fā)人員均具有多年海外名校工作經(jīng)驗，在Science、Nature、Lancet、Molecular Cell、N.Engl J Med、PNAS等雜志發(fā)表過數(shù)十篇論文，具有廣闊的國際視野和較強的產(chǎn)品設(shè)計開發(fā)能力。v技術(shù)顧問有來自哈佛、耶魯?shù)让?/p>

3、的美國國家科學院院士、教授等知名學者。v現(xiàn)有研究人員30人，90%具有碩士及以上學歷。未來公司(n s)將繼續(xù)擴大研發(fā)團隊規(guī)模，預(yù)計到2014年將達到100人以上，其中85%以上具有碩士或博士學位。第3頁/共76頁第四頁，共76頁。CONTACT US宋旭 公司首席技術(shù)官。四川大學博導，A級崗位二級教授，國家自然科學基金生命科學部基因表達調(diào)控(dio kn)與表觀遺傳學評審專家。主要從事長非編碼RNA及抗腫瘤藥物研究。發(fā)表文章：Xu Song, et al. (2005) Roles of PSF protein and VL30 RNA in reversible gene regulati

4、on. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 102(34): 12189-93. (封面文章)Xu Song, et al. (2004) Binding of mouse VL30 retrotransposon RNA to PSF protein induces genes repressed by PSF: Effects on steroidogenesis and oncogenesis. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 101(2): 621-6第4頁/共76頁第五頁，共76頁。Alan Garen 公司高級顧問。耶魯大學終身教授、美國

5、(mi u)國家科學院院士、美國(mi u)國家藝術(shù)與科學院院士、四川大學特聘教授。 率先發(fā)現(xiàn)蛋白質(zhì)編碼的三個終止密碼子，為現(xiàn)代分子生物學研究的主要開拓人之一?，F(xiàn)主要從事配體靶向抗腫瘤藥物研究及原癌基因的發(fā)現(xiàn)與鑒定工作。第5頁/共76頁第六頁，共76頁。服務(wù)(fw)對象生物學、醫(yī)學(yxu)實驗室生物技術(shù)(jsh)公司、科研機構(gòu)海關(guān)、質(zhì)檢部門醫(yī)院、疾控中心、血站法醫(yī)、刑偵更多行業(yè)第6頁/共76頁第七頁，共76頁。EXPERT IN NUCLEIC ACID EXTRACTION核酸分離提取技術(shù)核酸分離提取技術(shù)(jsh)(jsh)交流交流第7頁/共76頁第八頁，共76頁。EXPERT IN NU

6、CLEIC ACID EXTRACTION 核酸是遺傳信息的載體，是最重要的生物信息分子，是分子生物學研究的主要(zhyo)對象，因此核酸的提取是分子生物學實驗技術(shù)中最重要、最基本的操作 。前言前言(qin yn)(qin yn)第8頁/共76頁第九頁，共76頁。EXPERT IN NUCLEIC ACID EXTRACTIONDNADNA提取方法簡介提取方法簡介DNADNA提取常見問題、原因分析及其對策提取常見問題、原因分析及其對策RNARNA提取方法簡介提取方法簡介RNARNA提取及其提取及其RT-PCRRT-PCR常見問題、原因分析及其對常見問題、原因分析及其對策策ForegeneFor

7、egene基因組基因組DNADNA純化純化(chn hu)(chn hu)方案方案ForegeneForegene基因組基因組DNADNA純化純化(chn hu)(chn hu)實例實例ForegeneForegene產(chǎn)品簡介產(chǎn)品簡介第9頁/共76頁第十頁，共76頁。EXPERT IN NUCLEIC ACID EXTRACTIONDNADNA提取提取(tq)(tq)方法簡方法簡介介q 基因組DNA的提取(tq)CTAB法 SDS法 其他(qt)方法第10頁/共76頁第十一頁，共76頁。EXPERT IN NUCLEIC ACID EXTRACTIONq 非基因組DNA的提取(tq)質(zhì)粒DNA

8、的提取(tq) 堿裂解法 煮沸法線粒體、葉綠體DNA的提取(tq) 差速離心結(jié)合SDS裂解法第11頁/共76頁第十二頁，共76頁。EXPERT IN NUCLEIC ACID EXTRACTION 組份組份 Tris-HCl （pH8.0）EDTA （pH8.0） NaCl CTAB-巰基乙醇巰基乙醇 終濃度終濃度 100 mM 20 mM 1.4M2%(W/V)0.1%（V/V）使用前加入使用前加入基因組DNACTAB 法提取(tq)緩沖液經(jīng)典配方 CTAB溶解(rngji)細胞膜，并結(jié)合核酸，使核酸便于分離； -巰基乙醇是抗氧化劑，有效地防止酚氧化成醌，避免褐變，使酚容易去除，當酚類物質(zhì)被

9、氧化后就會和核酸不可逆的結(jié)合。第12頁/共76頁第十三頁，共76頁。EXPERT IN NUCLEIC ACID EXTRACTIONCTAB 法提取緩沖液改進(gijn)配方 組組份份 Tris-HCl （pH8.0）EDTA （pH8.0）NaCl CTAB PVP40-巰基乙醇巰基乙醇終終濃濃度度 100 mM 20 mM1.4M3%(W/V)5%(W/V)2%（V/V）使用前加使用前加入入PVP（聚乙烯吡咯烷酮）是酚的絡(luò)合物，能與多酚形成一種不溶的絡(luò)合物質(zhì)，有效去除多酚，減少DNA中酚的污染；同時它也能和多糖(du tn)結(jié)合，有效去除多糖(du tn)。第13頁/共76頁第十四頁，共

10、76頁。EXPERT IN NUCLEIC ACID EXTRACTION植物(zhw)CTAB法流程圖植物材料裂解液上層溶液液氮研磨抽提細胞裂解干燥溶解離心洗滌酒精沉淀DNA溶液第14頁/共76頁第十五頁，共76頁。EXPERT IN NUCLEIC ACID EXTRACTION基因組DNASDS 法提取(tq)緩沖液配方組份組份Tris-HCl （pH8.0）EDTA （pH 8.0 ）NaCl SDS終濃度終濃度 10 mM 20 mM 0.4M 2%SDSSDS是一種陰離子去垢劑，在高溫（是一種陰離子去垢劑，在高溫（55556565）條件下能裂解細胞，使染色體離析，蛋白變性，釋放出核

11、酸；）條件下能裂解細胞，使染色體離析，蛋白變性，釋放出核酸；提高鹽提高鹽(KAc(KAc或或NH4Ac)NH4Ac)濃度并降低溫度（冰?。沟鞍踪|(zhì)及多糖雜質(zhì)沉淀濃度并降低溫度（冰?。?，使蛋白質(zhì)及多糖雜質(zhì)沉淀(chndin)(chndin)，離心后除去沉淀，離心后除去沉淀(chndin)(chndin)；第15頁/共76頁第十六頁，共76頁。EXPERT IN NUCLEIC ACID EXTRACTIONSDS法流程圖 （以動物(dngw)組織為例） 動物組織細胞裂解上層溶液組織勻漿抽提干燥溶解離心洗滌酒精沉淀DNA溶液第16頁/共76頁第十七頁，共76頁。EXPERT IN NUCLEIC

12、 ACID EXTRACTION 物理方式：玻璃珠法、超聲波法、研磨法、凍融法 化學(huxu)方式：異硫氰酸胍法、堿裂解法 生物方式：酶法u根據(jù)細胞，裂解方式(fngsh)的不同基因組基因組DNADNA其他其他(qt)(qt)方方法法第17頁/共76頁第十八頁，共76頁。EXPERT IN NUCLEIC ACID EXTRACTIONu根據(jù)核酸分離(fnl)純化方式不同 吸附(xf)材料結(jié)合法第18頁/共76頁第十九頁，共76頁。EXPERT IN NUCLEIC ACID EXTRACTION 濃鹽法(yn f) 利用RNP和DNP在鹽溶液中溶解度不同，將二者分離 有機溶劑抽提法 有機溶

13、劑作為蛋白變性劑，同時(tngsh)抑制核酸酶的降解作用 密度梯度離心法 利用不同(b tn)內(nèi)容物密度不同(b tn)的原理分離各種內(nèi)容物第19頁/共76頁第二十頁，共76頁。EXPERT IN NUCLEIC ACID EXTRACTION質(zhì)粒DNA堿裂解法流程圖第20頁/共76頁第二十一頁，共76頁。EXPERT IN NUCLEIC ACID EXTRACTION細胞器DNA差速離心法 原理：是利用物質(zhì)比重的不同分離混合物的一種方法。 將待分離物質(zhì)置于均勻(jnyn)介質(zhì)（蔗糖）中，以一定的轉(zhuǎn)速進行離心，比重大的物質(zhì)優(yōu)先沉降，比重小的卻處于上層，從而得以分離第21頁/共76頁第二十二頁

14、，共76頁。EXPERT IN NUCLEIC ACID EXTRACTIONDNADNA提取方法簡介提取方法簡介DNADNA提取常見問題、原因分析及其對策提取常見問題、原因分析及其對策RNARNA提取方法簡介提取方法簡介RNARNA提取及其提取及其RT-PCRRT-PCR常見問題、原因分析及其常見問題、原因分析及其對策對策ForegeneForegene基因組基因組DNADNA純化方案純化方案(fng n)(fng n)ForegeneForegene基因組基因組DNADNA純化實例純化實例ForegeneForegene產(chǎn)品簡介產(chǎn)品簡介第22頁/共76頁第二十三頁，共76頁。EXPERT

15、IN NUCLEIC ACID EXTRACTIONDNA提取(tq)的步驟第23頁/共76頁第二十四頁，共76頁。EXPERT IN NUCLEIC ACID EXTRACTION一、材料一、材料(cilio)(cilio)準備準備第24頁/共76頁第二十五頁，共76頁。EXPERT IN NUCLEIC ACID EXTRACTION二、細胞二、細胞(xbo)(xbo)裂解裂解第25頁/共76頁第二十六頁，共76頁。EXPERT IN NUCLEIC ACID EXTRACTION三、核酸三、核酸(h sun)(h sun)分分離、純化離、純化第26頁/共76頁第二十七頁，共76頁。EXP

16、ERT IN NUCLEIC ACID EXTRACTION 蛋白的去除 酚/氯仿(l fn)抽提 使用蛋白變性劑（SDS、異硫氰酸胍） 高鹽洗滌 蛋白酶處理（蛋白酶K） 多酚的去除 在抽提液中加入防止(fngzh)酚類物質(zhì)氧化的試劑 加入易與酚類結(jié)合的試劑第27頁/共76頁第二十八頁，共76頁。EXPERT IN NUCLEIC ACID EXTRACTION 多糖的去除 高鹽法 用多糖水解酶水解 在提取緩沖液中加入氯苯 用PEG8000代替乙醇(y chn)沉淀DNA 鹽離子的去除 用70%的乙醇洗滌(xd)DNA沉淀第28頁/共76頁第二十九頁，共76頁。EXPERT IN NUCLEI

17、C ACID EXTRACTION四、核酸四、核酸(h sun)(h sun)分離分離、純化、純化第29頁/共76頁第三十頁，共76頁。EXPERT IN NUCLEIC ACID EXTRACTIONDNA提取(tq)常見問題問題一、DNA樣本不純，影響(yngxing)后續(xù)酶促和PCR反應(yīng)1、DNA中有蛋白、多糖、多酚類污染2、DNA在溶解前，有酒精殘留3、DNA中有金屬離子的殘留4、DNA中有有機酸類物質(zhì)殘留對策對策1、重新對DNA進行純化2、重新對DNA進行沉淀，盡量揮發(fā)乙醇3、增加70%乙醇的洗滌次數(shù)（2-3次）第30頁/共76頁第三十一頁，共76頁。EXPERT IN NUCLEI

18、C ACID EXTRACTION1、材料不新鮮或反復凍融2、未完全抑制內(nèi)源核酸酶活性3、提取過程操作劇烈，剪切力大4、外源核酸酶污染對策對策1、盡量選取新鮮樣本，取樣后對樣本使用合適方法保存，避免反復凍融2、液氮研磨或勻漿后，在解凍前應(yīng)加入預(yù)冷的裂解液3、對于內(nèi)源核酸酶豐富的樣本，應(yīng)盡量抑制其酶活4、細胞裂解后操作動作應(yīng)盡量輕柔5、盡量減少外源核酸酶污染問題(wnt)二、DNA降解第31頁/共76頁第三十二頁，共76頁。EXPERT IN NUCLEIC ACID EXTRACTION問題(wnt)三、DNA提取量少1、實驗材料質(zhì)量差或量過多、過少2、破壁或裂解不完全3、DNA未完全沉淀4、

19、洗滌和溶解過程中DNA丟失對策對策1、選取盡可能新鮮或者幼嫩的材料2、選擇合適的樣本量和裂解方法3、低溫沉淀、延長沉淀時間，加入一定的助沉劑4、在進行沉淀洗滌時，注意誤將沉淀倒出；勿過度干燥DNA導致溶解困難第32頁/共76頁第三十三頁，共76頁。EXPERT IN NUCLEIC ACID EXTRACTIONDNADNA提取方法簡介提取方法簡介(jin ji)(jin ji)DNADNA提取常見問題、原因分析及其對策提取常見問題、原因分析及其對策RNARNA提取方法簡介提取方法簡介(jin ji)(jin ji)RNARNA提取及其提取及其RT-PCRRT-PCR常見問題、原因分析及其常見

20、問題、原因分析及其對策對策ForegeneForegene基因組基因組DNADNA純化方案純化方案ForegeneForegene基因組基因組DNADNA純化實例純化實例ForegeneForegene產(chǎn)品簡介產(chǎn)品簡介(jin ji)(jin ji)第33頁/共76頁第三十四頁，共76頁。EXPERT IN NUCLEIC ACID EXTRACTIONRNARNA提取方法提取方法(fngf)(fngf)簡介簡介RNARNA提取通用提取通用(tngyng)(tngyng)方法方法- -異硫氰酸胍異硫氰酸胍苯酚法苯酚法原理： 細胞在變性(binxng)劑異硫氰酸胍的作用下被裂解，同時核蛋白體上的

21、蛋白變性(binxng)，核酸釋放； 釋放出來的DNA和RNA由于在特定PH下在酚中的溶解度不同而分別位于整個體系中的中間相和水相，從而得到分離； 有機試劑抽提，沉淀，得到純凈的RNA。第34頁/共76頁第三十五頁，共76頁。EXPERT IN NUCLEIC ACID EXTRACTION步驟：材料準備：盡量新鮮裂解變性：異硫氰酸胍（亞硫氰胍，-巰基乙醇，N-月桂肌氨酸等）。使細胞及核蛋白復合物變性，釋放RNA，有效抑制核酸酶。純化分離：苯酚、氯仿、異戊醇。苯酚/氯仿可抽提去除雜物。洗滌：70%乙醇沉淀：異丙醇、無水乙醇。乙酸鈉（PH4.0）：維持變性的細胞裂解液的PH值，沉淀RNA。此外(

22、cwi)還常用氯化鋰選擇沉淀RNA。第35頁/共76頁第三十六頁，共76頁。EXPERT IN NUCLEIC ACID EXTRACTION影響(yngxing)RNA提取的因素 材料 盡量新鮮、避免(bmin)反復凍融注：如若材料來源困難，且實驗需要(xyo)一定的時間間隔，可以先將材料貯存在TRIzol或樣品貯存液中，于-70或者-20保存。如要多次提取，請分成多份保存；液氮長期保存，-70短期保存。第36頁/共76頁第三十七頁，共76頁。EXPERT IN NUCLEIC ACID EXTRACTION 樣本破碎及裂解 根據(jù)不同材料選擇不同的處理(chl)方法 樣本量適當(shdng)

23、，保證充分裂解注：培養(yǎng)細胞，通?？芍苯蛹恿呀庖毫呀猓唤湍负图毦?，一般TRIzol可直接裂解，對于一些特殊的材料可先用酶或者機械方法破壁；動植物組織，先液氮研磨和勻漿，后加裂解液裂解。期間動作(dngzu)快速，樣品保持冷凍。 為避免DNA的污染，可適當增加裂解液的用量第37頁/共76頁第三十八頁，共76頁。EXPERT IN NUCLEIC ACID EXTRACTIONRNA純化(chn hu)方法 酚/氯仿純化 一定要充分混勻，且動作(dngzu)快速 經(jīng)典沉淀方法(fngf) 雖然經(jīng)濟，但操作時間長，易造成RNA的降解 柱式離心純化 抽提速度快，有效去除雜質(zhì)，對后續(xù)實驗影響小第38頁/共

24、76頁第三十九頁，共76頁。EXPERT IN NUCLEIC ACID EXTRACTIONDNADNA提取方法提取方法(fngf)(fngf)簡介簡介DNADNA提取常見問題、原因分析及其對策提取常見問題、原因分析及其對策RNARNA提取方法提取方法(fngf)(fngf)簡介簡介RNARNA提取及其提取及其RT-PCRRT-PCR常見問題、原因分析及其對策常見問題、原因分析及其對策ForegeneForegene基因組基因組DNADNA純化方案純化方案ForegeneForegene基因組基因組DNADNA純化實例純化實例ForegeneForegene產(chǎn)品簡介產(chǎn)品簡介第39頁/共76頁

25、第四十頁，共76頁。EXPERT IN NUCLEIC ACID EXTRACTION常見問題RNA 的降解 OD260 /OD280 比值偏低 電泳帶型異常 下游(xiyu)實驗效果不佳第40頁/共76頁第四十一頁，共76頁。EXPERT IN NUCLEIC ACID EXTRACTIONRNA降解降解新鮮樣本1、裂解液的質(zhì)量2、外源RNase的污染3、裂解液的用量不足，組織裂解不充分4、另外某些富含內(nèi)源酶的樣品5、建議在液氮條件下將組織碾碎，并且勻漿時使用更多裂解液。冷凍樣本樣品取材后應(yīng)立即置于液氮中速凍，然后可以移至-70冰箱保存。樣品要相對小一點先用液氮研磨，再加裂解液勻漿樣品與裂解

26、液充分接觸之前應(yīng)避免融化，研磨用具必須預(yù)冷，研磨過程中即使補充液氮。第41頁/共76頁第四十二頁，共76頁。EXPERT IN NUCLEIC ACID EXTRACTIONOD260/280比值較差比值較差蛋白污染不要吸入中間層及有機相，加入氯仿后首先混勻，并且離心分層的離心力和時間要足夠。減少起始樣品量，確保裂解完全、徹底苯酚殘留或抽提試劑殘留不要吸入中間層及有機相，加入氯仿后首先混勻，并且離心分層的離心力和時間要足夠。應(yīng)用75%乙醇洗滌后，應(yīng)盡量倒盡乙醇設(shè)備限制測定OD260及OD280數(shù)值時，要使OD260讀數(shù)在0.10-0.50之間，此范圍線性最好。用水稀釋樣本測OD時，對照及樣品稀

27、釋液請使用10mM Tris，PH7.5。用水作為稀釋液會導致比值偏低。第42頁/共76頁第四十三頁，共76頁。EXPERT IN NUCLEIC ACID EXTRACTION電泳帶型異常電泳帶型異常非變性電泳上樣量超過3g，電壓超過6V/cm，電泳液陳舊，均可能導致28S和18S條帶分不開。變性電泳EB與單鏈的結(jié)合能力要差一些，故上樣量相同時，變性電泳比非變性電泳要淡一些。下游實驗效果不佳甲醛質(zhì)量不好第43頁/共76頁第四十四頁，共76頁。EXPERT IN NUCLEIC ACID EXTRACTION下游實驗效果不佳下游實驗效果不佳RNA降解抽提試劑殘留樣品中雜質(zhì)殘留DNA污染第44頁

28、/共76頁第四十五頁，共76頁。EXPERT IN NUCLEIC ACID EXTRACTIONRT-PCRRT-PCR常見問題分析常見問題分析(fnx)(fnx)問題一：少量或沒有(mi yu)RT-PCR產(chǎn)物可能原因可能原因解決方案解決方案RNA降解分離無污染、高質(zhì)量的RNA；防止RNA降解RNA中含有逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑70%（v/v）乙醇清洗RNA沉淀，以去除抑制劑起始RNA量太低（1g）增加RNA的量多糖同RNA共沉淀用氯化鋰重新沉淀RNA以去除多糖合成cDNA第一鏈的引物退火失敗確定退火溫度是否適合所用的引物RNA模板存在較多的二級結(jié)構(gòu)將RNA和引物在不含鹽及緩沖液條件下變性/退火，或

29、者是提高逆轉(zhuǎn)錄的反應(yīng)溫度反轉(zhuǎn)錄成功，PCR失敗PCR步驟中使用超過1/5的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)產(chǎn)物第45頁/共76頁第四十六頁，共76頁。EXPERT IN NUCLEIC ACID EXTRACTION問題(wnt)二：有非特異性條帶可能原因可能原因解決方案解決方案引物和模板的非特異性退火提高反應(yīng)的溫度和特異性基因引物設(shè)計特異性較差提高引物的特異性RNA中有基因組DNA的污染使用擴增級DNase 處理RNA形成引物二聚體設(shè)計在3，端沒有互補序列的引物鎂離子濃度太高優(yōu)化鎂離子濃度第46頁/共76頁第四十七頁，共76頁。EXPERT IN NUCLEIC ACID EXTRACTION問題三：產(chǎn)生(chn

30、shng)彌散（smear）帶可能原因可能原因解決方案解決方案第一鏈產(chǎn)物的含量過高常規(guī)PCR步驟中減少第一鏈產(chǎn)物的量PCR反應(yīng)中引物過多減少引物的用量循環(huán)數(shù)過多減少PCR的循環(huán)次數(shù)退火溫度過低適當提高退火溫度寡核苷酸片段產(chǎn)生的非特異性擴增提取高質(zhì)量的RNA，防止DNA污染第47頁/共76頁第四十八頁，共76頁。EXPERT IN NUCLEIC ACID EXTRACTIONDNADNA提取提取(tq)(tq)方法簡介方法簡介DNADNA提取提取(tq)(tq)常見問題、原因分析及其對策常見問題、原因分析及其對策RNARNA提取提取(tq)(tq)方法簡介方法簡介RNARNA提取提取(tq)(

31、tq)及其及其RT-PCRRT-PCR常見問題、原因分常見問題、原因分析及其對策析及其對策ForegeneForegene基因組基因組DNADNA純化方案純化方案ForegeneForegene基因組基因組DNADNA純化實例純化實例ForegeneForegene產(chǎn)品簡介產(chǎn)品簡介第48頁/共76頁第四十九頁，共76頁。EXPERT IN NUCLEIC ACID EXTRACTIONForegeneForegene基因組基因組DNADNA純化純化(chn (chn hu)hu)方案方案獨特的DNA-only結(jié)合柱無需(wx)添加RNA酶強勁的Foregene Protease反應(yīng)體系第49頁

32、/共76頁第五十頁，共76頁。EXPERT IN NUCLEIC ACID EXTRACTIONForegeneForegene基因組基因組DNADNA純化純化(chn (chn hu)hu)方案方案硅膠膜法提取核酸(h sun)的關(guān)鍵點：硅膠膜結(jié)合柱結(jié)合緩沖液體系裂解緩沖液體系第50頁/共76頁第五十一頁，共76頁。EXPERT IN NUCLEIC ACID EXTRACTION一、獨特一、獨特(dt)(dt)的的 DNA-only DNA-only 結(jié)合柱結(jié)合柱v柱式核酸提取成敗的關(guān)鍵：DNA-only，福際生物獨家研發(fā)的新型硅膠(u jio)模結(jié)合柱v配合Foregene特有的緩沖體系

33、，特異結(jié)合DNA，不結(jié)合RNA、蛋白、內(nèi)毒素等雜質(zhì)v提取的DNA更多、更純ForegeneForegene基因組基因組DNADNA純化純化(chn (chn hu)hu)方案方案第51頁/共76頁第五十二頁，共76頁。EXPERT IN NUCLEIC ACID EXTRACTIONForegeneForegene基因組基因組DNADNA純化純化(chn hu)(chn hu)方案方案舉例(j l)公司公司吸附柱類型吸附柱類型培養(yǎng)體積培養(yǎng)體積（ml）柱載量柱載量（ug）時間時間（min）是否去內(nèi)毒是否去內(nèi)毒素素Foregene（DE-01111-13）DNA-only硅膠膜硅膠膜1-58020

34、是是（2EU/l）QIAGEN Plasmid Kit（Cat.no.12123-25）離子交換柱離子交換柱3-102080是是（9.3EU/l）Foregene High Quality Plasmid Mini Kit第52頁/共76頁第五十三頁，共76頁。EXPERT IN NUCLEIC ACID EXTRACTION二、無需額外添加二、無需額外添加RNARNA酶，輕松告別酶，輕松告別(go(gobi)RNAbi)RNA污染污染v終結(jié)實驗室RNA酶污染的苦惱(kno)vRNA提取的克星RNA酶污染什么(shn me)？RNA又被降解了！ForegeneForegene基因組基因組DNA

35、DNA純化方案純化方案第53頁/共76頁第五十四頁，共76頁。EXPERT IN NUCLEIC ACID EXTRACTIONForegeneForegene基因組基因組DNADNA純化純化(chn hu)(chn hu)方案方案三、強勁三、強勁(qingjng)(qingjng)的的 Foregene Protease Foregene Protease反應(yīng)體反應(yīng)體系系v福際生物(shngw)獨家自主研發(fā)v活性高v裂解速度快、基因組DNA完整性好v提取DNA產(chǎn)量高、純度好第54頁/共76頁第五十五頁，共76頁。EXPERT IN NUCLEIC ACID EXTRACTIONForegen

36、eForegene基因組基因組DNADNA純化純化(chn (chn hu)hu)方案方案獨特的DNA-only結(jié)合柱無需(wx)添加RNA酶強勁的Foregene Protease反應(yīng)體系第55頁/共76頁第五十六頁，共76頁。EXPERT IN NUCLEIC ACID EXTRACTIONForegeneForegene基因組基因組DNADNA純化純化(chn (chn hu)hu)方案方案硅膠(u jio)膜法提取核酸的關(guān)鍵點：硅膠(u jio)膜結(jié)合柱結(jié)合緩沖液體系裂解緩沖液體系第56頁/共76頁第五十七頁，共76頁。EXPERT IN NUCLEIC ACID EXTRACTION

37、一、獨特一、獨特(dt)(dt)的的 DNA-only DNA-only 結(jié)合柱結(jié)合柱v柱式核酸提取成敗(chngbi)的關(guān)鍵：DNA-only，福際生物獨家研發(fā)的新型硅膠模結(jié)合柱v配合Foregene特有的緩沖體系，特異結(jié)合DNA，不結(jié)合RNA、蛋白、內(nèi)毒素等雜質(zhì)v提取的DNA更多、更純ForegeneForegene基因組基因組DNADNA純化純化(chn (chn hu)hu)方案方案第57頁/共76頁第五十八頁，共76頁。EXPERT IN NUCLEIC ACID EXTRACTIONForegeneForegene基因組基因組DNADNA純化純化(chn hu)(chn hu)方案

38、方案舉例(j l)公司公司吸附柱類型吸附柱類型培養(yǎng)體積培養(yǎng)體積（ml）柱載量柱載量（ug）時間時間（min）是否去內(nèi)毒是否去內(nèi)毒素素Foregene（DE-01111-13）DNA-only硅膠膜硅膠膜1-58020是是（2EU/l）QIAGEN Plasmid Kit（Cat.no.12123-25）離子交換柱離子交換柱3-102080是是（9.3EU/l）Foregene High Quality Plasmid Mini Kit第58頁/共76頁第五十九頁，共76頁。EXPERT IN NUCLEIC ACID EXTRACTION二、無需額外添加二、無需額外添加(tin ji)RNA(

39、tin ji)RNA酶，輕松告別酶，輕松告別RNARNA污污染染v終結(jié)(zhngji)實驗室RNA酶污染的苦惱vRNA提取的克星RNA酶污染什么(shn me)？RNA又被降解了！ForegeneForegene基因組基因組DNADNA純化方案純化方案第59頁/共76頁第六十頁，共76頁。EXPERT IN NUCLEIC ACID EXTRACTIONForegeneForegene基因組基因組DNADNA純化純化(chn hu)(chn hu)方案方案三、強勁的三、強勁的 Foregene Protease Foregene Protease反應(yīng)反應(yīng)(fnyng)(fnyng)體系體系v福

40、際生物獨家自主研發(fā)v活性高v裂解(li ji)速度快、基因組DNA完整性好v提取DNA產(chǎn)量高、純度好第60頁/共76頁第六十一頁，共76頁。EXPERT IN NUCLEIC ACID EXTRACTIONDNADNA提取提取(tq)(tq)方法簡介方法簡介DNADNA提取提取(tq)(tq)常見問題、原因分析及其對策常見問題、原因分析及其對策RNARNA提取提取(tq)(tq)方法簡介方法簡介RNARNA提取提取(tq)(tq)及其及其RT-PCRRT-PCR常見問題、原因常見問題、原因分析及其對策分析及其對策ForegeneForegene基因組基因組DNADNA純化方案純化方案Foreg

41、eneForegene基因組基因組DNADNA純化實例純化實例ForegeneForegene產(chǎn)品簡介產(chǎn)品簡介第61頁/共76頁第六十二頁，共76頁。EXPERT IN NUCLEIC ACID EXTRACTIONForegeneForegene基因組基因組DNADNA純化純化(chn (chn hu)hu)實例實例一、 Foregene Mouse Tail DNA Mini Kitv一般方法抽提鼠尾基因組DNA具一定難度vForegene Mouse Tail DNA Mini Kit的成績：60-90min內(nèi)從0.5-1cm幼年或成年(chngnin)小鼠鼠尾中提取到10-20g高質(zhì)量

42、、高純度的基因組DNA。世界上抽提鼠尾基因組DNA最快的試劑盒！第62頁/共76頁第六十三頁，共76頁。EXPERT IN NUCLEIC ACID EXTRACTION操操作作(c (coozuzu)流流程程Total Time60-90min第63頁/共76頁第六十四頁，共76頁。EXPERT IN NUCLEIC ACID EXTRACTION試劑盒效果試劑盒效果(xiogu)(xiogu)：需要(xyo)時間（小時）第64頁/共76頁第六十五頁，共76頁。EXPERT IN NUCLEIC ACID EXTRACTION 另外，F(xiàn)oregene公司還為您提供鼠尾直接PCR試劑盒，該試劑

43、盒無需提取基因組DNA，只需對鼠尾進行簡單處理即可進行后續(xù)(hux)的PCR反應(yīng)。值得一提的是，直接PCR處理過的鼠尾仍可進行基因組提取。第65頁/共76頁第六十六頁，共76頁。EXPERT IN NUCLEIC ACID EXTRACTION二、二、 Foregene Soil DNA Isolation Kitv土壤樣品基因組DNA提取的難點vForegene Soil DNA Isolation Kit的成績：在90min內(nèi)有效的去除各種抑制因子，高效率的完成(wn chng)土壤DNA的純化。第66頁/共76頁第六十七頁，共76頁。EXPERT IN NUCLEIC ACID EXTR

44、ACTIONTotal Time90min操操作作(c (coozuzu)流流程程第67頁/共76頁第六十八頁，共76頁。EXPERT IN NUCLEIC ACID EXTRACTION各種各種( zhn)( zhn)土壤樣本的產(chǎn)量土壤樣本的產(chǎn)量及純度：及純度：土壤來源樣本用量(g)DNA產(chǎn)量(g)OD260/280OD260/230花壇土0.54-51.7-1.91.7-1.9草地土（多石子）0.54-61.7-1.91.8-1.9樹林土0.54-61.7-1.91.7-1.8草坪土10.58-101.7-1.81.8-1.9湖邊0.56-101.81.9-2.0松樹林下0.58-121.81.8-1