輸血科培訓(xùn)資料教學(xué)提綱

1、輸血科培訓(xùn)資料 人類最重要的幾個血型系統(tǒng)人類最重要的幾個血型系統(tǒng)紅細(xì)胞血型系統(tǒng) ABO血型系統(tǒng) Rh血型系統(tǒng)其他血型系統(tǒng) 白細(xì)胞抗原系統(tǒng) 血小板抗原及抗體 血清蛋白成分的抗原特異性血型抗原與抗體的幾個特性血型抗原與抗體的幾個特性A或B抗原在胚胎期及出生時便能檢出，但敏感性較低，到20歲左右時 才達(dá)高峰?？乖越K身不變，但到老年敏感性有所下降。ABO血型系統(tǒng)抗體有免疫抗體和天然抗體之分。 抗體有抗A和抗B兩種。 人在出生前尚未產(chǎn)生抗體，出生后3-6個月才開始出現(xiàn)，至青春期達(dá)高 峰。產(chǎn)生抗體的功能可延續(xù)終身，但其效價隨著年齡增長而逐漸降低。 天然抗體可能是由一種無覺察的抗原刺激而產(chǎn)生。 血型抗體是

2、免疫球蛋白，免疫性抗體主要是IgG，天然抗體主要是IgM。ABOABO血型分型原則血型分型原則血型血型紅細(xì)胞上抗原紅細(xì)胞上抗原血清中抗體血清中抗體AA抗BBB抗A O無抗A，抗BABA、B無血型鑒定前的準(zhǔn)備血型鑒定前的準(zhǔn)備 一、標(biāo)本的采集 1.紅細(xì)胞懸液標(biāo)本 門診血型常用手指血做正定性。但現(xiàn)在已經(jīng)不提倡了。采集EDTA-K2抗凝的靜脈血離心，取紅細(xì)胞用生理鹽水洗滌配制紅細(xì)胞懸液：2紅細(xì)胞懸液用于抗體效價的測定； 5 紅細(xì)胞懸液用于血型鑒定、交叉配血試驗(yàn)， 2.血漿或血清標(biāo)本血型及配血標(biāo)本的要求護(hù)士根據(jù)送檢單的要求，雙人核對采集標(biāo)本。采集后立即送檢。輸血科工作人員注意核對接收標(biāo)本兩個小時內(nèi)要完成

3、血型的檢驗(yàn)。配血標(biāo)本要三天內(nèi)的。標(biāo)本要保存七天。ABOABO血型鑒定方法血型鑒定方法 血型鑒定抗原+抗體反應(yīng) 正向定型（direct typing）: 已知特異性抗體（標(biāo)準(zhǔn)血清） 檢測紅細(xì)胞上的未知抗原 反向定型（indirect typing): 已知血型的標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞 檢測血清中的未知抗體 ABO血型正、反向鑒定及結(jié)果判斷血型正、反向鑒定及結(jié)果判斷 鑒定鑒定ABO血型常用方法血型常用方法 1. 生理鹽水凝集法 鹽水介質(zhì) 原理：Ag+Ab AgAb用生理鹽水為介質(zhì)，檢測的是用生理鹽水為介質(zhì)，檢測的是IgM性質(zhì)抗體性質(zhì)抗體 玻片法玻片法試管法試管法正定型血型鑒定操作程序圖（玻片法）正定型血型鑒定

4、操作程序圖（玻片法）血型鑒定血型鑒定試管法試管法1、每個被檢者準(zhǔn)備小試管1支，貼好名簽，加入等滲鹽水1ml。從毛細(xì)血管采血配成5%的紅細(xì)胞懸液，注意血液不能凝結(jié)。2、每個被檢者準(zhǔn)備小試管3支，分別貼上A、B標(biāo)簽，并標(biāo)上姓名，按標(biāo)簽分別加抗A、B抗體2滴。3、兩管各加被檢紅細(xì)胞懸液1滴混勻。4、放在離心機(jī)內(nèi)，用10003000轉(zhuǎn)/分，1分鐘，觀察現(xiàn)象。加被檢紅細(xì)胞懸液加被檢紅細(xì)胞懸液加試劑抗體血清加試劑抗體血清離心離心相對應(yīng)的抗原抗體反應(yīng)相對應(yīng)的抗原抗體反應(yīng)觀察結(jié)果觀察結(jié)果鏡下的凝集與非凝集反向定型一、用途：當(dāng)沒有合適的標(biāo)準(zhǔn)血清，或用標(biāo)準(zhǔn)血清鑒定出現(xiàn)可疑結(jié)果時，可用此法核對。二、標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞懸液的

5、配置：分別取已知敏感性高的標(biāo)準(zhǔn)A、B、0、三型 人的紅細(xì)胞紅洗滌三次，配成5%的紅細(xì)胞懸液（若無標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞，可用5個A型，2個B型，2個O型人紅細(xì)胞，分別按型混合，代作已知標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞）三、方法1、從被檢者靜脈，制成血清或血漿。2、試管的準(zhǔn)備，同標(biāo)準(zhǔn)血清鑒定法3、在A管放標(biāo)準(zhǔn)A型紅細(xì)胞1滴，B管放標(biāo)準(zhǔn)B型紅細(xì)胞1滴，在O型管放標(biāo)準(zhǔn)o型紅細(xì)胞1滴。4、各加被檢血清2滴，分別混勻，離心后判斷結(jié)果同前。ABO血型正、反向鑒定及結(jié)果判斷血型正、反向鑒定及結(jié)果判斷 在特殊環(huán)境，沒有標(biāo)準(zhǔn)血清和標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞，僅知一個A型（或B型）人時，若用血液，怎么來鑒定人的血型？問題已知A型紅細(xì)胞+被檢者血清已知A型血清+被

6、檢得紅細(xì)胞2.微柱凝膠技術(shù) 微柱凝膠技術(shù)是液相技術(shù)與固相技術(shù)的巧妙組合，是凝膠過濾技術(shù)、離心技術(shù)、紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)技術(shù)（特異性抗體抗原反應(yīng)）的完美結(jié)合。通過對凝膠種類的選擇和凝膠濃度的調(diào)節(jié)來控制分子篩孔徑大小,使分子篩只允許游離紅細(xì)胞通過,從而達(dá)到分辯凝集紅細(xì)胞和非凝集紅細(xì)胞的目的。微柱凝膠技術(shù)是目前最易大規(guī)模推廣、最適于常規(guī)試驗(yàn)的最好血型血清學(xué)試驗(yàn)技術(shù)。微柱凝膠技術(shù)原理微柱凝膠技術(shù)原理 當(dāng)抗原抗體反應(yīng)時紅細(xì)胞發(fā)生凝集（包括已致敏的紅細(xì)胞通過抗人球蛋白的橋連作用發(fā)生的凝集），在一定的離心力作用下，凝集的紅細(xì)胞不能通過凝膠間隙而留在凝膠分離柱上層或分散在凝膠分離柱中，此為陽性反應(yīng)；而未凝集的紅細(xì)胞

7、在離心力的作用下可通過凝膠間隙而沉積于凝膠分離柱的底部，此為陰性反應(yīng)。微柱凝膠種類 （一）中性膠（又稱空白膠，僅含有葡聚糖凝膠）：用做檢測IgM抗體與相應(yīng)抗原紅細(xì)胞的反應(yīng)。如ABO反定型。 （二）特異性膠（如加入過抗-A、抗-B、抗-D等特異性抗體的凝膠）：利用包被的抗體檢測相應(yīng)抗原。 （三）抗球蛋白膠（包被了單特異性或多特異性抗人球蛋白試劑的凝膠）。用于檢測IgG抗體與相應(yīng)抗原紅細(xì)胞的反應(yīng)。微柱凝膠法做ABO、Rh血型實(shí)例 紅細(xì)胞抗原與相應(yīng)抗體在微柱凝膠介質(zhì)中發(fā)生凝集發(fā)應(yīng) ABO、Rh血型鑒定質(zhì)量控制 1、技術(shù)上的失誤 假陰性抗體試劑與紅細(xì)胞比例不對應(yīng)。紅細(xì)胞懸液過淡。 離心速度、時間不夠。

8、 忽略觀察溶血現(xiàn)象，因溶血也是陽性反應(yīng)。 假陽性離心速度過大或離心時間過長。使用了受到細(xì)菌污染的抗體試劑和鹽水。使用不干凈的試管等。 造成假陽性或假陰性的人為原因：標(biāo)本張冠李戴。未加入或使用了失效的試劑。操作者不能正確識別和解釋試驗(yàn)結(jié)果。人為的書寫錯誤。2、被檢人血清標(biāo)本的問題u嬰兒及老年人，46月嬰兒血清中ABO抗體很弱 疾病影響引起假凝集或弱凝集。 治療措施的影響u3、被檢者紅細(xì)胞的問題u紅細(xì)胞上抗原位點(diǎn)過少或抗原性減弱如弱A、弱B亞型和白血癥或惡性腫瘤患者 紅細(xì)胞獲得性異常，如O型或A型病人因腸道細(xì)菌感染使紅細(xì)胞上獲得類B抗原 細(xì)菌污染正反定型結(jié)果不一致的解決辦法正反定型結(jié)果不一致的解決

9、辦法 首先重復(fù)試驗(yàn)，不符則繼續(xù)做下列試驗(yàn)。 （1）重新采集獻(xiàn)血員和受血者的新鮮血液標(biāo)本 （2）多次洗滌被測紅細(xì)胞和標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞 （3）用抗A1、抗AB檢測紅細(xì)胞。 （4）如懷疑血清中有抗A1，可用數(shù)份A2紅細(xì)胞標(biāo)本進(jìn)行檢驗(yàn)。 （5）如果試驗(yàn)結(jié)果未見凝集，應(yīng)將正向及反向試驗(yàn)至少在室溫在40放置30min，用顯微鏡檢查核實(shí)。 （6）若懷疑是由于抗原減弱造成的正反定型不符，可進(jìn)一步做木瓜酶試驗(yàn)、直接抗球蛋白試驗(yàn)、吸收放散試驗(yàn)等加以鑒別。2、主要類型、主要類型1、系統(tǒng)組成：、系統(tǒng)組成： (1)(1)抗原：抗原：RhDRhD、RhCRhC、RhcRhc、RhERhE、RheRhe 主要成分為多肽鏈主要成分

10、為多肽鏈 (2)(2)抗體：抗抗體：抗-D-D、抗、抗-C -C 、抗、抗-c -c 、抗、抗-E -E 、抗、抗-e -e 性質(zhì)：性質(zhì)：IgGIgG性質(zhì)性質(zhì) (3)(3)基因：基因：RHDRHD和和RHCERHCE基因基因其其抗原性強(qiáng)弱依次為D、E、C、c、e，以D抗原性最強(qiáng)。 我們稱含D抗原的紅細(xì)胞為Rh陽性，不含D抗原的為Rh陰性。我國人中Rh陰性者甚為少見。 （3）天然抗體極少?？笵抗體最常見 Rh抗體抗體有完全抗體和不完全抗體兩種。完全抗體在機(jī)體受抗原刺激初期出現(xiàn)，一般屬IgM型，分子量大，不能通過胎盤，存留時間短。機(jī)體繼續(xù)受抗原刺激，則出現(xiàn)不完全抗體，屬IgG型，分子量小，可通過胎

11、盤，存留時間長，常在完全抗體出現(xiàn)后出現(xiàn)，引起新生兒溶血病。4、Rh血型的鑒定血型的鑒定 僅用抗D血清進(jìn)行鑒定，粗略地分為Rh陽性和陰性兩類。 鑒定方法鑒定方法 完全抗體：生理鹽水凝集試驗(yàn) 不完全抗體：膠體介質(zhì)法、木瓜酶法、抗人球蛋白法等5、Rh血型系統(tǒng)的臨床意義血型系統(tǒng)的臨床意義 RhRh血型系統(tǒng)所致的溶血性輸血反應(yīng)血型系統(tǒng)所致的溶血性輸血反應(yīng)：第一次輸血不必考慮Rh血型，第二次輸血需考慮Rh血型是否相同。 新生兒新生兒RhRh溶血病溶血?。篟h-的母親 若輸過血，懷孕后其孕兒為Rh+者，孕婦的抗Rh的抗體，可通過胎盤導(dǎo)致胎兒溶血。第一次孕兒為Rh+，胎兒的RBC因某種原因(如胎盤絨毛脫落)進(jìn)

12、入母體，或分娩時進(jìn)行胎盤剝離過程中血液擠入母體,孕婦體內(nèi)產(chǎn)生抗Rh的抗體。第二次妊娠時,孕婦體內(nèi)的抗Rh的抗體，通過胎盤導(dǎo)致胎兒溶血。 6、Rh血型鑒定方法：血型鑒定方法：鹽水法：單克隆IgM抗D，化學(xué)結(jié)合抗D凝聚胺法：抗球蛋白法：經(jīng)典法，改良法酶法：菠蘿酶，木瓜酶。微柱凝膠法：7、臨床意義、臨床意義（1）Rh陽性和陽性和Rh陰性輸血陰性輸血（2）RhHDN（3）中國人）中國人RH基因多態(tài)性基因多態(tài)性二、抗體篩查二、抗體篩查（卡式）（卡式）“交叉配血交叉配血”是保證輸血安全的關(guān)鍵措施。是保證輸血安全的關(guān)鍵措施。交叉配血試驗(yàn)主要方法交叉配血試驗(yàn)主要方法根據(jù)性質(zhì)分：根據(jù)性質(zhì)分：（1）鹽水配血試驗(yàn)（

13、）鹽水配血試驗(yàn)（2）凝聚胺配血試驗(yàn)（）凝聚胺配血試驗(yàn)（3）抗人）抗人球配血試驗(yàn)（球配血試驗(yàn)（4）特殊配血試驗(yàn)等（酶法、特殊介質(zhì)配血等）特殊配血試驗(yàn)等（酶法、特殊介質(zhì)配血等）根據(jù)方法分根據(jù)方法分（1）試管法（）試管法（2）卡式（）卡式（3）全自動）全自動紅細(xì)胞紅細(xì)胞紅細(xì)胞紅細(xì)胞血清血清血清血清（主側(cè)）（主側(cè)）（次側(cè)）（次側(cè)）（供血者）（供血者）（受血者）（受血者）交叉配血試驗(yàn)示意圖交叉配血試驗(yàn)示意圖兩側(cè)兩側(cè)均無凝集反應(yīng)，均無凝集反應(yīng)，可以輸血?？梢暂斞?。主側(cè)主側(cè)有凝集反應(yīng)，有凝集反應(yīng)，絕對不能輸血。絕對不能輸血。次側(cè)次側(cè)有凝集反應(yīng)，有凝集反應(yīng)，一般不宜輸血。一般不宜輸血。結(jié)果判讀配血方法的選擇配血方法的選擇1、生理鹽水法生理鹽水法：無輸血史及妊娠史：無輸血史及妊娠史2、間接抗人球蛋白法間接抗人球蛋白法：有反復(fù)輸